鸡传染性贫血病毒的分离鉴定

在山东省从死亡率达７２％、混合感染多种病原微生物的海兰白蛋鸡和艾维茵肉鸡群中分离到３株鸡贫血病毒（ＣＡＶ），这些毒株耐体积分数５０％氯仿和７０℃水浴１５ｍｉｎ，能在ＭＤＣＣ－ＭＳＢ１细胞内增殖。用分离的细胞毒接种１日龄ＳＰＦ鸡呈现典型的鸡传染性贫血特征性的临床症状和病理变化；用间接免疫荧光检查感染的ＭＤＣＣ－ＭＳＢ１细胞涂片和鸡组织触片，可见特异的核内荧光。分离毒株能被ＣＡＶ－ＴＫ５８０３株抗血清所中和；５周龄ＳＰＦ鸡接种分离细胞毒可产生ＣＡＶ抗体；电子显微镜观察，分离毒株ＭＳＢ１细胞培养物中有大量２０ｎｍ左右的病毒粒子。应用特异性ＰＣＲ引物可扩增到预计长度的病毒核酸片段，进一步证实分离株为ＣＡＶ。     

反转录－聚合酶链反应检测牛食道－咽部分泌物中的口蹄疫病毒

应用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测牛食道－咽部分泌物（Ｏ－Ｐ液）中的口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）。第１组６份Ｏ－Ｐ液，采自人工感染发病牛，ＰＣＲ检测结果都是阳性；查毒试验结果５／６阳性。其中１份样品的１０－１，１０－２，１０－３和１０－３．７稀释液的ＰＣＲ检测结果也都是阳性；同样稀释的样品接种细胞，每稀释度２瓶，１０－１～１０－３都是２／２出现ＦＭＤＶ所致的细胞病变（ＣＰＥ），１０－３．７１／２出现ＣＰＥ。第２组样品是从野外采集的水牛Ｏ－Ｐ液，共５２份。ＰＣＲ检测结果９份为阳性，另７份为可疑（弱阳性）；取接种了这７份Ｏ－Ｐ液的细胞培养液（无ＣＰＥ）再作ＰＣＲ检测，结果全部是阳性。５２份Ｏ－Ｐ液样品分别接种ＩＢ－ＲＳ－２细胞培养物，并盲传３代，均未观察到典型的ＣＰＥ。研究结果表明，建立的ＲＴ－ＰＣＲ方法不仅可用于检测细胞培养物和动物组织，也适用于检测牛Ｏ－Ｐ液中的ＦＭＤＶ。该方法比目前常规的查毒试验显著的快速和灵敏     

牛传染性鼻气管炎病毒TK基因缺失株与野毒株PCR鉴别诊断方法的研究

根据已发表的牛传染性鼻气管炎病毒（ＩＢＲＶ）ＴＫ基因和ｇＢ基因序列,应用Ｏｌｉｇｏ４．１程序设计两对引物ＰＴＫ１和ＰＴＫ２及ＰＢ１和ＰＢ２,分别对已构建的ＴＫ基因缺失（ＴＫ－）ＩＢＲＶ以及ＩＢＲＶＬＡ株、洛精、美精、ＢａｒｔｈａＮｕ／６７株、Ｂ７株、云南１和云南２分离株进行了ＰＣＲ扩增。结果显示７株ＩＢＲＶＤＮＡ用引物ＰＴＫ１和ＰＴＫ２扩增均产生４５７ｂｐ的特异性片段,而ＴＫ－ＩＢＲＶ只出现１１０ｂｐ片段;用引物ＰＢ１和ＰＢ２对７株ＩＢＲＶＤＮＡ及ＴＫ－ＩＢＲＶＤＮＡ进行扩增均产生３３９ｂｐ的特异性片段;用此引物对其同属的伪狂犬病毒（ＰＲＶ）、马立克氏病毒（ＭＤＶ）、鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）进行扩增,均未见特异性条带,从而证明该引物是特异的;ＰＣＲ的敏感性检测表明,该法可检测出３ｐｇ的病毒ＤＮＡ。所建立的方法可以鉴别野毒与ＴＫ－ＩＢＲＶ疫苗毒的感染。     

DNA-RNA杂交法鉴别新城疫强毒株和弱毒株

ＤＮＡＲＮＡ杂交法鉴别新城疫强毒株和弱毒株１）贺东生刘福安宋长绪（华南农业大学动物医学系广州５１０６４２）新城疫（ＮＤ）是由新城疫病毒（ＮＤＶ）引起鸡的急性高度致死性传染病。ＮＤ的快速诊断是控制该病的重要环节，但由于弱毒疫苗株的广泛应用，对该病的诊...     

