对水牛伊氏锥虫活力及分裂的观察

有关伊氏锥虫侵袭水牛引起的临床症状及对其的防治方法,已有不少报道,而关于本病原的活力和分裂情况研究的资料却甚少。我们对自然感染水牛和人工感染小白鼠的血片直接镜检,观察了伊氏锥虫活力与分裂变化。 (一)材料与方法 1.试验动物:阳性水牛20头,均来自本县锥虫病疫区,其中车逻乡光明村11头,上庄村9头,对这些水牛耳静脉采血涂片直接镜检,发现每视野有伊氏锥虫3～10条;小白鼠30只,由南京小动物饲养场购入,每只腹腔注入阳性耕牛全血0.5毫升,作观察用。     

磺胺嘧啶对弓形虫在继代小鼠体内包囊形成的影响

用模式动物小白鼠继代弓形虫(Toxoplasmagondii)的过程中,随着继代次数增加,虫体毒力也随之增强,尤其弱毒虫株在继代过程中更为突出,随着继代次数和毒力的增强,鼠体内弓形虫包囊形成之前小鼠常发生死亡,从而给虫株包囊的研究带来一定的困难。据报道,国外研究者为获取弓形虫包囊,在继代小鼠的饮水中加入磺胺嘧啶(SD),可保证小鼠存活至组织包囊形成,但对饮服SD的浓度和时间未详细报道。为了确定不同浓度、不同饮服时间对小鼠体内弓形虫包囊形成及其毒力的影响,特进行了本试验。 (一)材料和方法 1.弓形虫QHO株组织包囊:弓形虫QHO株由本课题组分离继代培养。取预先接种弓形虫QHO株的小白鼠,引颈处死,取其含弓形虫包囊的脑组     

伯氨喹啉治疗耕牛伊氏锥虫病的研究

目前治疗本病的首选药物主要是拜耳205,其次是贝尼尔、安锥赛、硫酸盐等。但这些药物大都依靠进口,价格昂贵,远远不能满足生产实际需要。为了扩大治疗药物来源,降低医疗成本,近年来,我们应用伯氨喹啉治疗人工感染伊氏锥虫小白鼠;在此基础上又试验治疗自然感染伊氏锥虫耕牛85例,均取得了较为满意的疗效。     

应用IHA检测实验感染伊氏锥虫山羊血清抗体的消长动态

早在1941年,印度的Kuppaswamy就通过研究认为山羊与牛都可以看作是伊氏锥虫的保虫宿主。本研究的目的是,应用间接血凝试验(IHA)来检测人工感染伊氏锥虫的山羊血液中抗体变化的规律,从而为山羊感染伊氏锥虫的血清学诊断提供必要的理论依据。     

伊氏锥虫同工酶的研究

本文对我国5株伊氏锥虫的5种同工酶进行了初步研究。应用琼脂糖凝胶电泳技术检测了5株伊氏锥虫的苹果酸脱氢酶(MDH)、L-苹果酸辅酶Ⅱ氧化还原酶(ME)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、葡萄糖磷酸异构酶(GPI)和已糖激酶(HK)。5株伊氏锥虫的MDHME同工酶谱均相同,而G6PD、GPI和HK的同工酶谱显示出差别。分析表明,尽管某些同工酶谱存在着差异,但从总体水平分析,这些伊氏锥虫同工酶谱仍具有较高的相同性,属同源种群。     

伊氏锥虫 布氏锥虫和马媾疫锥虫对锥46的药敏试验

在我国,伊氏锥虫病流行 极广,达二十多个省区,对畜牧业生产危害极大。长期以来,伊氏锥虫病的治疗主要依赖为数甚少的几种药物,导致抗药虫株的产生,从而给该病的防治带来新的困难(沈杰等,1991;方元等,1992),急待高效新药产生。为了解决这一问题,上海家畜寄生虫病研究所与上海医药工业研究院合作,成功地合成、筛选了一种抗锥虫新药——雄46(T46)。确定伊氏锥虫对其的药敏性,为锥46的临床应用奠定合理的用药理论基础是十分必要的。本试验通过体内(小鼠治疗)和体外(人工培养)的方法检测了伊氏锥虫布氏锥虫和马媾疫锥虫对锥46的敏感性。     

弓形虫自然弱毒株QHO毒力稳定性研究——QHO株速殖子回归绵羊毒力变异的观察

本试验将弓形虫自然弱毒株QHO(绵羊源)通过小白鼠连续继代中,毒力增强后的速殖子回归于本动物绵羊,待弓形虫血清抗体滴度达到IHA 1:256以上,体内包囊形成之后,宰杀采集内脏组织,分离虫体,进行毒力测定。其结果表明回归绵羊后第1代速殖子的毒力比回归前明显减弱。     

