陈旧性骨骼DNA提取技术的研究

对陈旧性骨骼建立一个高回收率并能除去 PCR 反应抑制物的提取 DNA 的方法。采用 CTAB 法提取 DNA。结果显示,该方法不但能有效去除 PCR 抑制物,而且对水泡、火烧、土埋以及10年左右的骨骼所提取的 DNA 均能成功地进行荧光标记 STR 多基因座扩增检验。实验表明,该方法稳定,重复性好,适合陈旧骨骼标本的 DNA 提取。     

应用磁珠法提取陈旧骨骼DNA

目的探讨采用磁珠法提取陈旧骨骼DNA的可行性。方法取经土埋或室外暴露下存放1~5年不等的10根长骨,经水洗、刮净,钻取骨密质骨粉3g,应用EQ1000磁珠试剂盒提取DNA,经复合扩增,ABI 3130XL基因分析仪电泳分离,进行STR分型检测。结果 10根长骨均获得完整的STR分型,电泳图谱基线干净,除个别大片段基因座外,等位基因荧光信号分布均衡性较好。结论采用磁珠法提取陈旧骨骼的DNA,能满足分型要求,可在实际检案中选用。     

模板DNA磁珠提取法

<正> 生物检材的DNA分析结果取决于对检材DNA的提取与获得。DNA提取的方法很多,如常规采用的有机酚-氯仿提取法和Chelex-100提取法。前者操作复杂,步骤多,虽纯度高但回收率低;后者操作简便、快速,但纯度低,含有大量酶抑制剂,影响检验的成功率。本文作者介绍一种提取DNA纯度高的快速方法。     

烧骨DNA检验技术的研究

目的解决陈旧性骨骼和烧骨DNA检验难题。方法研究建立了CTAB法裂解提取DNA,再用磁珠纯化得到的DNA提取液进行STR复合扩增检验。结果实验结果及实际检案显示研究所建立的骨DNA提取方法能较好地去除DNA扩增抑制物,得到高质量的DNA模板。结论本研究所建立的烧骨DNA检验方法其识别率为10×10-12,达到个人同一认定的目的,在解决实际工作中杀人焚尸案、火灾、爆炸等恶性案件和事故中有重要的作用。     

纳米磁珠提取法在骨骼DNA提取中的应用

目的对纳米磁珠法提取纯化骨骼DNA的效果进行比较评价,为方法选择提供应用参考。方法取泥土掩埋、水中浸泡1~10年不等的25根长骨,经水洗、刮净,液氮冷冻研磨器将骨骼研磨成粉末状,分别应用纳米磁珠提取法和King Fisher仪器自动化提取法提取DNA,IdentifilerPlus试剂盒进行扩增,ABI 3100遗传分析仪进行STR分型检测;对两种方法提取的DNA定量和经扩增、分型检测的结果进行比较。结果骨骼样本采用纳米磁珠法提取到的样本DNA(1.237 5ng/μL±0.319 2ng/μL),较之King Fisher法的浓度(0.506 2ng/μL±0.280 5ng/μL)更高,两种方法间差异具有统计学意义(P0.05);而纳米磁珠法的分型成功率亦更高,两种方法间差异具有统计学意义(P0.05)。结论用纳米磁珠提取纯化骨骼DNA,能得到高质量DNA模板,有利于提高分型检验的成功率,可在实际检案中选择使用。     

陈旧骨骼DNA提取

目的寻找从陈旧骨骼中提取DNA的有效方法。方法运用传统的有机法结合Microcon100纯化柱提取骨骼DNA。结果用常规荧光标记复合STR基因分型法可对提取到的陈旧骨骼DNA进行成功分析。结论有机法结合Micrcon100纯化柱提取陈旧骨骼DNA法可有效应用于实际检案。     