狂犬病 犬肠炎 犬瘟热 犬腺病毒病 犬副流感五联弱毒冻干疫苗的研究

从国外引进的犬瘟热病毒（ＣＤＶ）、犬细小病毒（ＣＰＶ）、犬腺病毒－２型（ＣＡＶ２）和犬副流感病毒（ＣＰＩＶ）四联弱毒样品中，分离筛选出增殖性良好的ＣＰＶ－ＸＮ１，ＣＡＶ２－ＸＮ３和ＣＰＩＶ－ＸＮ４株。另外还通过离体异种细胞交叉传代，获得的ＣＤＶ－ＸＮ１１２弱毒株；从狂犬病毒（ＲＶ－ＥＲＡ）株疫苗样品中筛选出ＥＲＡ８３６株。经试验证明这５株病毒在５代以内可作为制苗用种毒。采用静置和旋转培养法高滴度扩增这５株弱毒，必要时还采用低温培养和物理浓缩法进一步提高病毒滴度。５株弱毒细胞培养物与保护剂按适当比例混匀，制成犬五联弱毒疫苗，给８周龄以上的血清抗体阴性犬每只注射２ｍｌ，在１５ｄ内产生针对犬六大疫病的坚强免疫力，免疫期不低于９个月；—２０℃保存期不低于２４个月，２～８℃保存不低于９个月，室温（１８～２２℃）保存不低于６０ｄ，各种弱毒的滴度无明显降低，保护率达１００％。给５０００多只幼犬分别于２月和３月龄时各注射１个剂量（２ｍｌ）五联苗，９个月内进行追踪观测未发现不良反应。５００余只免疫犬的血清学监测证明本联苗免疫力确实。     

传染性法氏囊病病毒Ⅰ型变异株的分离鉴定及其多价弱毒苗免疫试验

先后在江苏、浙江、四川等８省（区）从临床患传染性法氏囊病的鸡群中采集法氏囊病料，分离到３２个野毒株，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定，其中１７株病毒为传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ），应用交叉中和试验，将分离毒株分为５个亚型，用ＩＢＤＶⅠ型标准变异株高免血清作中和试验鉴定，其中５个分离毒株有较高中和价，初步定为ＩＢＤＶⅠ型变异株。将其在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）上连续传代致弱，与标准Ⅰ型弱毒株联合制成多价弱毒疫苗，免疫试验表明多价弱毒疫苗具有良好的免疫效果，免疫组攻毒１００％保护，对照组攻毒死亡率为９２％     

鸡IB弱毒疫苗对鸡ND弱毒疫苗免疫干扰的试验观察

鸡ＩＢ弱毒疫苗对鸡ＮＤ弱毒疫苗免疫干扰的试验观察郑厚旌邓纪英１）张健林陈桂霞（河南农业大学牧医工程学院郑州４５０００２）据报道，应用鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）与新城疫病毒（ＮＤＶ）分别先后接种ＳＰＦ鸡胚，两种病毒之间存在干扰现象，被干扰的ＮＤＶ毒...     

用反转录─聚合酶链反应快速鉴别新城疫病毒

根据新城疫病毒基因结构特点及强、弱毒株Ｆ０ 裂解位点的序列差异设计２ 对引物,建立了快速诊断新城疫并能鉴别诊断新城疫强、弱毒株的反转录聚合酶链反应（ ＲＴＰＣＲ） 技术。试验表明,该方法具有快速特异和操作简便等特点,不仅适用于对鸡胚毒的检测,也适用于对病鸡组织匀浆液的检测,是新城疫鉴别诊断和流行病学调查的颇具潜力的分子诊断方法。     

