共查询到20条相似文献,搜索用时 15 毫秒
1.
目的 研究泥土中二氧化硅对硅珠法提取现场生物物证DNA的影响。方法 泥浆悬液和稀释血混合,制成混有灰尘、泥土的生物样本以模拟现场生物物证,分别用加热裂解和胍盐化学裂解的方式进行细胞裂解,硅珠法提取DNA后用Identifiler Plus试剂盒进行PCR扩增及毛细管电泳检测,并对电泳结果进行比较;用泥浆悬液代替硅珠提取稀释血DNA,反向验证泥土中二氧化硅对硅珠法提取现场生物物证DNA的影响。结果 混有泥浆悬液的4μL、20μL稀释血加热裂解,提取扩增后得到完整STR分型,平均峰高1 969.7±376.9 RFU、9 706.7±349.8 RFU;混有泥浆悬液的4μL稀释血胍盐化学裂解,提取扩增后无法获得完整STR分型;混有泥浆悬液的20μL稀释血胍盐化学裂解,提取扩增后得到完整STR分型,平均峰高1 899.8±801.3 RFU;泥浆悬液代替硅珠提取20μL稀释血得到完整STR分型。结论 泥土中的二氧化硅在胍盐存在条件下会与DNA结合,导致硅珠法提取现场生物物证DNA的回收效率降低。 相似文献
2.
3.
应用硅珠法提取陈旧骨骼DNA 总被引:1,自引:0,他引:1
骨骼相对于人体其他的组织脏器腐败降解慢,是进行高度腐败及白骨化样本DNA检验的唯一检材。但骨骼DNA的提取比较困难,本文运用传统的硅珠法提取骨骼DNA取得了很好的效果。1材料与方法1.1样本1~4年水浸泡、土埋的股骨、肱骨等样本,来自本实验室日常检案检材。1.2方法1.2.1骨骼DNA提取用水洗净骨骼表面,晾干。锯成小块,用锉打磨内外表面。去离子水、乙醇和5%bleach浸泡、晾干,磨成粉末。取骨粉5g;加入0.5mon/L EDTA(pH8.0)溶液,搅拌均匀置于摇床上脱钙12h,去离子水洗两遍,去上清,重复4次[1];沉渣中加入适量裂解液(6mon/L GuSCN,20mo… 相似文献
4.
陈旧骨骼DNA提取方法的应用研究 总被引:6,自引:5,他引:1
在法医实践中,DNA检验已成为个体识别鉴定的常规技术。现场提取的检材中,骨组织具有耐腐败特性,当其他检材完全腐败后,骨组织仍能够作为DNA检验的重要材料。但陈旧尸骨骨组织中DNA含量少且高度降解,给提取DNA带来一定难度。本文采用较高温度脱钙,在磷酸盐缓冲液条件下经SDS-PK、GuSCN消化裂解骨细胞,含DNA的裂解产物经硅珠纯化,从1~16年的陈旧骨骼中提取到高质量DNA模板用于STR分型,成功率为95.5%。现将方法报告如下:1材料与方法1.1材料骨骼样本89根,来源于送检案件。其中完整长骨78根,断骨和骨片11根。现场条件有泥土掩埋、水… 相似文献
5.
6.
DNA数据库建设中批量样品不同DNA提取方法的比较 总被引:2,自引:2,他引:0
目的比较和选择自动化工作平台提取DNA的方法,并用于DNA数据库建设。方法用手工Chelex-100法、Biomek3000自动化工作平台结合Chelex-100法及DNA-IQTM磁珠法对实验室收集的建库滤纸血样进行DNA提取,荧光定量技术对上述3种方法提取的模板DNA进行测定;扩增产物用3100基因分析仪检测并用基因分析软件分析。结果手工Chelex-100法、自动化Chelex-100法及DNA-IQTM磁珠法提取的DNA模板浓度分别为0.593ng±0.131ng/μl、0.579ng±0.096ng/μl、0.447ng±0.056ng/μl;成功率分别为100%、98.9%、99.5%。结论本文建立的自动化Chelex-100法可用于大规模DNA数据库建设。 相似文献
7.
改良硅珠法提取DNA的灵敏性及稳定性评价初探 总被引:2,自引:0,他引:2
目的通过比较对改良硅珠法提取DNA的灵敏性和稳定性进行评价。方法样本模板使用9947A(0.1ng/μL),以30pg为等差,配置10~700pg共24种不同浓度的DNA模板,分别采用常规硅珠法与改良硅珠法提取并纯化模板DNA,在Gene Amp PCR System 9700上进行PCR扩增,ABI 3500XL型荧光分析仪进行电泳检测。结果与9947A标准品阳性对照比较,采用常规硅珠法检验,24份样本均未获得成功分型;采用改良硅珠法检验,当模板量达到550pg时,即可得到所有基因座的成功分型;模板量达到580pg及以上时,16个基因座图谱峰值均可超过200RFU,分型稳定准确。结论改良硅珠法提取DNA易于操作,稳定性较好,灵敏度优于常规硅珠法,可在法医微量物证DNA检验中应用。 相似文献
8.
9.