运用CTAB与磁珠提取法检验1例焚烧骨骼

焚烧案件现场中肌肉组织往往难以留存,但是一般可能有骨骼存在。对残存骨骼进行DNA检验,确定尸体身源,进行个人识别对案件侦破具有重要价值。本案例中为一焚烧后骨骼,运用CTAB裂解、磁珠纯化、STR荧光复合扩增、ABI310测序仪检测,得到理想检验结果,报告如下:1案例资料2001年10月,山东省某市发生一起杀人焚尸案,焚尸现场经勘查仅提取到残存肱骨,在第一杀人现场提取到可疑血迹。要求进行DNA检验,确定焚烧尸体与现场血迹是否为同一人所留。对于骨骼检材,首先在紫外灯下照射1小时,用钻头钻取粉末,加入CTAB提取缓冲液裂解1,得到DNA提取…     

一种改良骨骼DNA的提取方法

采用十六烷基三甲基溴化铵(简称CTAB)及两次纯化浓缩的方法提取骨骼DNA,利用荧光标记复合扩增、自动毛细管电泳与分型的技术,成功检测到14个STR位点的分型.该方法稳定、结果可靠,为严重降解骨骼DNA的提取提供了一种可参用的方法.     

46年陈旧骨骼DNA检验1例

<正>1案例资料1.1简要案情王某,女,46年前去世,当时土葬,2011年7月发现尸骨被盗,需要对公安部门破获盗窃年轻女性尸骨案中提取的陈旧尸骨与王某女儿(现年49岁)血液样本进行DNA分型比对,以确定尸骨身源。1.2 DNA检验及结果骨骼处理取肱骨,去除骨骼表面污染物,中性     

陈旧骨骼DNA提取及性别鉴定

用本室建立的方法对3～15年的陈旧骨骼进行DNA提取，并用X、Y同源引物扩增AInelogenin基因X、Y特异性片段，所有检材均得出正确结论，表明该方法快速、灵敏、可靠，适用于陈旧骨骼性别鉴定。     

陈旧骨骼模板DNA提取中的有关处理方法

骨骼检验是法医学个人识别与亲子鉴定中又一种较为常见的生物检材.尤其是在高度腐败无名尸、重大灾难(如空难)、战事及反恐寻凶中认尸等情况,有时骨骼、遗骸则成为个人识别与亲子鉴定中相当重要的生物检材.近年来,本室曾先后受理、承办数例以可疑遗骸、骨骼为主要生物检材的法医个人识别与亲子鉴定的案件.     

陈旧骨骼DNA提取方法的应用研究

在法医实践中,DNA检验已成为个体识别鉴定的常规技术。现场提取的检材中,骨组织具有耐腐败特性,当其他检材完全腐败后,骨组织仍能够作为DNA检验的重要材料。但陈旧尸骨骨组织中DNA含量少且高度降解,给提取DNA带来一定难度。本文采用较高温度脱钙,在磷酸盐缓冲液条件下经SDS-PK、GuSCN消化裂解骨细胞,含DNA的裂解产物经硅珠纯化,从1~16年的陈旧骨骼中提取到高质量DNA模板用于STR分型,成功率为95.5%。现将方法报告如下:1材料与方法1.1材料骨骼样本89根,来源于送检案件。其中完整长骨78根,断骨和骨片11根。现场条件有泥土掩埋、水…     

陈旧骨骼DNA检验2例

对高度腐败及白骨化的尸体,骨骼是进行DNA检验的唯一检材。由于骨骼的特殊组织结构及环境因素的影响,使骨骼DNA提取较一般的组织困难。本文作者运用传统的有机法结合Microcon100纯化柱提取骨骼DNA,对2例陈旧骨骼DNA进行检验,现报道如下。1简要案情例12004年8月某河边发现一白骨化的尸骨,破案证实系2001年5月失踪的出租车司机陈某。取肱骨1根进行DNA检验。例22005年6月某水库内发现部分碎尸块,破案证实系半年前失踪的郭某。取股骨1根进行DNA检验。2DNA检验骨骼处理用手术刀片刮净骨骼表面的污垢,蒸馏水冲洗干净后晾干,在紫外灯下照…     

