公英乳康涂膜剂不同配方的抑菌作用

用公英乳康涂膜剂的3种不同配方A、B、C及六茜素和克林霉素进行乳牛乳腺炎主要致病菌金黄色葡萄球菌和无乳链球菌的对比抑菌试验。结果显示,A、B、C 3 种配方对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)依次为125、250、250 mg/mL;对无乳链球菌的MIC分别为250、500、500 mg/mL;而六茜素和克林霉素对金黄色葡萄球菌的MIC分别为400和25μg/mL,它们对无乳链球菌的MIC分别为400和50μg/mL。结果表明,公英乳康涂膜剂对2 种致病菌的抑菌作用不如六茜素和克林霉素,但其也有较好的抑菌作用,且配方A的抑菌效果强于B和C。     

中草药对乳牛乳腺炎主要病原菌的体外抗菌活性试验

采用试管二倍稀释法,测定了金银花、连翘和蒲公英等12种中草药及其复方制剂对乳牛乳腺炎主要病原菌(大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和停乳链球菌)的体外抗菌活性(MIC和MBC)。试验结果表明,金银花、连翘和蒲公英及其复方制剂对这4种病原菌均具有较强的体外抗菌活性。     

司帕沙星体外抗菌活性的试验

应用试管二倍稀释法测定司帕沙星对大肠埃希氏菌、沙门菌、链球菌、金黄色葡萄球菌和禽败血霉形体等病原微生物的最小抑菌浓度 (MIC)和最小杀菌浓度 (MBC) ,并与 4种氟喹诺酮药物及 3种其他抗菌药物相比较。结果表明 ,司帕沙星对大肠埃希氏菌、沙门菌、链球菌、金黄色葡萄球菌和禽败血霉形体均有良好的体外抗菌活性 ,优于其他对照药物     

复方白毛藤注射液的抑菌效果及对小鼠免疫功能的影响

采用试管 2倍稀释法对复方白毛藤注射液的最小抑菌浓度 (MIC)和最低杀菌浓度(MBC)进行了测定 ,并采用免疫学方法进行了复方白毛藤注射液对小白鼠免疫功能影响的试验。结果表明 ,该制剂对链球菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌、巴氏杆菌、大肠埃希氏菌的最小抑菌浓度和最低杀菌浓度分别为 1.5 6、1.5 6、12 .5 0、12 .5 0、2 5 .0 0mg/mL和 3.13、3.13、2 5 .0 0、2 5 .0 0、5 0 .0 0mg/mL;该制剂能使小白鼠白细胞总数、T淋巴细胞百分率、血清总蛋白、血清球蛋白、胸腺指数和脾指数增加 ,高剂量复方白毛藤注射液 (0 .2mL/只 )组与对照组相比 ,上述指标于停药后 2 4h差异显著 (P <0 .0 5 ) ,停药后 7d差异极显著 (P <0 .0 1)。     

复方蒲公英对金黄色葡萄球菌耐药质粒的体外消除试验

通过以复方蒲公英注射液为消除剂、十二烷基硫酸钠为对照组消除剂,以从患有乳腺炎乳牛的乳汁中分离的多重耐药菌株为靶细菌进行耐药质粒体外消除试验,用质粒DNA抽提与琼脂糖凝胶电泳方法观察复方蒲公英注射液对该耐药菌株质粒的影响,探讨了复方蒲公英注射液作为消除剂的可能性。结果显示,复方蒲公英注射液对耐药金黄色葡萄球菌作用24h,其1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC的消除率分别为2%、2.6%、3.6%,延长作用时间至48h,其1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC的消除率分别为2.8%、3.6%、4.4%。证实,复方蒲公英注射液对金黄色葡萄球菌耐药质粒有消除作用,可用于临床治疗耐药金黄色葡萄球感染。     

奶牛乳房炎三种主要链球菌多重PCR检测方法的建立

链球菌是引起奶牛乳房炎的重要病原菌,其中无乳链球菌(S.agalactiae)、停乳链球菌(S.dysgalactiae)和乳房链球菌(S.uberis)是奶牛乳房炎主要的致病性链球菌。为同时、快速地检测牛奶样品中这3种重要链球菌,本研究根据无乳链球菌sip基因、停乳链球菌Mig基因及乳房链球菌pauA基因设计特异性引物,同时以细菌16S rRNA基因为内参,建立了多重PCR检测方法,并进行条件优化。结果显示,该方法最佳退火温度为58℃,最佳扩增循环数为25个循环,本方法同时检测无乳链球菌、停乳链球菌及乳房链球菌时,检测限分别为1×10³CFU/m L、1×10³CFU/m L及1×10⁴ CFU/m L,灵敏性高。该方法对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌、单核细胞增生李斯特菌等10种菌均无交叉反应,特异性好。模拟样品结果显示,当奶样中3种菌的初始浓度均为1 CFU/m L时,37℃增菌6 h即可检出乳房链球菌,增菌8 h以上3种菌可全部检出。结果表明,该多重PCR检测方法具有较好的特异性和灵敏性,对同时快速检测...     

