血液还原型谷胱甘肽的测定

谷胱甘肽是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成的三肽,简称GSH,又称还原型谷胱甘肽。—SH表示其分子中具有巯基。它广泛的存在于许多组织细胞和红细胞内。两个分子谷胱甘肽经过氧化(脱氧)后形成具有二硫键的六肽,简称GSSG,又称氧化型谷胱甘肽,两者可随细胞内物质代谢的状况发生互相转变。     

醋酸镉对大鼠原代肝细胞氧化应激的影响

为研究镉对肝细胞的毒性,用两步灌流法获得大鼠肝细胞,并将其暴露于浓度为2.5、5.0、10.0μmol/L的醋酸镉中12 h,测定了细胞存活率,肝细胞乳酸脱氢酶(LDH)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)的释放,及细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽-S转移酶(GST)、谷胱甘肽还原酶(GR)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性以及还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量的变化.结果表明.细胞存活率显著下降(P<0.01);LDH、ALT和AST的释放量均增加,部分镉剂量组与对照组差异极显著(P<0.01);细胞内GSH含量下降,5.0和10.0 μmol/L剂量组与对照组差异均极显著(P<0.01),GSH-Px、SOD和CAT活性升高,部分剂量组与对照组差异极显著(P<0.01);MDA含量升高,10.0μmol/L剂量组与对照组差异显著(P<0.05);其余指标与对照组差异不显著(P>0.05).证实,醋酸镉可致肝细胞损伤,并且氧化应激起了重要作用.     

镉对大鼠肾皮质的氧化损伤及乙酰半胱氨酸的保护效应

通过饮水对大鼠进行了镉染毒(Cd 50 mg/L)和乙酰半胱氨酸(NAC)保护(Cd 50 mg/L+NAC1 g/L)试验,8周后检测肾皮质中抗氧化指标和微量元素含量变化,观察其超微结构,以探讨镉对肾的毒性损伤及NAC的保护效应。结果显示,与对照组相比,镉染毒组及NAC保护组肾皮质中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和还原型谷胱甘肽(GSH)含量显著或极显著(P<0.05或P<0.01)降低,丙二醛(MDA)含量显著或极显著(P<0.05或P<0.01)升高,肾皮质中的铜、硒、锌含量显著降低(P<0.05)。与染毒组比较,NAC保护组肾皮质SOD、GSH-Px活性和GSH含量显著升高(P<0.05);肾皮质铜、锌、硒含量无显著差异(P>0.05)。超微结构观察发现,镉染毒使肾皮质中的细胞核仁破碎溶解,线粒体肿胀变形,部分嵴断裂;NAC保护组病理变化不明显,表明NAC对镉暴露所致的肾毒性损伤具有一定的保护效应。     

葛根素对镉致大鼠肝毒性损伤的保护作用

为探究葛根素对镉致大鼠肝毒性损伤的保护作用,将36只雄性SD大鼠随机分为4组,分别为对照组、葛根素组、镉组、镉与葛根素共处理组。葛根素组、镉与葛根素共处理组大鼠以200 mg/kg剂量每日灌服5 g/L羧甲基纤维素钠溶解的葛根素;对照组和镉组大鼠每日灌服相同剂量5 g/L羧甲基纤维素钠;从第15天开始,镉组、镉与葛根素共处理组大鼠在灌胃的同时自由饮用镉水(50 mg/L),持续90 d。试验结束后,剖检采集大鼠肝,测定肝系数,用HE染色观察肝组织病理学变化,用比色法检测肝组织中丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。结果显示:与对照组相比,镉组大鼠肝组织发生明显病理学变化,肝系数和SOD活性极显著降低(P0.01),MDA、GSH含量和CAT、GSH-Px活性极显著升高(P0.01);与镉组相比,镉与葛根素共处理组大鼠肝组织病理学变化减轻,肝系数和SOD活性显著或极显著升高(P0.05或P0.01),MDA、GSH含量和CAT、GSH-Px活性显著或极显著降低(P0.05或P0.01)。结果表明,葛根素对镉所致的大鼠肝毒性损伤具有一定的保护作用。     

微量元素制剂对肉仔鸡血液GSH-Px和SOD活力的影响

测定了 3种剂型防治肉仔鸡微量元素缺乏病制剂对肉仔鸡血液谷胱甘肽过氧化物酶(GSH Px)和超氧化物歧化酶 (SOD)活力的影响。结果表明 ,微量元素定量控释制剂、长效注射剂和散剂均能够提高肉仔鸡血液中GSH Px和SOD的活力水平 ,增强肉仔鸡的抗氧化能力。     