目的利用TE-MAGS在TECAN工作站上结合磁珠试剂盒,建立自动化工作站批量纯化现场检材DNA的方法,并探讨其在法医物证检案中的应用。方法灵敏度测试:标准品使用0.1ng/μL 9947A,用200μL TES稀释制备DNA总量0.1ng~1ng共10种的标准样品,采用本文方法提取纯化,使用IdentifilerTM试剂盒扩增,用3130XL型测序仪检测,Gene Mapper ID-X分析,分析STR图谱质量;纯化能力测试:在1ng总量的标准样品中加入腐殖酸、血红素,采用本文方法提取纯化、扩增检测,分析STR图谱质量;实际案件应用对比:收集304份现场检材,分别采用本方法和硅珠法进行提取纯化,经扩增检测,统计对比两种提取纯化方法 STR分型成功率。结果灵敏度测试:0.1ng~0.2ng总量标准样品提取的DNA模板,扩增后可检测到部分基因座STR图谱,0.3ng~1ng总量标准样品提取的DNA模板,扩增后可以得到完整的STR图谱;纯化能力测试:对混合有一定浓度的腐殖酸、血红素的标准样品的提取产物检测图谱未见明显抑制;实际案件应用对比测试:304份现场检材工作站磁珠法检出成功率(50%)高于硅珠法(40.8%)。结论本文所建立的方法缓冲范围较大,回收率高,纯化能力强,提取产物STR分型成功率高,适合现场检材批量化DNA检验。 相似文献
10.
应用DNA工作站进行批量血斑STR分型的研究 总被引:4,自引:4,他引:4
目的建立对大批量血斑样品PCR-STR基因分型检测的自动化新方法。方法应用自动化DNA工作站改良优化Chelex-100法和DNAIQ磁珠法的实验条件,建立两种批量血斑的自动化DNA提取方法;筛选确定PCR-STR反应体系的构建和PCR-STR产物测序电泳分析前处理程序。结果1104份血斑样品经Chelex-100法批量提取、Profiler Plus试剂盒扩增均一次检出9个STR基因座,定量PCR测定模板浓度均值为0.43ng/ml,荧光检测信号在200~800RFU之间;对其中114份血斑样品用DNAIQ磁珠法批量提取、同试剂盒扩增均一次检出9个STR基因座,定量PCR测定模板浓度均值为0.7ng/ml,荧光检测信号在1000~2000RFU之间;对其中50份血斑进行自动和手动Chel-ex-100检验法比较,成功率分别为100%和98%,且前者等位基因峰高信号更均衡。结论本文建立的自动化DNA工作站批量检测方法,在成功率、稳定性、均一性等方面具有优势。 相似文献
11.
12.
13.
14.
DNA数据库建设中批量样本直接扩增检验法的应用 总被引:2,自引:4,他引:2
目的研究批量样本直接扩增法在DNA数据库建设中的应用。方法打孔机打取血滤纸600份,剪取芝麻大小的口腔拭子300份,放入96孔扩增板,加入扩增试剂后直接扩增,并对其中200份血滤纸用磁珠法,100份口腔拭子用96孔板Chelex-100法,经DNA提取后扩增检验进行比较。结果血滤纸采用直接扩增法及磁珠法STR检测成功率均为100%;口腔拭子采用直接扩增法的成功率为95%,采用96孔板Chelex-100法的成功率为94%。结论血滤纸和口腔拭子通过直接扩增均能获得很好的DNA分型结果,该方法省时省力,可用于DNA数据库建设。 相似文献
15.
目的对3种方法提取骨骼DNA的效果进行比较,为实际应用中选择方法提供参考。方法应用骨骼孵化液法、DNA Investigator试剂盒法和CTAB法对同一骨骼样本进行脱钙、消化、提取DNA,用紫外分光光度计检测DNA的浓度值;使用Identifilerplus试剂盒进行PCR扩增,3130xl型遗传分析仪检测分型,并用SPSS 19.0软件对各项实验结果进行统计分析。结果 1g骨粉样本经上述3种方法提取,得到的DNA浓度分别为26.53ng/μL±5.47ng/μL、23.63ng/μL±4.56ng/μL、14.93ng/μL±3.88ng/μL;单因素方差分析表明3组数据之间差异性具有统计学意义。PCR扩增后电泳检测结果显示,骨骼孵化液法和DNA Investigator试剂盒法基因座检出率和峰值大致相同,均优于CTAB法。结论本文比较的3种方法均可用于骨骼样本的实际检案,检出率较高的两种方法可作为优选方案。 相似文献
16.
微量检材DNA提取方法 总被引:4,自引:0,他引:4
法医DNA鉴定中常见的微量检材,是指含有微量核DNA的降解检材(例如陈旧骨骼等)和附着载体上生物组织量少的检材。为了获得“大量”的检材DNA就必须增加检材用量,扩大反应体系。应用大反应体系提取微量检材DNA时,常出现提取溶液DNA含量过低,而不能获得DNA沉淀。如果不采用有效的方法,就会由于提取操作不当而引起DNA损失,导致PCR反应失败,直接影响案件的侦破和法庭证据的科学性。本文应用正丁醇浓缩法成功地解决了微量检材DNA的提取问题,在实际的案件鉴定中取得了满意的结果。1材料与方法1.1微量检材所用微量检材均来自案件鉴定所用… 相似文献
17.
18.
19.