红茂草生物碱抑菌活性的测定

用醇提法提取红茂草生物碱,经石英色谱柱层析分离、结晶后测定了红茂草生物碱对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、粪肠球菌的体外最小抑菌浓度(MIC)、抑菌率和半数抑菌浓度(IC50)。结果显示,红茂草生物碱对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、粪肠球菌的MIC分别是0.22、0.18、0.18、0.30mg/mL;对这4种供试菌的IC50分别是0.180 7、0.140 70、.140 70、.260 5 mg/mL。表明,红茂草生物碱对这4种细菌具有明显的抑制作用。     

快速检测奶牛乳房炎四种病原菌的多重PCR方法的建立及应用

奶牛乳房炎是目前世界上困扰奶牛业经济效益及其发展的主要疾病之一。由于现有的检测手段繁琐复杂,所以急需一种特异敏感的检测手段对奶牛乳房炎进行快速、准确的诊断。本试验参照G en Bank发表的序列,在大肠杆菌、无乳链球菌和金黄色葡萄球菌各自保守的16-23S r RN A区域及白色念珠菌的18S r RNA区域设计了4对特异性引物,建立了检测大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和白色念珠菌等4种乳房炎主要致病菌的多重PCR方法。结果表明:本试验建立的多重PCR方法具有较好的特异性和敏感性,对参与试验的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌及白色念珠菌均能扩增出各自的阳性条带并且多重PCR检测的敏感度分别为1×102CF U/mL、1×104CFU/mL、1×105CFU/mL和1×102 CFU/mL。     

草豆蔻有效部位对奶牛乳腺炎病原菌的抗菌活性研究

采用琼脂平板2倍稀释法测定了草豆蔻水提物、醇提物、醇-水提取物、挥发油4个活性部位对15个不同种属120株奶牛乳腺炎病原菌的最低抑菌浓度,用SPSS17.0软件中单因素方差分析法比较分析了4个活性部位分别对金黄色葡萄球菌、鲁氏不动杆菌和芽孢杆菌等11种菌株的抑菌活性的强弱;采用小鼠全身感染模型分析了草豆蔻油对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的体内抗菌活性。结果显示,草豆蔻4个活性部位对受试菌有不同程度的体外抗菌活性,且对革兰氏阳性菌的抗菌活性较对革兰氏阴性菌的活性强;在4个活性部位中,以挥发油的体外抗菌活性最强,除对4株单胞菌和7株大肠杆菌无抑菌活性外,对其余109株受试菌均有较强的活性,对革兰氏阳性菌的MIC50和MIC90分别为0.94～1.87mg/mL和0.47～1.87mg/mL,对革兰氏阴性菌的MIC50和MIC90均为0.47～29.92mg/mL。草豆蔻油在体内对金黄色葡萄球菌感染模型小鼠和大肠杆菌感染模型小鼠有强的保护作用。高、中、低3个剂量对金黄色葡萄球菌感染模型小鼠的保护率分别为100%、90%、80%,对大肠杆菌感染模型小鼠的保护率分别为100%、90%、40%,呈明显量效关系。结果表明,草豆蔻挥发油是中药草豆蔻对奶牛乳腺炎病原菌的抗菌活性物质,可用于奶牛乳腺炎等感染性疾病的防治和食品防腐剂的开发。     