多种微量元素缺乏症防治制剂对肉仔鸡血液谷胱甘肽过氧化物酶活力的影响

用自制的多种微量元素防治制剂的 2种剂型 (多微控释制剂和多微散剂 )对肉仔鸡进行微量元素缺乏症防治试验 ,分别于试验第 15、30和 4 5d采集静脉血液进行谷胱甘肽过氧化物酶(GSH Px)活力分析。结果表明 ,2种制剂均可以显著提高 (P <0 .0 5 )肉仔鸡血液中GSH Px活力 ,增强肉仔鸡的抗氧化能力 ;多微定量控释制剂的效果优于散剂     

植物叶蛋白对抗脂质过氧化作用酶系统的影响

选择 4 0只生长后期的Wistar大鼠 ,随机分为 4组 ,分别用含植物叶蛋白 2 0、5 0、10 0、15 0 g/kg的饲料饲喂 ,在第 10、2 0、30、4 0d采心血 ,测定谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)、超氧化物歧化酶 (SOD)的活力及丙二醛 (MDA)的浓度。结果表明 ,植物叶蛋白可提高GSH Px、SOD的活力 ,降低过氧化产物MDA的浓度 ,增加机体抗氧化酶系统的功能。     

感染"白点病"番鸭抗氧化功能的变化

用“白点病”病毒人工感染雏番鸭 ,于感染后第 1、3、5、7、10和 14d测定了雏番鸭血浆中丙二醛 (MDA)的含量、超氧化物歧化酶 (SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)的活性。结果 ,雏番鸭感染“白点病”病毒后血浆中MDA的含量、SOD和GSH Px活性发生明显变化 ,其中攻毒组雏番鸭在攻毒后第 3dMDA含量开始升高 ,第 5和第 10d显著高于对照组 ;攻毒组雏番鸭SOD活性在攻毒后第 3d开始显著低于对照组 ,随后在低于或显著低于对照组的范围内波动 ;GSH Px的活性在攻毒后第 7d开始下降 ,攻毒后第 10d攻毒组显著低于对照组。提示 ,自由基可能在雏番鸭“白点病”的发病过程中起关键作用。     

氟对奶山羊体内抗氧化功能影响的研究

以奶山羊为试验动物 ,按体重灌服氟化钠 ,复制奶山羊氟病模型 ,研究氟对奶山羊体内抗氧化功能的影响。研究结果表明 ,氟在体内可降低机体的抗氧化功能 ,对机体造成一系列损伤 ;氟通过抑制谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)、超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化氢酶 (CAT)、葡萄糖 6 磷酸脱氢酶 (G6PD)活性 ,降低蛋白性抗氧化剂铜蓝蛋白 (CP)含量 ,破坏了机体清除自由基及抗氧化防御系统 ,使机体氧化应激反应强烈 ,产生一系列病理变化 ,表现出氟病的各种症状 ,构成了氟损伤机体的病理学基础。     

高压均质(HPH)大豆卵磷脂替代卵黄在猪精液冷冻保存效果的研究

为探究大豆卵磷脂高压均质(HPH)处理对猪精液冷冻保存的影响,用6个浓度的经高压均质处理的大豆卵磷脂(A1:1%;A2:2%;A3:4%;A4:5%;A5:6%;A6:8%)替代Tris-柠檬酸-葡萄糖基础稀释液(B组)中的卵黄(20%)进行猪精液冷冻保存试验。冷冻-解冻后分别对精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性进行质量检测,同时利用各种试剂盒对解冻后精子的抗氧化指标、DNA完整率和凋亡指标进行检测。结果显示,当高压均质大豆卵磷脂浓度为5%时,精子活力、活率、质膜完整率和顶体完整率最高,分别为67.15%、62.54%、55.21%和52.96%(P0.05);冻后精子线粒体完整率和DNA完整率最高,为68.61%和64.39%(P0.05);凋亡率最低,为23.31%(P0.05);活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)最低,分别为337.59 U/m L和2.01 nmol/L(P0.05)。当添加6%的大豆卵磷脂时超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平最高,分别为74.65 U/m L和246.92 U/L(P0.05)。结果表明,利用5%高压均质大豆卵磷脂替代鸡蛋卵黄对猪精液冷冻保存具有良好的效果,能提高精子冻后质量、功能完整性和抗氧化性。     

褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的影响

为探究褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的影响,本研究以10～12月龄ICR雌鼠的卵母细胞为研究对象,在体外成熟培养液中添加不同浓度的褪黑素(0、10-4、10-6、10-8mol/L),以第一极体排出率作为卵母细胞成熟的评判依据筛选出褪黑素最佳添加浓度,并通过活性氧(ROS)水平检测、谷胱甘肽(GSH)水平检测、三磷酸腺苷(ATP)含量检测以及纺锤体组装来分析褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的作用。结果,1×10-6mol/L的褪黑素能够降低细胞内ROS水平,提高GSH水平,减弱高龄小鼠卵母细胞的氧化应激,同时还可以通过维持细胞内正常的能量(ATP)供应来保证纺锤体的正常形态,促进卵母细胞体外成熟。结论认为,在体外成熟培养体系中添加1×10-6mol/L的褪黑素可以通过改善卵母细胞的质量,促进高龄小鼠卵母细胞的体外成熟。     

氟苯尼考诱导氧化应激和细胞凋亡引起的肉鸡肾损伤

为了探究氟苯尼考对肉鸡肾的损伤作用及其可能机制,将180只肉鸡随机分为空白对照组和不同剂量的氟苯尼考组(0.15,0.3,0.6,1.2和1.8 g/L)。从1日龄开始,连续饮水给药5 d。于试验第42天,翅下静脉收集血液并尽快摘取完整的鸡肾。记录和分析各组肉鸡的平均增重和肾指数;用HE染色法观测肉鸡肾组织病理学变化;检测肉鸡血清中肾功能指标尿酸(UA)、尿素氮(BUN)和肌酐(CRE)的含量以及肾组织中过氧化指标丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的水平;采用Western-blot法检测肾组织中p53,Caspase-3和Caspase-6的蛋白表达水平。结果显示,与空白对照组相比,较高剂量的氟苯尼考均能显著降低肉鸡的平均增重(P0.01)和升高肾指数(P0.05或P0.01)。各剂量氟苯尼考组中的肾组织细胞均显示出明显的损伤、变形、细胞萎缩和细胞间隙增大的现象。此外,所有剂量氟苯尼考均显著提高了试验肉鸡血清中BUN含量(P0.05或P0.01),1.8 g/L氟苯尼考显著提高了UA和CRE含量(P0.05或P0.01),1.2 g/L氟苯尼考组UA含量也显著升高(P0.05)。所有剂量的氟苯尼考均能显著提高试验肉鸡肾组织中MDA含量(P0.01)却显著降低了CAT的水平(P0.05或P0.01);除0.15 g/L氟苯尼考组外(P0.05),其余剂量的氟苯尼考组GSH和SOD水平均显著降低(P0.01)。除0.3 g/L氟苯尼考组外(P0.05),其余剂量氟苯尼考组试验肉鸡肾组织中Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P0.01)。结果提示,1日龄给予氟苯尼考对肉鸡具有显著的肾毒性,这种毒害作用会持续到肉鸡出栏,并且具有剂量依赖性。这种损伤可能与氟苯尼考促进肉鸡肾内氧化应激反应,上调促凋亡因子的表达有关。     

铅暴露对鲫鱼抗氧化及免疫能力的影响

为研究不同质量浓度铅暴露对鲫鱼抗氧化及免疫的影响,将180尾鲫鱼随机分成4组,分别为空白对照Ⅰ组、铅暴露Ⅱ组(0.05 mg/L)、铅暴露Ⅲ组(0.5 mg/L)和铅暴露Ⅳ组(1 mg/L)。在铅暴露后第30及60天分别取样,检测鲫鱼肝胰超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)质量分数、过氧化氢酶(CAT)活性、总抗氧化能力(T-AOC),血清溶菌酶(LZM)活性及免疫球蛋白M(Ig M)质量浓度。结果显示,铅暴露后第30天与对照组相比,Ⅱ、Ⅳ组T-AOC质量浓度显著增加(P0.05),Ⅲ组质量浓度略微降低(P0.05);Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组SOD活性均显著提高(P0.05);Ⅱ、Ⅲ组GSH质量分数显著减少(P0.05),Ⅳ组显著增加(P0.05);Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组CAT、LZM及Ig M水平显著降低(P0.05)。铅暴露后第60天与对照组相比,Ⅱ、Ⅳ组SOD水平显著升高(P0.05),Ⅲ组SOD水平升高不显著(P0.05);Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组T-AOC及GSH水平显著提高(P0.05),Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组CAT活性显著降低(P0.05);Ⅱ、Ⅳ组LZM及Ig M水平显著提高(P0.05),Ⅲ组LZM活性显著降低(P0.05),Ig M质量浓度增加不显著(P0.05)。结果表明,铅暴露可诱导鲫鱼机体产生氧化应激,并对其免疫系统造成一定影响,不同质量浓度组抗氧化及免疫指标存在差异性。鲫鱼通过调节自身抗氧化及免疫防御系统从而降低铅暴露导致的机体损伤。     

