伪狂犬病毒弱毒株培育的研究

伪狂犬病(Pseudorabies)是伪狂犬病毒引起的各种家畜和野生动物的急性、致死性传染病。1902年匈牙利科学家奥者士奇(Aujeszky)发现此病以来,世界许多国家都有发生。我国不少地区有发生本病的报道。但是,伪狂犬病毒弱毒疫苗株的培育研究未见报告。为了防制本病,我们于1979年采用选斑和低温法选育伪狂犬病弱毒株,经三年时间,育成伪狂犬病毒闽A弱毒株。     

猪伪狂犬病毒基因分型PCR检测方法的建立

为建立一种基因Ⅰ型和Ⅱ型猪伪狂犬病毒(PRV)鉴定方法,对PRV全基因组序列进行生物信息学分析,在Ⅱ型PRV gC基因上鉴定到一段不同于Ⅰ型PRV的47 bp长的多位点稳定差异基序.该方法能特异性区分基因Ⅰ型和Ⅱ型PRV,检测猪瘟病毒、猪德尔塔冠状病毒、猪流行性腹泻病毒、猪蓝耳病病毒、猪圆环病毒2型及3型时呈阴性.两种...     

家兔波氏杆菌对常用药物敏感性测定

近几年来,随着养兔业的发展,我省家兔波氏杆菌病的流行较为严重,给养兔业造成很大的经济损失。为选择有效药物对该病进行防治,我们采用我省的地方株对常用的抗生素和磺胺类药物进行了敏感性测定。     

塑料微滴板上的细胞培养技术及其在生物鉴定中的应用

细胞培养的常规方法一般多采用玻璃器皿。对于那些在细胞培养上进行的病毒鉴定和血清学试验来说,带螺旋帽的玻璃试管是最常用的培养单元。这种培养方法需要相当数量的昂贵的培养液和细胞,而试验的本身并不需要那么多。玻璃试管使用起来很麻烦,还要占用很大面积的架子和温室空间。还有一个缺点是瓶盖要取下又要重新盖上,这不仅仅是单调乏味的而且由于玻璃可能破碎而带来危险。因此,这种操作费时间,不经济,还需要一大批技术人员,没有几个病毒实验室能胜任广泛的流行病学研究工作。     

狂犬病毒的无毒变异株SAG的特征及应用前景

狂犬病毒的无毒变异株SAG(SAD-Avirulent-Gif),是法国一实验室由狂犬病毒株SAD(Street-A labama-Dufferin)的衍生株SAD Bern中分离出来的。此株的最大特点是没有致病性,对免疫动物具有很好的免疫原性,十分稳定,不具有返祖现象,是一个比较理想的疫苗株。在狂犬病的防治上,有着良好的应用前景。SAG是根据特异单抗对狂犬病毒糖蛋白抗原位点中和作用具有抵抗性而筛选出来的。Lafon等(1983)应用一系列特异单抗识别狂犬病毒的糖蛋白,结果有两个较大的抗原位点被确认,即抗原位     

环形泰勒虫裂殖体感染细胞培养技术的改进

在环形泰勒虫裂殖体胶冻细胞苗工厂化生产中,将小转瓶培养改为大转瓶培养,在此基础上又用成年健康黑白花牛血清代替犊牛血清,加犊牛血清的培养液收获细胞数为１４６ ．０ 万个／ ｍ Ｌ,而加成年牛血清的培养液在２ 次细胞培养中收获细胞数分别达１５３ ．８ 万个／ ｍ Ｌ 和１６２ ．０ 万个／ ｍ Ｌ。     

猪源性大肠埃希氏菌对抗菌药物的敏感性测定

从甘肃省13 个地区( 州、市) 规模化猪场和专业户猪场分离出大肠埃希氏菌118 株,按世界卫生组织( W HO) 推荐的RirbyBauer 氏方法,用18 种抗菌药物对其敏感性进行了测定。结果:抑菌作用最强为诺氟沙星,高敏菌株占89 .0 % ;抑菌作用最差为四环素,耐药菌株占100 % 。     

5种消毒药对鸡传染性腔上囊病病毒的杀灭效果试验

用市售的腆类化合物、氯制剂、双季铵盐类化合物、酚类制剂和醛类制剂与鸡传染性腔上囊病病毒(IBDV)相混合,在4℃和30℃作用24 h,用1000 ID50的剂量作用后的病毒液感染23日龄健康AA鸡.感染后72 h扑杀试验鸡,取其腔上囊,用IBD-ELISA快速诊断盒检测IBDV抗原,仍呈阳性反应;用3 mL/L的甲醛溶液与IBDV病毒液混合,在37℃作用24、36和48 h后,按以上剂量感染鸡,感染后72 h扑杀,取其腔上囊,用IBD-ELISA快速诊断盒检测IBDV抗原,全部呈阴性.     

