牛种布氏杆菌抗独特型抗体苗的研究

在筛选出能产生效价高、特异性强的抗牛种布氏杆菌单克隆抗体细胞株A_7及其对患病奶牛有一定疗效的基础上,将提纯的该单克隆抗体免疫家兔,使产生高效价的抗独特型抗体,后者经提纯和加以适当佐剂免疫豚鼠和牛。检测结果表明:免疫豚鼠和牛产生了布氏杆菌凝集抗体;免疫豚鼠强毒菌株攻击后有较好的免疫保护力,证明该抗独特型抗体具有抗原“内影像”和布病疫苗的作用。     

重组蛋白P60与LLO对单核细胞增多性李斯特菌灭活疫苗的免疫增强效果

为增强单核细胞增多性李斯特菌(简称单增李斯特菌)灭活疫苗的免疫效果,对单增李斯特菌入侵相关蛋白(P60)基因进行了克隆、表达及纯化,分别与低剂量李斯特菌溶血素O(LLO)、单增李斯特菌灭活菌混合,以MontanideISA206为佐剂制成疫苗,皮下接种家兔,并设灭活疫苗免疫组和PBS对照组,定期检测3组家兔的血清抗体、IL-4和IFN-γ水平的变化;二免后第21d每只家兔腹腔注射2×108CFU单增李斯特活菌攻毒,观察各组家兔的发病情况,每隔24h检测一次细菌在各组家兔体内的繁殖率。结果表明,添加P60和低剂量LLO重组蛋白的单增李斯特菌灭活疫苗免疫组家兔二免后抗体水平明显高于其他各组,且能诱导Th细胞向Th1型分化,抑制Th2型细胞的分化,调节抗原特异性免疫应答,能有效抵抗单增李斯特菌的感染,使细菌在家兔体内(外周血、脾)的几何增长率从64.69%降到24.06%,免疫效果明显优于灭活疫苗单独免疫组。证明P60和低剂量LLO能增强灭活疫苗的免疫保护效果。     

重组免疫融合肽Tα1-BP5对鸭坦布苏病毒灭活疫苗的免疫增强作用

为研究重组融合肽Tα1-BP5(rTα1-BP5)对鸭坦布苏病毒灭活疫苗的免疫增强作用,本试验以rTα1-BP5联合鸭坦布苏病毒灭活疫苗免疫雏鸭,检测免疫后鸭的Ig G抗体、细胞因子(IL-4和IFN-γ)的分泌水平、淋巴细胞增殖水平和血清病毒中和抗体效价,并通过攻毒试验评价其对雏鸭的免疫保护作用。结果显示,rTα1-BP5能够增强机体免疫后Ig G抗体和细胞因子的分泌水平,增强淋巴细胞的增殖水平,提升血清病毒中和抗体效价。结果表明,rTα1-BP5能够增强机体细胞和体液免疫应答水平;动物免疫保护试验结果显示,rTα1-BP5配合鸭坦布苏病毒灭活疫苗免疫雏鸭后增强了对肝的免疫保护作用。本研究为鸭坦布苏病毒灭活疫苗的新型佐剂研究开发奠定了基础。     

CpG序列对副伤寒疫苗免疫小鼠应答反应的影响

研究了CpG序列作为分子免疫增强剂 ,对常规副伤寒疫苗免疫小鼠后 ,小鼠体液和细胞免疫反应的变化情况。试验结果显示 ,CpG序列作为免疫增强剂 ,可以使免疫小鼠的总IgG含量、血清特异性抗体效价、淋巴细胞IL 2的诱生活性和脾淋巴细胞的增殖反应有明显的提高。结果表明 ,CpG序列能显著增强免疫动物对常规疫苗的免疫应答反应水平 ,可以作为提高疫苗免疫效果的有效途径     