超低温保存对姜曲海公猪精子超微结构损伤的研究

猪精子对低温尤为敏感,极易遭受低温损伤。本文旨在探讨冷冻前后猪精子超微结构变化,为改善猪精子冷冻保存方法奠定基础。通过手握法采集姜曲海公猪精液,使用0.25 m L细管对精液进行超低温冷冻保存,用扫描电镜和透射电镜对冷冻前后精子超微结构进行观察。结果显示,冻后姜曲海猪精子活力、质膜完整率、线粒体活性和顶体完整率(分别为38.6%、40.5%、42.7%和43.6%)均显著(P0.05)低于新鲜精子(分别为81.9%、85.7%、89.5%和90.2%)。姜曲海猪精子全长约54.4 m,由头、颈、体和尾4部分组成;冻后正常的精子,表现为质膜、顶体和线粒体结构完整,顶体光滑,线粒体排列整齐,核染色质均匀;冻后异常精子主要表现为颈部断裂或膨胀,顶体表面粗糙或缺失,质膜膨胀或缺失,或线粒体移位。上述研究结果表明,超低温保存对姜曲海猪精子超微结构造成的损伤主要集中于质膜、顶体和线粒体。     

高压均质(HPH)处理鸡蛋卵黄对猪冻精质量的影响

为探究高压均质(HPH)处理鸡蛋卵黄对猪精液冷冻效果的影响。选取Tris—柠檬酸—葡萄糖基础稀释液,以未处理的鸡蛋卵黄(20%EY)为对照组,添加经HPH处理后的鸡蛋卵黄(20%EY)为试验组,制成Ⅰ液和Ⅱ液,冷冻-解冻后分别对猪精子活力、活率、顶体完整率、质膜完整率、线粒体活性、抗氧化指标及DNA完整率和凋亡指标进行检测。结果显示,经HPH处理能有效提高猪精子冻后质量。精液解冻后精子活力、活率、顶体完整率、质膜完整率分别为84.32%、86.71%、68.92%、59.09%,较对照组分别提高了13.7%、16.58%、6.5%、4.88%(P0.05)。与对照组相比,试验组的MDA和ROS较对照组均有所上升(P0.05),SOD较对照组有所下降(P0.05)。但冻后精子NO和NOS含量显著降低(P0.05)。试验组的精子解冻后DNA片段完整性较对照组明显提高(P0.05),凋亡率下降(P0.05)。结果表明,HPH处理鸡蛋卵黄能有效提高猪精液冷冻后质量。     

大肠埃希氏菌表达FMDV 3AB非结构蛋白的纯化复性与活性检测

采用超声波裂解细菌 ,高浓度尿素裂解包涵体和金属螯合亲合层析的方法对大肠埃希氏菌中表达的FMDV 3AB非结构蛋白进行纯化 ,经SDS PAGE分析 ,3AB融合蛋白纯度达 90 %以上。采用稀释法和氧化型、还原型谷胱甘肽系统相结合方法对融合蛋白进行复性 ,通过Westernblotting分析 ,表明复性后的 3AB融合蛋白能与抗FMDV抗体发生特异性结合。ELISA检测表明 ,复性后的 3AB融合蛋白有很好的抗原活性。     

PTD-FNK蛋白对水牛精子的冷冻保护作用

PTD-FNK蛋白可以穿透细胞膜进入细胞内发挥抗凋亡作用,抵抗各种不利因素造成的细胞死亡,但国内未见将其加入水牛精液稀释液抑制精子冷冻凋亡的报道。本试验中,在水牛精液冷冻稀释液中添加不同浓度(0、0.1、1、10、100 nmol/L)的PTD-FNK蛋白,冻后检测精子常规质量指标的同时检测精子凋亡相关基因(Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9基因)mRNA表达和Caspase-3蛋白酶的活性;最后以最优PTD-FNK蛋白浓度批量生产冷冻精液,选择50头广西地方母水牛进行人工授精试验。结果显示:①1 nmol/L组精子质膜完整性和10 nmol/L组精子活力显著高于对照组(P<0.05),1 nmol/L组精子活力和1、10 nmol/L组精子活率极显著高于对照组(P<0.01),而100 nmol/L组精子活率却极显著低于对照组(P<0.01);②1 nmol/L PTD-FNK蛋白显著降低冻后精子Caspase-3 mRNA表达(P<0.05);③人工授精后第60天受胎率达60%,略高于其他研究者取得的受胎率(56.25%,P>0.05)。总之,PTD-FNK蛋白可以显著提高水牛精子冻后质量,其机制之一可能是它显著抑制了冻后精子Caspase-3 mRNA的表达;以PTD-FNK蛋白冷冻的水牛精液实施人工授精后可以取得比现有水平更高的受胎率。     