鸡传染性支气管炎病毒纤突蛋白基因的反转录－聚合酶链反应研究

根据国外报道的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｇｒａｙ株的纤突蛋白（Ｓ１）核苷酸序列，自行设计合成了Ｓ１蛋白主要抗原决定簇基因两侧的一对引物，其跨幅为１．０ｋｂ。用该引物对从内蒙古、天津、山东等地分离的３株ＩＢＶ进行ＲＮＡ提取，经反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）后用琼脂糖凝胶电泳分析。结果表明，３个毒株均获取了与预期一致的ＰＣＲ产物。灵敏度测定结果表明，ＰＣＲ方法可检测出１０ｐｇ的模板     

应用反转录 - 聚合酶链技术快速检测猪瘟病毒RNA的研究

依据猪瘟病毒（ＣＳＦＶ）５′端非编码区保守序列设计一对ＰＣＲ引物，建立了检测ＣＳＦＶ的反转录聚合酶链（ＲＴＰＣＲ）技术。应用该技术从猪瘟兔化弱毒感染兔的脾、淋巴结、肾与肌肉等以及石门株强毒感染猪的脾与肌肉和湖北分离毒株感染猪组织匀浆液中均特异扩增出了１条预期大小为１９４ｂｐ的片段，从实验感染兔和猪的血液中也特异扩增出了该片段，但对牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）和健康兔脾总ＲＮＡ以及健康猪的血液ＲＮＡ扩增均为阴性。采用这种方法，对实验感染兔脾总ＲＮＡ的检测灵敏度可达１０－８ｇ，表明其灵敏度足以达到临床检验的要求。     

网状内皮组织增殖病病毒感染鸡红细胞免疫功能的动态变化

对１日龄ＳＰＦ鸡分别腹腔接种３株禽网状内皮组织增殖病病毒（ＲＥＶ）的ＲＥＶ－Ｔ，ＤＩＡ和Ｃ４８株，测得试验鸡红细胞补体（Ｃ３ｂ）受体花环率自接种后１１ｄ起显著低于对照组；而红细胞免疫复合物（ＩＣ）花环率从接种后２５ｄ起（３２ｄ除外），又显著高于对照组。接种不同ＲＥＶ毒株的鸡红细胞Ｃ３ｂ受体花环率和ＩＣ花环率的变化程度不一致，表明不同毒株引起的免疫抑制程度不同。     

鸡马立克氏病毒致鸡淋巴细胞糖皮质激素受体改变的特性

研究证明，鸡感染马立克氏病毒（ＭＤＶ）后，外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）糖皮质激素受体（ＧＲ）含量减少，其减少程度随病情的发展而加重，不因攻毒后时间的延伸而改变，提示鸡马立克氏病（ＭＤ）的发生与发展，与病毒所致ＰＢＬ的抗应激能力降低有关，ＭＤ肿瘤组织细胞的ＧＲ含量较正常鸡ＰＢＬ的减少４０％；而含瘤病鸡的ＰＢＬＧＲ含量与之基本相同（Ｐ＞０．０５），说明发生肿瘤的ＭＤ鸡，其ＰＢＬ与瘤组织细胞的变化程度相似；ＭＤＶ引起的鸡ＰＢＬＧＲ含量降低与血浆皮质酮的负调节机制无关，可能与病毒干扰受体基因转录有关；ＭＤ疫苗免疫鸡ＰＢＬＧＲ含量及Ｔ细胞刺激转化率均较正常鸡明显提高，提示ＭＤ疫苗不但提高鸡的细胞免疫功能，亦使ＰＢＬ的应激适应力加强。     