CpG ODN对传染性腔上囊病病毒活疫苗免疫效果的影响

将120只来航系SPF鸡随机分成对照组、注射CpG ODN组、IBDV活疫苗点眼免疫组及IBDV活疫苗 CpG ODN免疫组,每组30只,于7日龄时对试验鸡进行初次免疫,21 日龄时进行加强免疫,28日龄时用IBDV野毒株攻毒。检测不同时间的IBDV特异性抗体效价、血液和脾淋巴细胞的Con A刺激指数(SI)。结果表明,CpG ODN处理后脾细胞的增殖转化能力强于血液淋巴细胞的增殖转化能力;CpG ODN的使用使血清中IBDV特异性抗体产生时间提前7 d,抗体效价升高;与对照组相比,仅用CpG ODN处理就可使1/3的鸡攻毒后迅速产生高效价(约1∶3 000)的特异性抗体,降低了发病率和死亡率,证明CpG ODN能增强IBDV活疫苗的免疫效果。     

玉米赤霉烯酮免疫检测技术研究——兔抗玉米赤霉烯酮抗体研制

本课题组制备了F-2毒素人工抗原F-2-BSA和F-2-OA。用F-2-BSA免疫家兔,获得特异性抗血清,I-ELISA测定,效价为2.56×10~4。抑制试验证明,抗体的敏感度为4.0ng/ml,对其衍生物玉米赤霉烯醇为20.0ng/ml。     

黄芪等10种天然药物对雏鸡ND-HI抗体效价免疫器官系数及增重的影响

免疫增强剂是指单独或与抗原同时使用能增强机体免疫应答的物质。目前证实有免疫增强作用的物质达几十种，如卡介苗、转移因子、干扰素等。近年来，国内外学者对天然药物包括中草药增强动物机体免疫功能的作用及机理进行了广泛研究，证明许多天然药物对动物免疫系统有广泛...     

抗弓形虫独特型抗体的研究——抗独特型抗体的制备及其免疫原性测试

用抗弓形虫单克隆杂交瘤细胞株(3C_2)扩大培养,于腹腔注射BALB/C小鼠诱生腹水,经3次饱和硫酸铵盐析,透析,DEAE-Sephadex-A_(50)离子交换层析,除菌,制得纯化McAb(Ab_1),蛋白含量2mg/ml,用福氏佐剂乳化后免疫健康家兔4次,放血分离血清,再经盐析和层析处理,制得多克隆抗弓形虫独特型抗体(Ab_2),用佐剂制备疫苗,3次免疫绵羊(5～10mg/只)2只。共采集4次血清,制得抗抗弓形虫独特型抗体(Ab_3),用IHA法检测抗体效价为1:64～1024。证实抗独特型抗体(Ab_2)是特异的,是能模拟弓形虫抗原,具有类似弓形虫免疫原性,并可激发宿主免疫应答产生抗体,进而证实独特型和抗独特型的免疫网络学说在弓形虫病免疫中的应用价值。     

Bac-to-Bac系统双表达蛋白IBDV VP2-IL-18免疫原性的研究

把用Bac-to-Bac系统单表达或双表达的蛋白IL-18、传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2和IBDV VP2-IL-18与IBD疫苗同时腿部肌肉多点注射免疫14日龄SPF鸡,14d后加强免疫1次;免疫前、后均采血检测外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞数量和ELISA抗体效价。二免后第21天用vvIBDV-GX8/99毒株进行攻毒。结果显示,VP2-IL-18、VP2+IL-18、IL-18+IBD疫苗、VP2分别免疫雏鸡后均能促进CD4+、CD8+T淋巴细胞的增殖和抗体水平的增加,能明显增强攻毒保护率,但VP2-IL-18免疫组要优于VP2+IL-18混合免疫组及其他免疫组和对照组,差异显著(P0.05)。上述结果表明,双表达蛋白VP2-IL-18不仅能够诱导机体产生细胞免疫和体液免疫,而且还可以产生较高保护率,为新型IBD疫苗的研制奠定了基础。     

