猪生长激素基因的克隆及在哺乳动物细胞中的表达

应用RT-PCR技术克隆了猪生长激素(pGH)cDNA,该基因编码蛋白的信号肽序列与已有报道的pGH基因存在2个氨基酸残基的差异,而成熟肽却无差异。将 pGH cDNA定向插入真核表达载体VR1020,构建了重组真核表达质粒VpGH;利用脂质体法转染哺乳动物细胞COS7,对转染后的COS7细胞进行RT-PCR、ELISA和免疫荧光分析,分别在转录和翻译水平证实了目的基因在COS7细胞中得到正确转染表达。     

猪生长激素基因的原核表达及其抗体制备

通过构建pGH基因的原核表达质粒,转化大肠埃希氏菌TOP10,经IPTG诱导,成功表达了重组猪生长激素的融合蛋白。经SDS PAGE分析,在分子质量50.4ku处有1条新的特异蛋白质条带。对以包涵体形式表达的融合蛋白进行SDS PAGE分离,并经透析得到了重组融合蛋白,以此融合蛋白免疫家兔,制备并纯化了抗pGH多克隆抗体,经酶联免疫吸附测定、蛋白质印迹分析和免疫组织化学方法检测,此抗体具有较高效价和特异性。成功地表达了pGH基因并获得了多克隆抗体。     

猪用生长激素脂质体对大白鼠的促生长活性试验

对大白鼠分别腹腔注射猪用生长激素 (PST)和PST脂质体 ,第 7、14、2 8d称重 ,试验组与对照组之间差异显著 (P <0 .0 5 ) ,表明PST和PST脂质体对大白鼠具有促生长活性 ;同时显示 ,PST脂质体具有显著的缓释作用 ,缓释期可达 7d以上。     

中草药饲料添加剂对育肥猪免疫功能、抗氧化能力以及生长激素水平的影响

本试验旨在研究以中草药为主要添加剂的两种配方饲料对育肥猪的免疫功能、抗氧化能力、生长激素水平的影响.将30只育肥猪随机分为3组,对照组(饲喂基础饲料)、试验Ⅰ组(在基础饲料中添加0.2％中草药组方A)、试验Ⅱ组(在基础饲料中添加0.1％中草药组方B),饲喂90 d后采血,检测血清中的细胞因子、免疫球蛋白、补体、抗氧化酶...     

猪瘟病毒感染的小型猪体内病毒的复制情况及淋巴细胞变化

用106 TCID50CSFV石门株感染巴马小型猪,通过监测被感染猪的临床体温、观察其病理变化、检测猪瘟病毒在体内的复制情况、检查猪瘟病毒感染后对外周血淋巴细胞增殖的影响,并分析外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的动态变化,以确定巴马小型猪对CSFV的敏感性。结果,攻毒后第3天被感染的巴马小型猪出现病毒血症,并在第7天就已达到1×106 copies/μL以上;腹股沟淋巴结中病毒含量最高,颌下淋巴结次之。淋巴细胞增殖试验表明,用固定剂量的刀豆素刺激,被感染的巴马小型猪外周血淋巴细胞增殖出现不同程度降低;其外周血中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的比例降低。结果表明,巴马小型猪可以作为CSFV的感染模型。     

小型猪复合麻醉剂对大鼠不同脑区内源性阿片肽含量的影响

从128只Wista大鼠中随机抽取8只为对照组,其余随机均分为5个试验组用以分别测定L-Enk、M-Enk、β-EP、dynA和OFQ的含量,每个试验组又随机均分为麻醉组、恢复Ⅰ组和恢复Ⅱ组3个亚组。采用ELISA测定各脑区内源性阿片肽的含量。结果显示,腹腔注射XFM2mL/kg后,麻醉组,大脑皮层和丘脑内L-Enk、M-Enk、β-EP和dynA含量均显著增加(P0.05或P0.01),海马内L-Enk、M-Enk和β-EP含量均显著增加(P0.05或P0.01),丘脑内OFQ的含量显著降低(P0.01);恢复Ⅰ组和恢复Ⅱ组上述各脑区内L-Enk、M-Enk、β-EP、dynA和OFQ的含量均显著恢复(P0.05);麻醉全过程中,小脑和脑干内5种内源性阿片肽的含量均无显著变化。结果表明,XFM对不同脑区内源性阿片肽的影响可能是其产生全麻作用的重要机理之一;XFM的中枢麻醉作用可能与增加大脑皮层和丘脑内L-Enk、M-Enk、β-EP和dynA,海马内L-Enk、M-Enk和β-EP的含量,同时降低丘脑内OFQ的含量有关。     