硒化甘草多糖联合抗生素体外抑菌作用及体内免疫调节作用研究

旨在研究硒化新疆乌拉尔甘草多糖(Se GUP)对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌是否有较好的体外抑菌作用,与抗菌药物联合使用是否能够增强抗菌药物的抑菌效果及其免疫相关活性研究。采用微量法检测Se GUP与抗生素的最小抑菌浓度(MIC),筛选出3种较为敏感的常用抗生素;采用棋盘法测算出Se GUP与所筛选的对细菌敏感的抗生素进行联合后的FIC指数,判定Se GUP与抗生素联合作用性质;采用ELISA法,测定不同剂量Se GUP组小鼠血清中Ig G、IL-1、IL-2含量,确定其免疫活性调节作用。体外抑菌试验结果表明,Se GUP对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有一定的抑制作用,其MIC值分别为100、200 mg/mL;头孢噻呋钠、卡那霉素与Se GUP联合作用后,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌耐药菌株均表现为一定的相加作用,其MIC值分别降低到25、50、50、50 mg/mL,而与恩诺沙星进行联合后的抑菌效果并不明显,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌耐药菌株表现为无关作用。免疫试验结果表明,不同剂量的Se GUP对小鼠血清中Ig G、IL-1和IL-2的含量均有不同程度的提高作用,其中,高、中剂量组的Se GUP的提高作用显著(P0.05),与免疫抑制组相比差异极显著(P0.01)。由此可知,一定剂量的Se GUP与头孢噻呋钠、卡那霉素联合后,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌具有较好的抑菌效果的同时,能减少抗生素的使用剂量,并且Se GUP能提高小鼠血清中相关细胞因子含量,增强机体免疫力。本次试验结果为充分挖掘中药中有效成分提供了更多理论依据,为寻找更多有效防治金黄色葡萄球菌、大肠杆菌病的药物组合和对抗及减缓多重耐药菌株出现提供了新思路。     

莲子芯水煎剂抗新城疫病毒和抑菌作用观察

将莲子芯水煎剂和新城疫病毒分别接种于随机分为 5组的 10日龄鸡胚尿囊腔 ,3 7.5℃孵化 96h ,收集尿囊液 ,测定血凝效价。结果表明 ,无论采用何种给药途径 ,莲子芯水煎剂在鸡胚内 ,均对感染 2 0EID50 的新城疫病毒增殖具有显著的抑制作用。将莲子芯水煎剂 (1.0 0g/mL)按原液、0 .5 0g/mL、0 .2 5g/mL ,用挖孔法测定其对大肠埃希氏菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、巴氏杆菌的抑菌直径。结果 ,该水煎剂对以上菌株均有不同程度的抑菌作用 ,其中浓度为 1.0 0g/mL的水煎剂对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌的抑菌直径分别为 18、2 0mm。     

阿莫西林杀灭金黄色葡萄球菌的药代动力学和药效动力学关系

建立了体外药代动力学和药效动力学(PK-PD)模型,测定了阿莫西林杀灭金黄色葡萄球菌的药代动力学参数和药效动力学参数,并研究了它们之间的关系.结果表明,T＞最低抑菌浓度(MIC)是衡量阿莫西林药效的关键指标,当阿莫西林浓度超过MIC时,初始浓度0.4～3.2μg/mL对杀灭金黄色葡萄球菌的药效没有影响.在消除半衰期为2 h的模型内,T＞MIC在7.40 h以上时阿莫西林对金黄色葡萄球菌有较好的杀灭效果;在消除半衰期为5.5 h的模型内,T＞MIC在11.76 h以上时阿莫西林对金黄色葡萄球菌有较好的杀灭效果.     

Metalnikowin类抗菌肽MLP的设计及其抗菌活性的测定

为设计新型Metalnikowin类抗菌肽并评价其抗菌活性,依据抗菌肽Metalnikowin的作用机理和氨基酸组成,通过人工方法设计合成Metalnikowin类抗菌肽(Metalnikowin-like antibacterial peptide,MLP)并测定其体外和体内抗菌活性。体外抑菌试验结果显示,抗菌肽MLP对鸡致病性大肠杆菌O 1、猪致病性大肠杆菌K 99(A TCC39302)、鸡白痢沙门菌(ATCC10398)、猪霍乱沙门菌(ATCC13312)、禽多杀性巴氏杆菌(CVCC474)和金黄色葡萄球菌(ATCC29213)均具有很好的抑菌活性,其对这6种细菌的最小抑菌浓度分别为1.56、6.25、3.12、6.25、1.56和12.5 g/m L。酸稳定性试验结果显示,抗菌肽MLP在p H值为5~6时活性最高。热稳定性试验结果显示,抗菌肽MLP 100℃加热40 min后仍具有抑菌活性。在对雏鸡感染鸡大肠杆菌和小鼠感染金黄色葡萄球菌的体内疗效试验中,抗菌肽MLP显示了较好的治疗效果。本研究为临床上设计有效的Metalnikowin类抗菌肽提供了参考数据。     