马立克氏病毒单克隆抗体的制备及应用

用ＭＤ＿（１１）／７５ｃ，ＳＢ＿１，ＨＶＴ＿（ＦＣ１２６）三个马立克氏病毒株分别免疫Ｂａｌ／ｃ小鼠，获得１０株分泌抗马立克氏病毒（ＭＤＶ）单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为ＦＭ＿３、ＦＭ＿（１７）、ＦＭ＿（２４）、ＦＭ＿（２８）、ＦＭ＿（４２）、ＦＭ＿（４５）、ＦＭ＿（６２）、ＦＭ＿（５３）、ＦＭ＿（５４）、ＦＭ＿（１５９）．这些单克隆抗体都具有免疫萤光反应特性，其腹水抗体的ＦＡ效价为１０￣３～１０￣５，其中ＦＭ＿３、ＦＭ＿（４２）、ＦＭ＿（５３）、ＦＭ＿（１５９）等单抗具有ＥＬＩＳＡ特性，腹水抗体效价为１０￣３～１０￣５。ＦＭ＿（１５０）识别血清Ｉ型ＭＤＶ；ＦＭ＿３、ＦＭ＿１７识别血清Ｉ型ＭＤＶ；ＦＭ＿（５３）、ＦＭ＿（５７）识别血清Ⅲ型ＭＤＶ；ＦＭ＿（４５）识别血清Ｉ和Ⅱ型ＭＤＶ；ＦＭ＿（２４）识别血清Ⅱ型和Ⅲ型ＭＤＶ；ＦＭ＿（４２）能识别三个血清型ＭＤＶ。这些单克隆抗体可用于ＭＤ早期诊断，和疫苗质量的监测。     

猪流行性腹泻弱毒疫苗的研究

用从广州地区流行性腹泻病猪分离并适应到Ｖｅｒｏ等传代细胞的猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ）Ｇ１强毒株，通过Ｖｅｒｏ、ｐＫ１５、ＳＴ细胞株的连续传代，证明第７２代毒已被致弱。用８３代毒（Ｐ８３）对吃初乳前的小猪以８～１０ｍｌ剂量口服连续传５代，每代都从接种猪小肠取样接种细胞进行培养鉴定，并于增殖后作为次代接种材料，结果５代毒均未引起小猪发病，证实该代次毒株的安全、稳定，达到了常规弱毒疫苗株要求的标准。用Ｐ８３制成弱毒疫苗，对２２头８～１０日龄小猪进行免疾效力试验，１４头口服免疫，８头颈肌注射免疫，剂量均为２ｍｌ／头。免疫后２１ｄ以最小发病量（即原毒液的１：１２稀释液）及原毒液的２倍、４倍和８倍的稀释液经口进行强毒攻击，对照组１２头也以相对剂量同时攻击。结果免疫组仅口服免疫、经大于最小强毒攻击量６倍剂量攻击组中１头（１／２）有一过性轻微腹泻，发病不到２４ｈ即恢复。对照组的１２头中有１０头典型发病，严重腹泻，并有寒颤等症状，病程长达３～６ｄ，７ｄ后腹泻症状消失，但体况明显削瘦。试验证明Ｐ８３制备的弱毒疫苗的总免疫效力达９４．６％，表明Ｐ８３已具备弱毒疫苗株的要求。     

用聚合酶链反应及核酸探针从新城疫病鸡体内检出传染性法氏囊病病毒

用鸡传染性法氏党病病毒（ＩＢＤＶ）逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和地高辛（ＤＩＧ）标记的ｃＤＮＡ探针组织印迹杂交试验，从某鸡场爆发新城疫（ＮＤ）的病鸡脾及法氏囊组织中检测到了ＩＢＤＶ，证明该ＮＤ病鸡存在ＩＢＤＶ的亚临床鸡鸡感染。进而分析了该疫情的爆发原因，并对鸡传染性法氏囊病的亚临床型感染和免疫程序进行了研究。     

鸡腺胃型传染性支气管炎的诊断及病毒分离鉴定

天津市部分鸡场发生一种以病鸡极度消瘦、拉稀和死亡为主要特征的传染病，经鉴定确诊为鸡腺胃型传染性支气管炎（ ＧＩＢ） ，并分离出ＩＢＶ ＪＢ９７０２ 株，ＨＡ 效价为２１２，ＥＩＤ５０ 为１０ －６．８１／０ ．２ ｍ Ｌ。病毒干扰试验中，ＩＢＶＪＢ９７０２ ＋ ＮＤＶ ＬａＳｏｔａ接种鸡胚ＨＡ 效价为２４～６ ，ＬａＳｏｔａ 接种鸡胚ＨＡ 效价为２１０～１１ ；用ＩＢＶ ＪＢ９７０２ 病毒液１∶１０ 稀释后感染经ＩＢＶ Ｈ１２０ 弱毒疫苗免疫雏鸡，发病８／１０ ，死亡３／１０ 。     