伊氏锥虫动基体DNA微环的克隆

把伊氏锥虫云南株动基体DNA微环重组于puc19质粒载体,转化入大肠杆菌JM103菌株,获得KDNA全微环克隆。用α-~(32)P-dATP经缺口翻译标记的重组质粒(PTK)能与伊氏锥虫及其KDNA杂交,而不与核DNA杂交。该质粒探针具有高度的敏感性,能检测出10pg的KDNA和100个锥虫体,是快速鉴定伊氏锥虫的理想工具。     

浙、滇、皖伊氏锥虫株蛋白质及其抗原性的比较研究

应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹试验(Westernb-lot)对伊氏锥虫浙江株、云南株和安徽株的蛋白质及其抗原性进行了比较分析。研究结果显示三个锥虫株在蛋白质分子量、抗原性方面存在着较明显的差异。提示长期的地理隔离已使伊氏锥虫蛋白质抗原发生不同程度的变化。     

伊氏锥虫诱导鼠免疫抑制试验的研究

锥虫免疫抑制研究最早是由Goodwin于1970年报道的,他利用绵羊红细胞作为抗原来检查兔、鼠感染布氏锥虫后所产生的免疫抑制,以后其它学者也相继在刚果锥虫和活跃锥虫上进行过研究,并对其机制也进行了探讨。到目前还未见到国内外关于伊氏锥虫免疫抑制的研究报道,因此本试验旨在初步探索是否伊氏锥虫感染亦对机体产生免疫抑制,锥虫感染时间与免疫抑制有何关系以及抗锥虫药物治疗后又对其免疫有何影响?从而为伊氏锥虫研究以及为提高诊断和疫苗效果提供科学依据。     

分泌抗伊氏锥虫单克隆抗体杂交瘤株的建立

本试验以DEAE纤维柱层析法从感染小鼠血液中分离得纯净锥虫,再通过超声乳化,制备锥虫可溶性抗原,用其免疫BALB/c小鼠,再以此BALB/c小鼠脾细胞与SP_2/o骨髓瘤细胞融合,采用Dot-ELISA和间接ELISA法筛选出7株分泌针对伊氏锥虫的单克隆抗体的杂交瘤株(IH_(10)、AE_7、EB_6、BE_5、AG_(11)、BA_5、GB_6),实验结果表明,间接ELISA和Dot-ELISA符合率良好。分泌的7种克隆抗体有5株属于IgG_1,2株属于IgG_(2a);用阴性血清封闭试验及交互抑制试验证实7株单抗都是针对伊氏锥虫的,并证明是针对不同决定簇的。     

伊氏锥虫排泄分泌抗原特异性成分分析

伊氏锥虫排泄分泌抗原特异性成分分析谢超孙恩贵刘俊华王祥生（解放军农牧大学军事兽医研究所长春１３００６２）伊氏锥虫排泄分泌抗原（ＥＳＡ）是伊氏锥虫在繁殖阶段所释放的代谢产物。近年来的研究表明，锥虫ＥＳＡ在抗感染中起着重要作用，而且在一定程度上对宿主有免...     

锥虫不同分离株克隆及其等电聚焦分析

将两个伊氏锥虫及一个马媾疫锥虫的不同分离株分别接种用环磷 酰胺处理的小鼠,获得五个克隆,用等电聚焦比较其蛋白质差异。结果表 明,三个分离株之间有明显区别;马媾疫锥虫显著不同于伊氏锥虫;分离株 不同克隆间区别较小,其中广东水牛株两克隆间带型相同,安徽水牛株两克隆间带型略有区别。证明伊氏锥虫克隆间变异较小,锥虫不同分离株间变异较大,马媾疫锥虫与伊氏锥虫之间变异最大。     

实验感染山羊伊氏锥虫病血清蛋白组份动态变化的研究

用伊氏锥虫(Trypanosoma evansi)腹腔接种8只健康山羊,定期采血,分别用双缩脲法和醋酸纤维素薄膜电泳法分析血清总蛋白及其各组份的动态变化。结果表明:血清总蛋白含量感染前后及与对照组相比差异不显著(P>0.05)。而血清蛋白中的各组份的比例实验前后具有明显地变化。各组份均具有明显的动态变化;血清白蛋白(A)呈明显的下降趋势(P<0.001);β球蛋白亦呈明显的下降趋势(P<0.001);γ球蛋白呈明显的上升趋势(P<0.001)。被感染的8只山羊在57天的血液压滴镜检中未见虫体,但第33天采血接种小白鼠,可使其发病死亡,血液压滴镜检有大量锥虫。     