英黄散水煎液对奶牛乳房炎致病菌的体外抑菌及抗炎效果的观察

为探讨复方中药英黄散水煎液对奶牛乳房炎致病菌的抑菌能力及抗炎效果,首先对乳房炎患牛奶中的致病菌分离鉴定,通过牛津杯法进行药敏试验,采用常量肉汤稀释法测定英黄散对不同致病菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度;将小鼠随机分为英黄散低、中、高剂量组,阿司匹林药物组,空白对照组,然后开展二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验、小鼠棉球致肉芽肿试验、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性变化试验,观察英黄散的抗炎作用。结果,经分离鉴定,得到3种致病菌,分别为无乳链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌;这3种致病菌对英黄散均具有一定的敏感性;其最小抑菌浓度依次为31.25、62.5、125 mg/m L;最小杀菌浓度依次为62.5、125、250 mg/m L。抗炎试验结果显示,与空白对照组相比,英黄散高剂量组及阿司匹林药物组能明显减轻小鼠耳廓肿胀度且差异极显著(P0.01),中剂量组差异显著(P0.05);英黄散高剂量组与阿司匹林组小鼠腹腔渗透液吸光度明显低于空白对照组且差异极显著(P0.01),中剂量组差异显著(P0.05);英黄散低剂量组及阿司匹林组肉芽肿增重明显低于空白对照组且差异极显著(P0.01),中剂量组差异显著(P0.05)。上述结果表明,英黄散具有良好的抑菌能力及抗炎效果。     

宫炎清对奶牛子宫内膜炎病原菌的敏感性试验

引起奶牛子宫内膜炎导致不孕的病原区系为链球菌、大肠杆菌、葡萄球菌、化脓棒状杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌等。宫炎清的有效成分为间甲酚磺基酸和甲醛的凝聚物,对细菌、真菌、原虫有触杀作用,并有良好的消炎能力,而且不会产生抗药性。本试验进行了宫炎清对奶牛子宫内膜炎病原菌的最小抑菌浓度(MIC)测定,并与同类进口药露它净作了比较。(一)材料1.药物:①官炎清:批号90415,由华南农业大学兽医药理研究室提供。②露它净(Lotagen)批号152181,德国BYK药厂出品。2.受试菌种:①大肠杆菌O_(88)B_7由广州市卫生防疫站提供。②金黄色葡萄球菌,由本校兽医微生物教研室提供。③变形杆菌、编号062,溶血性链球菌、编号045,绿脓杆菌,由中山医科大学微生物教研室提供。     

罗非鱼源无乳链球菌双重PCR快速检测方法的建立

根据GenBank中罗非鱼源无乳链球菌荚膜多糖的cpsF基因和CAMP因子的cfb基因序列,设计2对特异性引物,通过对反应体系和反应条件优化,并进行特异性试验、敏感性试验及人工感染罗非鱼组织样品检测,建立了快速检测无乳链球菌的双重PCR方法。结果显示,仅无乳链球菌能扩增出cpsF和cfb两条特异性条带,而海豚链球菌、金黄色葡萄球菌、鮰爱德华氏菌、嗜水气单胞菌、杀鲑气单胞菌、豚鼠气单胞菌、嗜麦芽寡养单胞菌无条带检出;经敏感性试验,最小模板检出量为7.632×10-2ng/μL;同时对30尾人工感染无乳链球菌的罗非鱼肝和肾组织中细菌DNA进行双重PCR检测和细菌分离鉴定,检出的阳性结果一致。证实,所建立的方法具有快速、特异、灵敏的优点,适用于对罗非鱼等无乳链球菌的感染病例进行流行病学监测。     