骨骼DNA提取与检测的法医学研究进展

骨骼DNA提取与检测是大规模灾难受害者、失踪人员以及刑事案件法医DNA鉴定过程的重要组成部分。骨骼的部位、类型以及温度、湿度、微生物、酸碱度等因素都会影响骨骼中DNA的“质”和“量”,从而影响检测的准确性。随着科技的发展,短串联重复序列基因座、DNA检测试剂盒以及单核苷酸多态性技术、线粒体DNA检测技术不断进步,提高了骨骼DNA的提取与检测的成功率。因此,了解影响DNA提取与检测的骨骼类型以及环境因素,选取适当的检测方法和手段显得尤为重要,通过重点综述影响骨骼DNA质量的环境因素以及骨骼DNA提取与检测手段的研究进展,以期为法医学领域使用骨骼作为检材时遇到的问题提供指导。     

利用压力循环仪提取骨骼DNA

目的探讨建立利用压力循环技术提取骨骼DNA的新方法。方法将11个不同部位骨骼样品分成3组,一组采用本实验室常规方法处理骨骼,一组采用压力循环仪处理骨骼,另外一组作为阴性对照,然后统一进行DNA的提取及定量。结果采用压力循环技术提取骨骼DNA时间比实验室常规方法缩短24小时以上,提取效率提高6%～49%。结论压力循环技术可以作为一种提取骨骼DNA提取的新方法之一。     

用chelex-100提取骨骼DNA的研究

建立了应用chelex-100加蛋白酶K提取骨骼DNA的方法,并对1～30年31例骨骼进行了实验.该方法操作简单、快速、重复性好,灵敏度以及阳性率高,适用于法医学鉴定.     

应用硅珠法提取陈旧骨骼DNA

骨骼相对于人体其他的组织脏器腐败降解慢,是进行高度腐败及白骨化样本DNA检验的唯一检材。但骨骼DNA的提取比较困难,本文运用传统的硅珠法提取骨骼DNA取得了很好的效果。1材料与方法1.1样本1~4年水浸泡、土埋的股骨、肱骨等样本,来自本实验室日常检案检材。1.2方法1.2.1骨骼DNA提取用水洗净骨骼表面,晾干。锯成小块,用锉打磨内外表面。去离子水、乙醇和5%bleach浸泡、晾干,磨成粉末。取骨粉5g;加入0.5mon/L EDTA(pH8.0)溶液,搅拌均匀置于摇床上脱钙12h,去离子水洗两遍,去上清,重复4次[1];沉渣中加入适量裂解液(6mon/L GuSCN,20mo…     

甲醛固定骨骼及肌肉组织的DNA提取1例

无论是在医院还是在司法等鉴定机构都存在大量的经甲醛固定的骨骼或其它组织,这些组织的DAN能否成功提取往往在医疗纠纷及刑事案件中起着举足轻重的作用,因此DNA的成功提取是关键点。本文通过添加蛋白酶K,简化DNA提取步骤,纯化DNA提取物,成功的获得了经甲醛固定达10年之久的骨骼及肌肉组织当中的DNA。     

磁珠DNA自动提取系统在法医检验中的应用

磁珠DNA自动提取系统是将磁珠分离技术与DNA自动提取工作站结合运用,以达到高效提取DNA的目的,它具有操作时间短、准确性高、检材用量少等特点,特别适用于大批量生物检材的快速提取,是目前主流的DNA自动化提取方法。本文对磁珠DNA自动提取系统的基本组成、工作原理、操作流程及其在法医检验领域中的应用等进行了综述,并对该系统的发展前景进行了展望。     

利用AutoMate Express~(TM)系统提取陈旧性骨骼DNA

目的建立利用AutoMate Express~(TM)系统提取陈旧性骨骼DNA的方法。方法将骨骼用冷冻研磨机研磨成骨粉,经AutoMate Express~(TM)系统提取后,用Identifiler~Plus、MiniFiler~(TM)试剂盒扩增分型。结果10例保存在不同环境中、死亡时间在10~20年的骨骼样本利用AutoMate Express~(TM)系统3 h内完成DNA提取,有8例获得完整STR分型。结论 AutoMate Express~(TM)系统能快速、高效地提取陈旧性骨骼DNA,可应用于法医实际案件检验。