酶标记和间接血凝法对锥虫病牛循环抗体消长的测定

伊氏锥虫病的诊断过去主要依靠末稍血液内虫体的镜检方法,但伊氏锥虫在末稍血液中时隐时现,出没无常,除急性病例外,对亚急性、慢性及带虫者的诊断是较困难的。近年来随着免疫学研究的进展,对伊氏锥虫病的诊断也取得了很大的成绩。如沉淀试验(Bansal和Pathank 1971)、凝胶扩散(Draper 1976)、补体结合反应(Sabanshiev 1973)和荧光抗体技术(Kagan 1974)等法相继建立,均有一定的诊断价值。然而寻求一种更新的特异性     

伊氏锥虫体外培养的研究

用鼠体继代的水牛伊氏锥虫进行体外培养。经试验证实,以RPMI_(1640)加入20mmolHEPES、2mmol L-谷氨酰胺、2mmol L-苏氨酸、1.5mg/mlD-葡萄糖、0.5％水解乳蛋白(LH)及10％灭活犊牛血清组成的CM_3培养基,并以牛睾丸原代细胞为饲养层细胞效果最好,在37℃下可较好地支持伊氏锥虫的生长,接种虫体起始浓度为10~5/ml左右,可于第2天增至10~6/ml,并可维持该浓度达5天之久,从第6天开始,虫体逐渐减少,虫体可在该系统中存活14天,将培养12天的培养物接种小鼠,对小鼠致病性不变,同时还测定了HEPES、D-葡萄糖、培养不同时间的细胞单层、虫体不同接种浓度等对锥虫体外培养的影响。     

伊氏锥虫毛细管集虫直接镜检法

有关镜检各种锥虫的更为敏感、快速的方法,近十几年国外先后报道的有血容计离心技术(HCT)、毛细管离心技术(CCT)、微型阴离子交换器/离心法(MAEC)、暗视野/相差白细胞层检查法(DG)、硅酮离心法(SCM)和最小离心机微量毛细管法。国内至今尚无这方面的研究报告仍沿用压滴标本法。有鉴于此,我们从国内基层兽医诊疗机构的设备条件出发,参照上述各种方法,建立了一种用于伊氏锥虫检查的毛细管集虫直接镜检法,在实验室和野外条件下,将此法与压滴标本法作了比较,成绩颇佳。 (一)材料和方法     

锥虫病和肝片吸虫病双联诊断液的研制

我们曾先后研制了锥虫病,肝片吸虫病单能诊断液,并已用于耕牛上述疾病的普查。之后根据在同一红细胞上可以附载多种抗原测定多种抗体的原理,又进行了锥虫和肝片吸虫两病双联诊断液的研制。 (一)材料与方法 1.抗原制备 (1)锥虫抗原制备:取液氮保存的锥虫,用大白鼠增殖,待虫体达高峰时放血、离心,取棕黄层细胞,过DEAE纤维素柱分离虫体。将纯净虫体冻融后超声波处理、离心,取上清液作抗原,低温保存备用。     

钴~(60)γ射线照射伊氏锥虫免疫试验

家畜伊氏锥虫病广泛流行于我国南方,在湖北省相当严重。1973年宜城等6个县锥虫病大爆发,患病牛、马达8241头,死亡5288头,经济损失约211万元。为控制本病流行,除用药物治疗外,并以免疫方面进行了研究。1975年Fregene等以~(137)CS照射布氏锥虫与冈保锥虫,布氏锥虫照射剂量为4.60±0.12仟拉得,冈保锥虫为2.9仟拉得,10～20天以后以10~4同源虫株攻击,前者保护存活为74.3％,后者为31.7％。但伊氏锥虫免疫效果如何,未见报道。为此,我们进行锥虫免疫试验研究。     

DEAE纤维素纯化犬伊氏锥虫

从实验感染伊氏锥虫的犬颈动脉采得的虫血,经2500～3000rpm离心15～20分钟,所得的虫膜中混有大量红细胞、白细胞、血小板等,这些血液的有形成分严重影响着锥虫抗原的纯度。我们采用DEAE纤维素层析法分离出较纯净的锥虫,用于制备间接血凝诊断液,提高了血清学试验的特异性。