小型猪复合麻醉剂对大鼠不同脑区cAMP信号转导系统的动态影响

将252只SD大鼠随机分为对照组和低、高剂量组(分别腹腔注射生理盐水10 mL/kg及小型猪复合麻醉剂5 mg/kg、7.5 mg/kg),每个剂量组又分为麻醉组、恢复I组和恢复II组等3个亚组.用放射免疫法测定不同脑区的AC活性、cAMP含量和PDE活性.结果显示,低剂量小型猪复合麻醉剂基本上对cAMP信号转导系统无明显的作用,高剂量小型猪复合麻醉剂不仅使大鼠大脑、小脑、海马及丘脑等脑区AC活性、cAMP含量明显升高,而且还使PDE活性显著降低,并在此四部分脑区体现出系统性、高度相关性及剂量依赖性.表明,大鼠大脑皮层、小脑、海马、丘脑等脑区的cAMP信号转导系统可能参与了小型猪复合麻醉剂全麻机理的调控,该制剂的全麻作用与激活此四部分脑区的cAMP信号转导系统相关.     

广西巴马小型猪21个微卫星座位的DNA多态性分析

利用 2 1个微卫星座位统计了广西巴马小型猪品系内的等位基因组成 ,计算了各位点的基因纯合率和多态性信息含量 (PIC)及平均杂合度。结果 ,2 1个位点的平均基因纯合率为 5 5 .5 % ,平均PIC为 0 .3 5 0 1,平均杂合度为 0 .3 881。结果提示 ,广西巴马小型猪具有一定的遗传稳定性 ,已成为一个稳定的遗传群体 ,符合封闭群动物的遗传特征     

小型猪复合麻醉剂及赛拉嗪对大鼠大脑皮层与小脑c-fos基因表达的影响

为研究小型猪复合麻醉剂(XFM)及赛拉嗪对大鼠大脑皮层与小脑c-fos基因表达的影响,将114只SD大鼠随机分为空白对照组(B组)、生理盐水对照组(C组)、XFM麻醉组(H组)和赛拉嗪组(X组)。除B组外,各组又分为6个亚组:麻醉诱导期(Ⅰ期)、翻正反射消失(Ⅱ期)、翻正反射消失后15min(Ⅲ期)、翻正反射消失后35min(Ⅳ期)、翻正反射恢复(Ⅴ期)、恢复直线爬行(Ⅵ期)。各组大鼠在对应的时间点断头处死,分离并采集大脑皮层和小脑,并分别提取RNA和蛋白质,用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测各样品中c-fos基因mRNA含量和蛋白含量。结果显示:(1)C组大鼠大脑皮层与小脑c-fos基因的表达无显著变化(P0.05);(2)H组这2个脑区c-fos基因mRNA转录量逐渐升高,在Ⅲ期达到最高(P0.01),在麻醉苏醒过程中下调;c-fos蛋白在麻醉过程中表达量上调,在麻醉苏醒后(Ⅵ期)表达量下降(P0.01);(3)X组上述脑区c-fos基因mRNA表达量上升,主要在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ期明显升高(P0.01),Ⅵ期下降至接近对照组水平;c-fos蛋白表达逐渐升高,而在Ⅴ、Ⅵ期表达下降(P0.01),X组c-fos表达水平较H组表达水平低(P0.01)。结果提示:在XFM和赛拉嗪麻醉过程中,大鼠大脑皮层与小脑中c-fos基因的表达量随麻醉加深而增加,在麻醉苏醒过程中表达量下降,大脑皮层及小脑可能是XFM和赛拉嗪的麻醉作用位点,两种药物对大鼠大脑皮层与小脑内c-fos基因表达的影响可能是其麻醉作用机制之一。     