金黄色葡萄球菌和大肠杆菌感染对BMEC炎性因子mRNA表达的影响

为了探讨金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)在不同时间点对奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)相关炎性因子转录水平的调节作用。本试验通过体外培养BMECs并对其进行免疫细胞化学方法鉴定。选取纯化后的原代BMECs,分别加入活菌比(MOI)为100∶1的最佳浓度的金黄色葡萄球菌或大肠杆菌对细胞进行感染,分别在感染后第0、3、6、9、12小时采样,采用qRT-PCR法检测IL1R1、IL-1β及TNF-α基因mRNA的表达情况。结果显示,在添加1×102CFU/m L金黄色葡萄球菌作用至第6小时IL1R1基因相对表达量显著高于其他时间点(P0.5);在添加1×104CFU/m L金黄色葡萄球菌作用至第9小时,IL-1β基因相对表达量显著高于其他时间点(P0.5);在添加1×103CFU/m L金黄色葡萄球菌作用至第12小时,TNF-α基因相对表达量显著高于其他时间点(P0.5)。在添加1×101CFU/m L大肠杆菌作用至第6小时,IL1R1基因相对表达量显著高于其他时间点(P0.5);在添加1×103CFU/m L大肠杆菌作用至第9小时,IL-1β基因相对表达量显著高于其他时间点(P0.5);在添加1×104CFU/m L大肠杆菌作用至第12小时,TNF-α基因相对表达量显著高于其他时间点(P0.5)。本试验结果表明,使用最佳浓度金黄色葡萄球菌或大肠杆菌作用于BMECs时,在最佳感染时间点可显著上调IL1R1、IL-1β及TNF-α基因mRNA的表达量。IL1R1、IL-1β及TNF-αmRNA表达量在临床上可作为创伤后炎症反应的敏感指标,能评价炎症反应的严重程度,对乳腺炎的病程诊断具有重要意义。本试验结果为进一步研究细菌感染引起乳腺炎的致病机理提供了理论依据。     

奶牛乳房炎四种致病菌PCR核酸免疫层析试纸条快速检测方法的建立及应用

为了开发检测导致奶牛乳房炎的无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和停乳链球菌这四种重要致病菌的PCR核酸免疫层析试纸条方法,本研究采用柠檬酸还原法制备10 nm的胶体金溶液,选用优化的10μL 1 mol/L碳酸钾溶液调节pH和5μL异硫氰酸荧光素抗体偶联金颗粒,并使用优化的封闭液(10%BSA、0.25%PEG2000、0.05%吐温-20、0.05%Triton-X100)进行封闭,将地高辛抗体和山羊抗鼠二抗分别喷涂在检测线和质控线上,烘干并组装成试纸条,进行细菌的纯培养物和鲜牛奶加样检测。结果显示,所制备的PCR核酸免疫层析试纸条和凝胶电泳均具有较好的特异性,最低检测限要比凝胶电泳高10倍,在模拟污染牛奶样品测试中,试纸条仍然具有很好的特异性且灵敏度比凝胶电泳的高。上述结果表明,本研究建立的PCR核酸免疫层析试纸条检测方法具有良好的临床应用潜力。     

十七味清热类中药对乳牛乳腺炎病原菌体外抑菌活性的比较

采用琼脂平板二倍稀释法测定了黄连、黄芩、黄柏、牡丹皮、栀子和白薇等17味清热类药物对15个种属120株乳牛乳腺炎病原菌的最低抑菌浓度,统计分析了抑菌活性相对较强的黄连、黄芩、黄柏、苦参、秦皮和牡丹皮6味中药对葡萄球菌、链球菌、巨型球菌、芽孢杆菌、大肠杆菌、阴沟肠杆菌和单胞菌属等11个种属的MIC50和MIC90,并采用单因素方差分析法比较分析了这6味药物对同种属菌株抑菌活性的强弱。结果表明,椿皮、白鲜皮、玄参、生地黄、紫草、知母、栀子、决明子、白薇、龙胆草和穿心莲的体外抑菌活性相对较弱。黄连、黄芩、黄柏、苦参、秦皮和牡丹皮的抑菌活性相对较强,且以黄连的体外抑菌活性最强,其次为牡丹皮,再次为黄芩、苦参和黄柏,抑菌效果最差者为秦皮。     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7 LAMP-LFD快速检测方法的建立及初步应用

针对肠出血性大肠杆菌O157∶H7(EHEC O157∶H7)的rfbE基因保守序列设计特异引物,通过优化反应体系、反应温度和反应时间等参数,建立了一种快速、简便的肠出血性大肠杆菌O157∶H7的环介导等温扩增-横向流动试纸条(LAMP-LFD)检测方法。特异性试验结果显示,该方法与大肠杆菌O8∶K88和O141∶K99、无乳链球菌、停乳链球菌、金黄色葡萄球菌、痢疾志贺菌、产单核细胞李氏杆菌、表皮葡萄球菌、肠炎沙门菌、猪链球菌2型、副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌等12种细菌均无交叉反应。灵敏度试验结果表明,该方法对纯培养的EHEC O157∶H7的检测下限为13CFU/mL,污染食品中EHEC O157∶H7的检测下限为18CFU/mL。研究结果表明,该方法特异性好,灵敏度高,操作简便,可肉眼直接判定结果,1h内完成检测,在食品卫生检验和临床疾病诊断方面具有良好的应用前景。