表达猪瘟病毒E2蛋白的三种重组腺病毒在兔体上的免疫效力比较

为了筛选1株免疫效果好的候选猪瘟疫苗,在家兔模型上对表达猪瘟病毒E2基因的3种重组腺病毒(rAdV-E2、rAdV-optiE2和rAdV-E2UL49)进行了免疫效力评价,从抗体、攻毒后产生定型热反应以及兔脾中病毒载量等几个方面进行了比较。结果显示,rAdV-E2UL49免疫组(n=5)在免疫后第2周,3只家兔产生了特异性的猪瘟抗体,免疫后第4周,所有免疫家兔的抗体阻断率均达到了70%;相比之下,rAdV-E2和rAdV-optiE2免疫组(n=5)家兔在免疫后第4周,只有个别家兔检测到了猪瘟特异性抗体。用猪瘟弱毒疫苗(C株)攻毒后,rAdV-E2UL49免疫组家兔均未出现定型热反应,在其脾中也未检测到C株病毒RNA,其免疫效果接近于C株;rAdV-E2和rAdV-optiE2免疫组各有3只家兔出现了定型热反应,在个别兔的脾中检测到了病毒RNA。结果表明,伪狂犬病病毒UL49基因编码的VP22蛋白可以增强重组腺病毒的免疫原性,rAdV-E2UL49有望成为一株有潜力的猪瘟疫苗。     

Dot-PPA-ELISA对猪丹毒的免疫监测及抗体保护效价的测定

用猪瘟、猪肺疫、猪丹毒三联疫苗和猪丹毒 1a、2型氢氧化铝吸附甲醛灭活疫苗分别免疫断奶仔猪 ,采用Dot PPA ELISA监测免疫猪血清抗体变化。结果 ,弱毒疫苗免疫后第 7d猪丹毒血清抗体效价开始升高 ,第 2～ 3周达最高值 ;灭活疫苗免疫后第 3～ 4周抗体效价达最高值 ,且灭活疫苗免疫猪的抗体水平明显高于三联疫苗免疫猪。免疫 6周后 ,用C4 30 0 4 (1a型 )、C4 3179(1b型 )和C4 3 12 (2型 ) 3株不同血清型的猪丹毒混合强毒同时对不同抗体效价的免疫猪和对照猪进行了皮肤内接种攻毒 ,并根据其皮肤和体温反应确定 1∶32为猪能抵抗混合强毒攻击的抗体保护效价。经对 4 4头 5 0～ 6 0日龄未免疫的断奶仔猪血清检测 ,其抗体效价在 1∶32以下的猪占88.36 % ,2 78头免疫猪血清的抗体效价在 1∶32或以上的猪占 92 .81%。表明Dot PPA ELISA适用于猪群猪丹毒的免疫监测和免疫力测定。     

波摩那型钩端螺旋体N株活菌苗与猪瘟疫苗联合免疫效果观察

以波摩那(Pomona) N株活菌苗免疫地鼠、幼猪等动物,业已证明对同型强毒株的攻击有良好的保护作用,为了探索N株活菌苗与猪瘟疫苗联合使用的可能,我们分别以地鼠和家兔为试验动物,观察联合免疫后的保护力和血清显凝抗体动态,为过渡到现场使用提供科学依据,现将试验结果报告如下。     

牛病毒性腹泻病毒1型灭活疫苗的制备及其免疫效果评价

为研究针对牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV1)毒株的灭活疫苗,选用本实验室分离的分离株SMU-Z6/1a/SC/2016和SMU-DJ2/1d/QH/2015与201佐剂制备BVDV水包油包水灭活疫苗免疫BALB/c小鼠或奶牛,并通过抗体中和试验、抗体交叉保护试验及ELISA方法对免疫后的抗体消长规律进行研究。结果显示,分离株SMU-Z6/1a/SC/2016制备的灭活疫苗免疫小鼠后产生的中和抗体相比分离株SMU-DJ2/1d/QH/2015制备的灭活疫苗高,最高值为1∶177;抗体交叉保护试验表明,SMU-Z6/1a/SC/2016灭活疫苗免疫机体产生的抗体可以保护分离株SMU-DJ2/1d/QH/2015;而SMU-Z6/1a/SC/2016灭活疫苗免疫奶牛后抗体效价最高值为1∶1 413,且高于商品化疫苗组。基于分离株SMU-Z6/1a/SC/2016 E2重组蛋白建立的ELISA检测结果表明,SMU-Z6/1a/SC/2016灭活疫苗也能刺激机体产生较高水平的抗体,且整个试验过程中均高于商品化疫苗组,该结果与抗体中和试验结果一致。结果表明,以分离株SMU-Z6/1a/SC/2016制备的灭活疫苗可刺激不同动物机体产生高水平的中和抗体,这为我国BVDV灭活疫苗的研制和疫苗候选株的筛选提供了一定的数据支持和指导意义。     