猪流行性腹泻病毒重组S1蛋白的免疫原性评价

将猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行毒株S1基因经密码子优化后克隆到慢病毒表达载体,在293T细胞包装PEDV S1重组慢病毒;重组慢病毒感染293T细胞,经有限稀释法筛选获得高效稳定表达S1蛋白的重组细胞系HEK-293T-S1;生产、纯化S1蛋白,添加佐剂制备成重组S1亚单位疫苗,经肌肉注射免疫实验用巴马小型猪,评价...     

反向遗传技术及其在猪传染性胃肠炎病毒研究中的应用

对反向遗传学技术及其在RNA病毒研究中的应用进行了综述。论述了猪传染性胃肠炎病毒反向遗传技术的发展现状,并对该技术在猪传染性胃肠炎病毒的基因功能、致病机理、基因工程疫苗研究中的应用及前景等方面进行了探讨。     

猪凸隆病毒猪嵴病毒猪捷申病毒猪轮状病毒多重荧光RT-PCR方法的建立与初步应用

为建立一种同时检测猪凸隆病毒、猪嵴病毒、猪捷申病毒和猪轮状病毒的高特异性、高灵敏性的检测方法,根据这4种病毒的保守基因序列分别合成相应的特异性引物及TaqMan探针,采用One-Step法进行反应体系的优化,建立多重荧光RT-PCR方法,评估该方法的特异性、敏感性、重复性,并用于本地猪场腹泻样品中上述4种病毒的流行病学调查。结果显示：该方法特异性好,可特异性地检测上述4种病毒的单一模板及混合模板,其他对照株均无扩增信号;灵敏度高,上述4种病毒的最低检出限均为10¹ copies/μL;重复性好,批内及批间重复试验变异系数均小于3%。所建立方法还具有高通量、低污染和操作简便的优点,3 h内即完成全市猪场265份腹泻样品的检测,大大提高了检测效率。流行病学调查显示,厦门市养猪场猪嵴病毒、猪捷申病毒、猪轮状病毒和猪凸隆病毒这4种病毒均具有较高的检出率,阳性率依次为67.92%、65.28%、36.60%和27.55%。该研究将为猪腹泻病鉴别诊断及防控提供重要的技术支持。     

贵州剑河白香猪血液生理指标的测定

对相同条件下饲养的６ 月龄剑河白香猪和黑香猪的血液生理指标进行测定。结果表明,同月龄白、黑香猪红细胞数,白细胞数,血红蛋白含量,白细胞分类计数,各项指标差异均不显著（ Ｐ＞ ０ ．０５） ;不同性别间的白香猪、黑香猪各指标差异也不显著（ Ｐ＞ ０ ．０５） 。     

云南省猪圆环病毒的分子流行病学调查及其2型cap基因遗传多样性分析

采用猪圆环病毒(PCV)通用PCR技术和PCV-2特异性PCR技术检测云南省2007～2008年采集的120份病猪组织样品,结果获得PCV-2阳性样品21份.选取12份有代表性的阳性样品进行cap基因的扩增、纯化,将产物克隆至pMD18-T载体测序,并与已知参考毒株进行比对及系统发育分析.结果显示,云南省12份阳性样品cap基因的核苷酸及氨基酸序列的同源性分别为92.4%～99.7%和94.4%～99.6%;与国内PCV-2毒株cap基因的核苷酸和氨基酸序列同源性为89.3%～92.9%、88.4%～94.0%;与国外毒株的核苷酸和氨基酸序列同源性为90.0%～99.4%、93.6%～99.6%.有25个氨基酸位点存在变异,其中14个位点位于抗原表位区;12份阳性样品可划分为3个进化分枝(1.1.1.1、1.1.2、1.2),其中1.1.2、1.2可能是新出现的分枝.     

