产肠毒素大肠杆菌K_(99)抗原纯化的研究

产肠毒素大肠杆菌K_99阳性菌株,在改良M培养基中于37℃振荡培养18～20小时,离心收集细菌,于4℃搅拌1小时使K_99纤毛(粘附抗原)从菌体上脱落,然后以差速离心去除菌体和大的细胞碎片。再以适当饱和度的硫酸铵沉淀纤毛抗原。最后经A—50离子交换柱层析纯化K-99纤毛蛋白质。纯化的K_99抗原在SDS聚丙酰胺凝胶电泳上呈现出一条蛋白带。以标准蛋白作标准曲线。测出其蛋白质亚单位分子量为18800,这与国外学者报导的18500的结果相符。纯化的K_99抗原在电镜下可见大量均质的柔软丝状的纤毛。K_99抗原是一个等电点为pH9.7的阳离子蛋白质,在我们做的pH8.6的琼脂糖电泳中其缓慢向阴极迁移。     

临产母猪注射大肠杆菌K_(88)-K_(99)抗原工程苗预防仔猪黄痢

1986～1987年,我们用中科院上海植物生理研究所与上海市嘉定县畜牧兽医站共同协作研制的大肠杆菌K_(88)—K_(99)抗原工程苗,在本场东风机械化养猪场、少平村、立新饲养场进行了预防仔猪黄痢试验,获得了一定的效果。 (一)材料和方法 1.大肠杆菌K_(88)—K_(99)抗原工程苗:中科院上海植生所研制,批号860715、870103;20％氢氧化铝生理盐水,农业部南京药械厂生产,批号8596029。     

预防仔猪大肠杆菌性腹泻K_(88)LTB遗传工程苗田间试验

从1985～1990年,笔者试用5批仔猪大肠杆菌K_(88)工程菌活苗在河南、陕西等地的12个猪场进行预防仔猪大肠杆菌性腹泻的免疫效力观察,并对其经济效益进行了测算,效果令人满意。     

肠毒性大肠杆菌K_(99)抗原和F_(41)抗原的纯化及特性分析

本文主要介绍了通过硫酸铵沉淀,脱氧胆酸盐处理,Spehadex G200凝胶过滤,SDS-PAGE(十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)等方法分离纯化K_(99)抗原和F_(41)抗原,并对其部分特性予以描述,还制备了特异性抗血清。     

预防仔猪大肠杆菌性腹泻K_(88)遗传工程菌苗免疫途径和剂量的研究

将61头怀孕母猪分成5个组,给第Ⅰ组皮下注射K_(88)遗传工程菌苗500亿死菌,第Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组分别口服1000亿、500亿和250亿活菌;第Ⅴ组不接种菌苗作为对照。结果各免疫组母猪所生仔猪的发病率明显下降,其中第Ⅲ组的免疫效果最佳。     

鉴定猪源性大肠杆菌K_(88)~ 株的三种简便方法

本文报道了我们用玻片凝集、抗甘露糖血凝反应和发酵棉子糖等三种方法,对相同菌株进行试验的结果。证明这三种方法用于签定猪源性大肠杆菌K_(88)~ 株都是简便有效的。它们不但可用于仔猪腹泻病的流行病学调查,而且对这种传染病的免疫预防研究也有一定的意义。 (一)材料和方法 1.菌株:菌株及其来源列在表1。     

孕母猪初生仔猪口服大肠杆菌K_(88)ITB双价工程疫苗免疫效力对比试验

用K_(88)ITB工程活疫苗(1)给怀孕母猪组于预产期之前3周,每头口服500亿活菌;(2)给初生仔猪组于出生后24小时,每头口服25亿活菌。试验结果:免疫的怀孕母猪组与初生仔猪组的仔猪腹泻发病率分别比对照组的下降了46.5％和40.9％;两免疫组的仔猪死亡率分别下降了29.4％和25.6％。说明K_(88)疫苗给怀孕母猪接种,更实用且免疫效果更佳。     

K_(88)ITB双价基因工程活疫苗安全量的试验

为了探求用K_(88)-ITB工程菌活疫苗预防仔猪大肠杆菌性腹泻所用剂量的安全范围,特进行了下述试验。     

仔猪腹泻K_(88)-LTB基因工程苗应用效果观察

仔猪腹泻Ｋ８８┐ＬＴＢ基因工程苗应用效果观察李岩金庭辉１）赵玉贵２）毕国正３）孙家勇２）张鲁安张风时姜华王忠山４）（新疆建设兵团畜牧兽医工作总站乌鲁木齐８３００６３１）仔猪黄、白痢是肠毒素性大肠埃希氏菌引起的仔猪腹泻，其发病、死亡率居仔猪疫病之首，对...     