分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

采用腹腔接种和１次脾内注射禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）蛋白免疫小鼠，经３次融合后，共筛选出８株分泌抗禽呼肠孤病毒（单克隆抗体杂交瘤细胞株。这８株ＭｃＡｂ均可与ＡＲＶＳ１１３３株、ＦＤＯ株发生反应，而与ＩＢＤＶ，ＭＤＶ，ＥＤＳ－７６病毒不发生反应。经亚类鉴定，ＡＥ７，ＡＦ８，ＢＤ１，ＤＨ１０，ＥＥ５为ＩｇＧ１；ＡＤ６，ＣＧ４为ＩｇＧ２ａ；ＡＧ７为ＩｇＧ２ｂ。腹水效价在１０￣３～１０￣５之间。     

鸡马立克氏病单价活疫苗免疫效力比较试验

用农业部南京药械厂和三家外国动物保健品公司生产的４种火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）冻干苗、实验室制备的ＣＶＩ９８８细胞结合苗和ＨＶＴ细胞结合苗等６种鸡马立克氏病（ＭＤ）单价活疫苗免疫１日龄ＳＰＦ白来航鸡，８日龄时用鸡马立克氏病强毒（ｖＭＤＶ）ＧＡ株攻击，同时以Ｚ４＋ＦＣ１２６双价活疫苗作对照，进行免疫效力比较试验。结果表明，６种ＭＤ单价活疫苗均能使免疫鸡群获得对ｖＭＤＶ攻击的免疫保护力，免疫效力强弱顺序依次是ＣＶＩ９８８，ＨＶＴ细胞结合苗和ＨＶＴ冻干苗；国产ＨＶＴ冻干苗的免疫效力不低于三家外国公司生产的ＨＶＴ冻干苗；Ｚ４＋ＦＣ１２６双价苗的免疫效力显著高于各种ＭＤ单价苗     

貂病毒性肠炎牛睾丸细胞弱毒疫苗株的安全性和免疫原性研究

用从患貂病毒性肠炎（ＭＶＥ）死亡水貂分离的强毒株，经牛睾丸细胞（ＣＴ）和猫肾传代细胞（ＣＲＦＫ）混合培养，强迫传代、克隆培育的ＭＶＥ弱毒株扩增制苗，给不同品系水貂注射或口服１～５ｍｌ．未发生临床反应。注苗后１２、６０、７０天和６个月攻毒，１００％保护；对照水貂全部发病，５０％死亡。通过对６５１只（次）水貂的安全性、免疫原性、遗传稳定性试验和中和抗体测定及同居感染试验，证明该弱毒株具有良好的安全性、免疫原性和遗传稳定性。     

斑点免疫金染色检测雏鹅新型病毒性肠炎抗体研究

应用提纯的雏鹅病毒性肠炎病毒（ＮＧＶＥＶ）抗原制备抗原诊断膜，建立了ＩｇＧ的金颗粒标记、抗原抗体反应同步试验的斑点免疫金染色（ＤｏｔＩＧＳ）检测雏鹅新型病毒性肠炎（ＮＧＶＥ，暂定）抗体的方法，只需３０～４０ｍｉｎ即可判断结果；与本动物抗ＧＰＶ，ＤＰＶ，ＮＤＶ，ＩＢＶ，ＩＬＴＶ，ＭＤＶ，ＩＢＤＶ，ＥＤＳＶ及多杀性巴氏杆菌血清不发生交叉反应；对兔抗ＮＧＶＥＶ的ＩｇＧ的最低检出量为１．０×１０－１０ｇ／ｍＬ。雏鹅感染ＮＧＶＥＶ强毒后第３ｄ、成年鹅接种ＮＧＶＥＶＣＮ４０弱毒疫苗后第３ｄ即可检测到相应抗体。对重庆市和四川省１０个县（市）的６１７份成年鹅血清进行检测，结果ＮＧＶＥ的血清阳性率为３０．４４％～３６．８４％。该法适用于雏鹅感染的早期诊断、成年鹅的血清流行病学调查和疫苗免疫效果评价等。