肽聚糖对鲫鱼嗜水气单胞菌灭活疫苗免疫增强效果的研究

为了探讨肽聚糖在鱼类抗嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,AH)感染中的免疫佐剂作用,用添加A3α肽聚糖的饲料投喂接种F-AH疫苗的彭泽鲫(Carassius auratusvar.pengze);通过测定鲫白细胞吞噬活性、血清和体表黏液溶菌酶活性、抗体效价以及活菌攻毒后的免疫保护率,证明肽聚糖与F-AH疫苗联合使用,鲫体表黏液和血清溶菌酶活性、白细胞吞噬活性、抗体效价以及活菌攻毒后的免疫保护率均显著提高,表明A3α肽聚糖是F-AH疫苗的良好佐剂,能增强鱼类F-AH疫苗免疫应答。     

基因Ⅰ型乙脑病毒EDⅢ结构域蛋白的原核表达及其抗体制备与鉴定

为了分析和验证作为乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)亚单位疫苗研制的主要候选抗原EDⅢ结构域的免疫原性及其所产生的抗体对病毒的抑制效果,本研究利用RT-PCR方法扩增基因Ⅰ型JEV GS株EDⅢ结构域基因,构建原核重组表达载体p ET-30a-EDⅢ,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,挑取阳性克隆进行诱导表达和纯化;将纯化的EDⅢ重组蛋白免疫家兔以制备多克隆抗体,利用Western-blot和间接免疫荧光试验验证制备的家兔抗EDⅢ多克隆抗体与全病毒抗原的特异性反应,并通过噬斑减少中和试验(PRNT50)测定家兔抗EDⅢ多克隆抗体的中和抗体效价。结果表明,重组EDⅢ蛋白以包涵体的形式表达,并获得了较高纯度的EDⅢ重组蛋白,制备的家兔抗EDⅢ多克隆抗体与全病毒抗原具有良好的特异性反应,中和抗体效价为133±46.2。以上结果表明,基因Ⅰ型JEV GS株EDⅢ结构域具有良好的免疫原性,免疫动物所产生的抗体具有较高的中和抗体效价,EDⅢ结构域可作为JEV亚单位疫苗研制的候选抗原。     

结核分枝杆菌三价DNA疫苗的体液免疫与细胞免疫应答

为研究结核分枝杆菌Ag85B、MPT64和MPT83抗原DNA疫苗在奶牛体内诱导的免疫应答,以PJW4303为载体,构建了上述3种抗原基因的三价DNA疫苗。采用阴离子交换色谱方法提取3种质粒,混合后添加佐剂DDA免疫3月龄荷斯坦奶牛3次,采用ELISA法检测免疫奶牛的特异性抗体效价。利用双抗夹心ELISA定量测定免疫奶牛各月的IFN-γ浓度。结果显示,纯化后的DNA疫苗经质量检验达到动物免疫试验的要求;免疫前奶牛体内特异性抗体为阴性;三免后第30天MPT83、Ag85B和MPT64特异性抗体效价达到最高,均值分别为1∶3 200、1∶2 560和1∶2 880;同时免疫奶牛MPT83、Ag85B、MPT64三种蛋白诱导产生的IFN-γ在三免后第30天达到最高,分别为(630.25±94.45)、(341.65±76.75)、(51.38±9.80)pg/mL,阴性对照组PBS的IFN-γ浓度为(6.48±20.88)pg/mL。每个月的阴性对照与3种抗原相比,差异均极显著(P<0.01)。证实该三价核酸疫苗能同时诱导机体产生细胞免疫应答和体液免疫应答,可能有利于增强疫苗对结核病的抗性。     