鸡大肠埃希氏菌的药物敏感性测定

鸡大肠杆菌病是由致病性大肠埃希氏菌 (Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ)引起鸡的一种细菌性疾病 ,近年已成为养鸡业主要疾病之一。目前对该病主要是利用抗菌药物进行预防和发病时的治疗 ,由于大肠埃希氏菌血清型繁多、且复杂 ,同时各地区血清型存在较大差异 ,给该病的防治带来很大困难。本试验对分离的 17株大肠埃希氏菌用氟哌酸等 11种药物进行药敏试验 ,旨在为大肠杆菌病的临床治疗提供用药参考。1　材料与方法1.1　试验用菌株　 17株大肠埃希氏菌均从东北地区发病鸡场分离获得 ,并经生化试验鉴定 ,编号为 1— 17号。1.2　培养基　营养琼…     

鹅裂口线虫感染性幼虫对干燥光线和消毒药的耐受力试验

(一)材料与方法 1.感染性幼虫:取人工感染鹅裂线虫鹅的粪便,在25℃条件下孵化1周,用贝尔曼氏装置收集感染性幼虫,并离心清洗备用。 2.干燥对感染性幼虫的影响:将盛有40～50ml MgCl_2·6H_2O、Na_2Cr_2O_7·H_2O、NaCl、K_2SO_4的饱和溶液及氧化硅胶分别装入100ml的试剂瓶中。当试剂瓶被密封,置于25℃条件下时,试剂瓶气相空间的湿度分别为32.5％、53.0％、75.5％、97.5％和0。     

喹乙醇对禽致病菌的敏感性试验

(一)试验材料1.药品:①喹乙醇:广东省京南兽药厂生产,批号为881211。②青霉素G钾:黑龙江省生物制品二厂生产,批号为8811126。③硫酸链霉素:华北制药厂生产,批号为88303。2.菌种:①鸡白痢杆菌、变形杆菌由华南农业大学兽医系微生物教研室提供。②金黄色葡萄球菌由华南农业大学兽医院提供。③禽大肠杆菌(E.coli 078)、禽巴氏杆菌由中国兽药监察所提供。④兽疫链球菌(C_(55116))由广东省兽医研究所提供。(二)试验方法     

柔嫩艾美耳球虫DF-1细胞培养体系的建立及应用

为了建立柔嫩艾美耳球虫的鸡胚成纤维传代细胞(DF-1)培养体系,并应用于柔嫩艾美耳球虫子孢子的细胞入侵活力检测,将CFDA-SE标记的子孢子接入DF-1细胞,利用流式细胞仪测定子孢子的细胞入侵活力。比较了37℃和41℃培养温度下,子孢子对DF-1、MDBK、Vero、BHK、MDCK五种细胞的入侵活力。优化了在子孢子入侵活力检测时,DF-1细胞最佳培养条件。结果表明,柔嫩艾美耳球虫子孢子在DF-1细胞中可发育为第一代裂殖子。在不同培养温度下,子孢子对DF-1细胞的入侵活力均高于其他细胞。优化后的DF-1细胞培养体系的培养程序为:用含100mL/L胎牛血清的DMEM稀释DF-1细胞,以每孔1×105个细胞铺被24孔板,37℃、50mL/L CO2培养24h后,用含50mL/L胎牛血清的DMEM换液后,每孔接入3×105个子孢子,41℃、50mL/L CO2培养8～12h,收集细胞进行检测。     

伪狂犬病病毒gG-gD基因片段的扩增及克隆和序列测定

以伪狂犬病病毒(PRV)HB-9304株的基因组为模板,利用聚合酶链反应(PCR)对其gG-gD基因片段进行扩增,获得了预定大小的片段,将这一片段克隆到质粒载体pPK中.对重组质粒pPKGD进行限制性内切酶分析、PCR鉴定和克隆片段的序列测定,证实了克隆片段的可靠性.     