从猪痢疾猪场分离出鼠源猪痢疾蛇形螺旋体

从发生猪痢疾猪场中的捕捉鼠肠道内分离出1株鼠源猪痢疾蛇形螺旋体(Serpulina hyodysenteriae),经鉴定与当地猪源分离株的形态、溶血型、肠致病性相同.     

猪圆环病毒2型猪伪狂犬病病毒和猪细小病毒三重PCR检测方法的建立

针对猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2、猪伪狂犬病病毒(PRV)gD和猪细小病毒(PPV)VP2基因保守区域,设计了特异性引物,在分别建立单一病毒基因PCR检测方法的基础上,通过对3组引物的比例和浓度、dNTPs和Mg2 浓度、退火温度等条件的优化,建立了针对上述3种病毒的三重PCR检测方法。敏感性试验表明,应用该方法最低可检测到4×10-4ng/μL的PRV双链DNA模板和2×10-5ng/μL的PCV2和PPV单链DNA模板。对21份自然感染病猪样品的检测结果表明,该三重PCR检测结果与单一PCR检测的结果完全符合。试验结果显示,建立的三重PCR方法可用于3种DNA病毒的同时检测,具有快速、准确的特点,有临床应用前景。     

2017—2019年猪流行性腹泻病毒广西流行毒株遗传多样性分析

为掌握广西猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行毒株的遗传变异情况,本研究对2017-2019年从广西各地采集的腹泻样品,应用RT-PCR方法进行检测,并随机选取部分PEDV阳性样品进行S、M、N基因的扩增、测序和分析。结果显示,共获得PEDV S基因序列23株、M基因和N基因序列各25株。同源性分析显示,广西流行毒株间核苷酸和氨基酸序列同源性在S基因为90.6%~100%和89.6%~100%,在M基因为97.0%~100%和96.9%~100%,在N基因为95.9%~100%和95.9%~100%。序列比对显示,广西流行毒株S1基因的氨基酸序列存在缺失、突变和插入现象,且各毒株之间存在差异。基于S、M、N基因绘制遗传进化树,获得相似的拓扑结构图,广西流行毒株主要分布在S基因的GⅠb、GⅡa亚群,M基因的GⅡa、GⅡb亚群,N基因的GⅢ亚群。遗传进化速率测算显示,广西流行毒株及国内外参考毒株S、M、N基因的平均进化速率分别为7.39×10-4、1.43×10-4和2.96×10-4substitutions/site/year,S基因的变异速度最快。表明PEDV广西流行毒株存在遗传多样性,应加强病原监测和流行病学调查,为有效防控PED提供基础数据。     

猪圆环病毒分离鉴定及猪断奶多系统衰弱综合征的诊断

剖检北京、河北某些猪场发生的仔猪先天性震颤、断奶后发育不良、咳喘、消瘦、黄疸等症状的病猪,均显示猪断奶多系统衰弱综合征(PMWS)的病理学变化;电镜观察病猪的脾和淋巴结组织样品,见细胞核内堆积大量无囊膜的病毒粒子;进而从病猪的病料中分离到2株猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV).经电镜观察细胞内增殖、浓缩、提纯的病毒,为直径约17 nm的无囊膜的病毒粒子;间接免疫荧光试验可观察到PCVⅡ特异性免疫荧光;用2对引物分别扩增分离毒株,均得到2条与PCVⅡ特异性核苷酸片段大小一致的扩增片段.     

猪喘气病病原的研究

四川省乐山市某猪场的猪发生以咳嗽、气喘为主要症状的呼吸道疾病,取病猪新鲜肺组织进行分离培养检出了猪肺炎霉形体(Mycoplasma hyopneunloniae)XY-1株及支气管败血波氏杆菌(Boidatella bronchisepticai)JYZ3株;利用分离的2株病原菌制成灭活苗,对猪进行免疫,预防效果达80%以上.     

猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定

通过实验室检验 ,从福建省 2个送检猪场猪的肝、脾病料中分离出 2株猪胸膜肺炎放线杆菌 ,结合临床表现 ,推断它们均具有较强的致病性