清解注射液的药理研究

应用醋酸纤维薄膜蛋白电泳法及腹腔巨噬细胞功能测定法,观测清解注射液对机体免疫功能的影响;并用小白鼠和家兔炎症病理模型研究了清解注射液的解热、消炎及体内抗菌作用。结果清解注射液可使家兔的γ球蛋白明显增加,试验组试验后与试验前及与对照组相比,γ球蛋白增加２ ．８２ ％ 及６ ．５８ ％ ,均有明显差异（ Ｐ＜ ０ ．０５） ;亦可使小白鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能显著增强,试验组较对照组增加２５ ．００ ％ （ Ｐ＜ ０ ．０１） 。家兔注射清解注射液后,试验组较对照组体温有明显下降（ Ｐ＜ ０ ．０５） ;对疮疡的溃烂面和急性腹膜炎有明显抑制作用（ Ｐ＜ ０ ．０５） ,试验组家兔腹腔内脏的炎症不明显;对沙门氏菌、丹毒杆菌的生长有明显的抑制作用（ Ｐ＜ ０ ．０１） 。表明清解注射液具有增强机体的免疫功能,解热、抗菌及消炎等作用     

饲料与免疫

在探讨免疫失败和动物发病率上升的原因时,许多学者常只从疫苗接种、病原感染等直观因素方面去研究,而对饲料的营养有可能导致动物机体免疫功能下降,导致免疫失败的问题却往往忽视。本文仅就饲料中某些成分对动物机体免疫功能的影响罗列一些资料,以期引起对这方面的注意。 (一)饲料的营养成分与动物免疫功能的关系 参与免疫的器官有胸腺、脾脏、法氏囊、淋巴结、血管内皮等网状内皮系统;参与免疫的体内成份有抗体(免疫球蛋白)、补体、干扰素、白细胞、巨噬细胞、淋巴细胞等。一旦动物机体营养缺乏到一定程度,免疫器官可能     

产气荚膜梭菌β毒素和ε毒素以及腐败梭菌α毒素三联基因工程灭活疫苗的制备与免疫效力评价

为了获得高表达量的重组C型产气荚膜梭菌β毒素,鉴定其致死性和反应原性,并评价其与D型产气荚膜梭菌ε毒素和腐败梭菌α毒素共表达产物联合制成三联基因工程灭活疫苗的免疫保护效力。设计含不同酶切位点的2对引物,PCR扩增C型产气荚膜梭菌β毒素基因cpb1和cpb2,将二者克隆至pRSFDuet-1质粒,转化大肠杆菌BL21 (DE3),自诱导培养基诱导2段基因共表达。用SDS-PAGE和Western-blot以及小鼠毒性试验、抗毒素血清和中和试验对表达产物进行鉴定。将诱导收获的大肠杆菌以及D型产气荚膜梭菌ε毒素和腐败梭菌α毒素的共表达产物1∶2配比灭活制成三联灭活铝佐剂疫苗,以每只1 m L剂量皮下免疫家兔2次后,测定血清中和抗体效价,用1 MLD的C、D型产气荚膜梭菌毒素和腐败梭菌毒素分别攻击。结果显示,所构建的重组大肠杆菌BL21(pRSFDuet-cpb1-cpb2)能够表达重组β毒素,产物能够与C型产气荚膜梭菌抗毒素血清反应,且具有小鼠致死毒性,抗毒素血清可以将其毒性中和;制成联合疫苗免疫家兔,免疫血清对C型产气荚膜梭菌毒素的中和抗体效价为8 MLD/0.1 m L,对D型产气荚膜梭菌毒素的中和抗体效价为45 MLD/0.1 m L,对腐败梭菌毒素的中和抗体效价为1.5 MLD/0.1 m L;用3种毒素攻击免疫组家兔均全部保护,对照组全部死亡,达到《中华人民共和国兽药典三部(2015版)》效力检验标准。本研究为羊猝狙、肠毒血症和快疫三联疫苗的研制提供了试验基础。     

NSP-ELISA鉴别FMDV感染与免疫

利用大肠埃希氏菌表达的口蹄疫病毒 (FMDV)非结构蛋白 (NSP) 3ABC多肽作为抗原 ,建立了一种可区分FMDV感染与接种灭活疫苗免疫牛的间接酶联免疫吸附试验 (I ELISA)。通过对 336份正常牛血清、50 8份注射疫苗牛血清、60份人工感染牛血清和 58份豚鼠免疫血清的检测 ,确定了血清抗体阴性与阳性效价的临界值。试验证明 ,该方法简易、快速 ,灵敏度比VIAA AGID高