三氧化二砷对肉鸡原代肝细胞氧化应激和甲硫氨酸亚砜还原酶基因表达的影响

为探究三氧化二砷(As_2O_3)对肉鸡原代肝细胞氧化应激和甲硫氨酸亚砜还原酶Msrs基因(MsrA、MsrB_1、MsrB_3)mRNA水平表达的影响,本研究将肉鸡原代肝细胞培养36 h后,随机将其分为对照组(0 mol/L As_2O_3)、低剂量组(0.5 mol/L As_2O_3)、中剂量组(1.0 mol/L As_2O_3、2.0 mol/L As_2O_3)、高剂量组(4.0 mol/L As_2O_3)、N-乙酰半胱氨酸组(1.0 mmol/L NAC)、合并应用NAC组(4.0 mol/L As_2O_3+1.0 mmol/L NAC),继续培养24 h后检测其抗氧化指标和Msrs基因mRNA水平的表达变化。结果显示:谷胱甘肽(GSH)含量在中剂量组、NAC组和合并应用NAC组显著升高(P0.05);过氧化氢酶(CAT)含量在高剂量组显著升高(P0.05);丙二醛(MDA)含量在低、中、高剂量组显著升高(P0.05);超氧化物歧化酶(SOD)活性在低、中剂量组和合并应用NAC组显著升高(P0.05),但在高剂量组显著降低(P0.05)。除了NAC组,其余各组Msrs基因mRNA的表达水平均显著降低(P0.05)。合并应用NAC组与高剂量组相比,GSH含量、SOD活性显著升高(P0.05),CAT、MDA含量极显著降低(P0.01)。结果表明:高剂量As_2O_3可以导致原代肉鸡肝细胞氧化损伤,同时Msrs基因mRNA水平的表达有所降低,提示Msrs基因可能在As_2O_3引起的肝细胞氧化损伤修复中起重要作用,而NAC则可以缓解砷的细胞毒性。     

硒对家兔生理生化指标影响的研究

用30只家兔进行了亚硒酸钠和VE对家兔一系列生理生化指标影响的研究。结果表明,补硒后从第2天开始全血硒含量明显高于对照组(P<0.05),全血GSH—Px的活性在第7天开始与对照组相比也出现显著差异(P<0.05或P<0.01),本试验证实,全血GSH—Px的活性不受体内VE含量的影响,全血硒含量 与GSH—Px的活性之间呈正相关,同时发现家兔肾脏、肝脏是体内含硒量最高的组织,试验组血浆GOT活性在第42天显著低于对照组(P<0.05)。     

饮水染镉对雄性大鼠精子发生的影响

通过对性成熟及性未成熟雄性大鼠进行慢性饮水染镉,探究了镉对大鼠精子发生的影响,为镉对雄性大鼠生殖毒性作用及其机理的研究奠定理论基础。将30只雄性SD大鼠(性成熟)随机等分成5组,分别饮用镉的质量浓度为0、25、50、100和200mg/L的饮水,试验期为56d;将15只雄性SD大鼠(性未成熟)随机等分成3组,分别饮用镉的质量浓度为0、50和200mg/L的饮水,试验期为105d。试验期结束后观察大鼠的附睾尾重、附睾尾中精子活力、精子活率、精子密度、精子形态等指标的变化情况。结果显示,对于性成熟大鼠,100mg/L镉剂量组与对照组相比,上述指标显著下降(P0.05),200mg/L镉剂量组与100mg/L镉剂量组相比,上述指标极显著下降(P0.01);100mg/L镉剂量组的精子畸形率与对照组相比,呈极显著增加(P0.01)。对于性未成熟大鼠,50mg/L镉剂量组与对照组相比,上述指标显著下降(P0.05),200mg/L镉剂量组与50mg/L镉剂量组相比,上述指标极显著下降(P0.01);50mg/L镉剂量组的精子畸形率与对照组相比,极显著升高(P0.01)。结果表明,慢性饮水染镉对动物精子的发生具有毒性作用,可明显影响雄性动物的生育功能,且存在剂量效应和时间效应关系。