吉林省猪源致病性大肠杆菌K_(88)~+株的检测及两种检测方法的比较

病原性大肠杆菌E.coli K_(88)抗原的发现(φrskoy,1961)大大地推动了大肠杆菌病的研究。近年来,国内外学者就K_(88)抗原的多种特性进行了大量的研究工作。现已查明:凡具有K_(88)抗原的E.coli株均能吸附在小肠粘膜的绒毛上,并产生两种肠毒素,即热稳定肠毒素(ST)和热敏肠毒素(LT)而导致仔猪发生腹泻。因此,检测病源性E.coli的K_(88)抗原无疑对流行病学的调查和免疫学的防治研究起着重要作用。     

大肠杆菌K_(99)遗传工程活疫苗对绵羊的安全性及免疫原性试验研究

用大肠杆菌K_(99)遗传工程活疫苗,按100亿活菌/只剂量于产前6周给149只妊娠杂交绵羊皮下接种,有28.86％的羊只出现临床反应,但所有免疫母羊均正常分娩,其所产羔羊均发育正常。对免疫母羊所产羔羊(66只)吮吸初乳后,给口服250亿强毒菌攻击,死亡率为4.55％,其发生腹泻持续期平均为1.78天,排菌持续期平均为2.94天。与未免疫对照组比较,差异极显著。本试验初步证明该疫苗对绵羊的安全性与免疫原性良好.     

大肠杆菌K_(99)全细胞苗的试制及其免疫效果

新生羔羊大肠杆菌病为肠道致病性大肠杆菌(简称EEC)引起的1～7日龄羔羊的传染病。此病在世界很多国家中流行,常造成重大经济损失,引起各国兽医界的重视。EEC具     

阿富汗政局近况(短论)

1月2日阿富汗伊斯兰促进会领导人拉巴尼宣誓就任阿过渡政府总统以来,阿富汗政局很不稳定,内战更趋激烈。去年4月阿游击队各派经过数轮会谈就接管喀布尔纳吉布拉政权达成协议。先由穆贾迪迪(阿富汗民族解放阵线领导人)为首的51人游击队委员会执政,两个月后交权给拉巴尼(任临时代总统),并由9个游击队领导人组成领导委员会负责全面工作。原定在拉巴尼接管4个月期间应召开“贤哲委员会”(相当于阿议会)选出新的过渡政府,但到去年底才召开。选举结果是拉巴尼获多数票当选,其任期为1年半,任务是草拟新宪法,并定于1994年中组织全国大选产生正式政府。     

口蹄疫病毒感染相关(VIA)抗原的研究和应用

口蹄疫病毒(FMDV)是一种酸敏感性的细小核糖核酸病毒,完整的病毒微粒由RNA核酸分子和包围它的四种衣壳蛋白组成。FMDV感染的细胞培养物含有四种病毒微粒:完整的140s微粒、75s中空微粒(empty Virion)、12s微粒和病毒感染相关(VIA)抗原。1966年Cowan和Graves首先论述了FMDV-VIA抗原,这种抗原存在于感染的幼仓鼠肾细胞(BHK)培养液、豚鼠和牛的组织中,不同于已知的140s和12s抗原成份,而是由病毒的感染所引起的,与病毒的复制有关,因此他们将此抗原命名为病毒感染相关(VIA)抗原(VirusInfction Association Antigen)。     

抗鸡致病性大肠埃希氏菌O_(88)单克隆抗体的研究

用纯化的鸡致病性大肠埃希氏菌O88 菌株( MG38e) 热灭活抗原免疫BALB/c 雌性小鼠,再用该菌株粗提的脂多糖尾静脉注射加强免疫后,取其脾细胞与SP2/0 细胞融合,经有限稀释法克隆,用间接ELISA 及凝集试验(IHT) 筛选,获得4 株能稳定分泌该菌株单克隆抗体的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞培养液ELISA 和IHT 效价分别为1∶100 ～1∶1000 和3 log2 ～4 log2 ;腹水效价分别为1∶100 ～1∶4000 和4 log2 ～10 log2 。这4 种单克隆抗体( E1 、E2 、E3 、E4) 均能与鉴定的7 株O88菌株发生凝集反应,E4 株还能与O78菌株发生凝集反应。用单克隆抗体对分离的45 株鸡致病性大肠埃希氏菌进行血清型鉴定,结果5 株为O88 ,与用单因子血清鉴定的结果一致。     