三种不同方法检测猪伪狂犬病病毒血清抗体的比较

三种不同方法检测猪伪狂犬病病毒血清抗体的比较吴斌陈焕春方六荣李学伍周复春洪文洲（华中农业大学畜牧兽医学院武昌４３００７０）伪狂犬病是由伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）引起的一种传染病，给养猪业带来巨大损失。对该病的诊断方法主要有病毒分离鉴定、动物接种试验、血清...     

临床败血型死猪分离的十四株猪丹毒杆菌对常用抗菌素及化学药物敏感性测定

抗菌素及化学药物,在兽医临床实践中,广泛使用已有近三十年的历史。耐药菌株的陆续发现及报道有逐渐增多的趋势。因此探索它们对临床常见传染病病原体的确切抑菌效能,不仅在医疗实践上有指导意义,而且在理论上为我们进一步了解各种细菌耐药性产生的机理,也可提供一定线索。     

不同抗蠕虫措施后的经济效益测定

笔者在以前的一系列试验中,比较了控制释放技术和常规抗蠕虫措施在蠕虫控制效果和对绵羊生产性能影响的差异。本文探论了这两种抗蠕虫措施实施后的经济效益问题。     

伪狂犬病病毒LAMP检测方法的建立与应用

为了能快速、高效地检测猪感染伪狂犬病病毒(PRV)的情况,本研究采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术建立了一种检测伪狂犬病病毒的可视、灵敏、快速、特异、经济的方法。结果表明,通过LAMP检测,在65℃条件下反应60 min就能得到检测结果,检测的灵敏度达到1×100copy,比常规PCR敏感100 000倍,并可经SYBR GreenⅠ染色后通过眼观就可判定结果。本试验对8个临床样本进行了检测,结果显示,LAMP检测方法比传统PCR更具有实用性,适合基层养殖场使用。相对传统RT-PCR和荧光RT-PCR而言,LAMP检测只需要45~60 min,本研究能在更短的时间确定检测猪感染伪狂犬病病毒的情况,并具有高灵敏度。     

宫炎清对奶牛子宫内膜炎病原菌的敏感性试验

引起奶牛子宫内膜炎导致不孕的病原区系为链球菌、大肠杆菌、葡萄球菌、化脓棒状杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌等。宫炎清的有效成分为间甲酚磺基酸和甲醛的凝聚物,对细菌、真菌、原虫有触杀作用,并有良好的消炎能力,而且不会产生抗药性。本试验进行了宫炎清对奶牛子宫内膜炎病原菌的最小抑菌浓度(MIC)测定,并与同类进口药露它净作了比较。(一)材料1.药物:①官炎清:批号90415,由华南农业大学兽医药理研究室提供。②露它净(Lotagen)批号152181,德国BYK药厂出品。2.受试菌种:①大肠杆菌O_(88)B_7由广州市卫生防疫站提供。②金黄色葡萄球菌,由本校兽医微生物教研室提供。③变形杆菌、编号062,溶血性链球菌、编号045,绿脓杆菌,由中山医科大学微生物教研室提供。     

伪狂犬病病毒gE/gB PCR鉴别方法的建立及其应用

为了检测伪狂犬病病毒(PRV)潜伏感染及确定病毒潜伏的主要部位,建立了能鉴别PRV野毒株和gE基因缺失疫苗株gE/gB的PCR诊断方法。结果表明,所建立的PCR 特异性强、敏感性高、稳定性好,能用于病毒潜伏感染的检测;同时还确定PRV潜伏感染的主要部位是三叉神经节、扁桃体、嗅球、脑干、脑桥和咽黏膜。     

应用电镜技术对猪瘟病毒的观察

应用电子显微镜技术早期观察猪瘟病毒,由于该病毒不能在体外增殖而受到了限制,另一方面,由于感染猪本身的组织和血清被其它病原体污染也妨碍了研究,Reagan和他的同事们在感染猪血清中发现病毒粒子为22～30nm(平均为27nm),Ageev在感染该病毒猪红细胞表面上和血清中检出直径为20～44nm球形粒子,经组织培养分离猪瘟病毒的早期报告为20～80nm,但以后对生长在组织培养物上的纯化了的猪瘟病毒报告是球形的,直径为37～67nm,并带有囊膜粒子,偶尔在病毒囊膜上石到呈不规则排列的纤突。