大肠埃希氏菌O_(128)∶K_(67)株引起幼犬腹泻的诊治

1999年 3月 ,当地某犬养殖场 3月龄幼犬先后出现以食欲不振、锐减或废绝及呕吐、粪便糊状带血为特征的疾病 ,经流行病学调查和实验室检验 ,确诊为大肠埃希氏菌Ｏ12 8∶Ｋ67感染。1　发病情况该养殖场共饲养 3月龄幼犬 14只 ,1999年 3月幼犬陆续发病 ,病初幼犬精神沉郁 ,低头垂耳 ,被毛粗乱逆立 ,食欲减退 ,呕吐 ,排灰黄色稀粪 ;发病 2— 3ｄ后病犬粪便多为粘液或呈糊状带血 ,病犬眼球下陷 ,极度沉郁。2　细菌分离与鉴定2 .1　培养2 .1.1　无菌取带血犬粪 ,直接划线分别接种于麦康凯琼脂平板、普通琼脂平板、伊红 美蓝琼脂平板和血琼脂平板 …     

犊牛腹泻大肠杆菌O_(15)菌蜕的制备及免疫原性研究

为了制备犊牛腹泻大肠杆菌O_(15)菌株菌蜕并研究其免疫原性,克隆噬菌体phiX174裂解基因E,并构建温控溶菌表达载体。制备HBTN3菌蜕,并研究其免疫原性。结果显示:成功构建了温控溶菌表达载体pBVE,并制备了HBTN3菌蜕。最大细菌裂解率是99.87%,剩余的活菌被冷冻干燥并失活。安全性试验结果证实是安全的。用扫描电子显微镜观察到菌蜕的形态完整且内容物排出。小鼠接种菌蜕会产生良好的免疫反应和保护,保护率为80%。该研究结果为防控犊牛腹泻大肠杆菌疾病奠定了基础。     

犊牛腹泻大肠杆菌O_(15)菌蜕的制备及免疫原性研究

为了制备犊牛腹泻大肠杆菌O_(15)菌株菌蜕并研究其免疫原性,克隆噬菌体PhiX174裂解基因E,并构建温控溶菌表达载体。制备HBTN3菌蜕,并研究其免疫原性。结果显示:成功构建了温控溶菌表达载体pBVE,并制备了HBTN3菌蜕。最大细菌裂解率是99.87%,剩余的活菌被冷冻干燥并失活。安全性试验结果证实是安全的。用扫描电子显微镜观察到菌蜕的形态完整且内容物排出。小鼠接种菌蜕会产生良好的免疫反应和保护,保护率为80%。该研究结果为防控犊牛腹泻大肠杆菌疾病奠定了基础。     

鹦鹉热衣原体外膜(OM)抗原特性的研究——牛羊猪流产衣原体外膜抗原组份图谱分析

应用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对提纯衣原体的外膜抗原组份作了分 析。结果表明,牛羊猪流产衣原体外膜抗原在结构组成上相似,但其组成成分及分子量具有微小差异。牛流产衣原体外膜抗原由86KD、80KD、60KD、42KD、37KD、34KD和14KD多肽组成,羊流产衣原体外膜抗原由86KD、80KD、60KD、40KD、37KD、34KD、30KD、21KD和14KD多肽组成,而猪流产衣原体外膜抗原分子量分别为86KD、80KD、60KD、42KD、37KD、34KD、30KD、21KD和14KD。在所有的衣原体中,都含有一种主要抗原——外膜主蛋白(MOMP)。它的电泳区带最大,其分子量为40～42KD,这与以前许多试验的结果相似。     

质粒指纹图谱法对猪大肠杆菌病的分子流行病学研究

对从母猪和发病仔猪肛拭标本中分离的５株普通大肠埃希氏菌和７０株致病性大肠埃希氏菌进行了质粒指纹图谱分析，并对二者的关系进行了比较。结果表明，７０株致病性大肠埃希氏菌共分为３２种质粒谱型，质粒含有４．４×１０２～９．６２×１０４ｂｐ，相同来源的菌株属于同一种质粒谱型，不同来源的菌株属于不同的质粒谱型。从母猪和发病仔猪肛拭标本中分离的大肠埃希氏菌具有不同的质粒图谱和质粒酶切图谱，提示二者之间无同源性。本试验结果亦证明质粒指纹图谱法适用于大肠埃希氏菌菌株的分型鉴定，是一种简单、快速、有效的方法。