抗人血红蛋白胶体金检测试剂条的研制

目的制备法医学检验所用的确定人血的免疫胶体金层析试剂条。方法选取抗人血红蛋白单克隆细胞株,制备其小鼠腹水,从腹水中纯化出单克隆抗体。制备胶体金并用一纯化的单克隆抗体包被,制成免疫胶体金。取玻璃纤维以免疫胶体金浸泡,烘干。在一硝酸纤维素膜上两个不同位置分别点加另一抗人血红蛋白抗体和羊抗鼠IgG。搭建试剂条并检测其灵敏度和特异性。结果制成的免疫胶体金试剂条可对稀释至20万倍的人血红蛋白溶液显示阳性,对法医学检验常见8种动物的血溶液显示阴性。结论所制备抗人血红蛋白胶体金试剂条可以应用于法医学检验。     

PCR-RFLP用于 ABO分型遇到的问题及解决方法

用 PCR-RFLP技术进行 ABO基因分型,是从基因水平进行 ABO血型判定,具有操作简单、结果准确等优点,特别是能够解决 " 非分泌 " 型斑迹的血型鉴定问题,在法医学中具有重要的应用价值。近年来这种技术已广泛地被国内外众多法医界学者采用,取得了较好的效果 [1-3]。我们实验室应用 PCR-RFLP方法 [4 ]在对刑事案件中 100 多份血斑、混合斑生物物证进行 ABO基因型检测的过程中,对绝大多数生物物证的血型都能做出明确的判定。但曾遇到过两份生物物证,一份是手帕上微量的血迹 ,另一份是阴道擦拭棉签,在结果判定上遇到了问题,不能明确判定血型。原因是,人 ABO基因 233～ 433区域扩增产物经电泳分离后产生的本该为 200bp一条区带,而这两份样品 233～ 433区域扩增产物经电泳分离后除产生 200bp区带外,在 178 bp 位置另显现一条清晰的区带,从而干扰了 KpnI酶切结果的判读,导致不能确定两份样品的基因型。为解决这类样品的 ABO基因分型问题,我们取该手帕血 DNA,对 ABO基因的 233～ 433 与 660～ 788两个区域进行序列分析,报告如下。     

SNaPshot技术应用于云南省部分人群ABO血型基因分型

目的应用SNa Pshot技术对ABO血型进行基因型检测。方法采集107份已知血型(由血清学获得)的云南无关个体静脉血提取DNA,运用SNa Pshot Multiplex试剂盒对ABO血型基因的第261、297、681、703、802和803核苷酸位置的6个SNP位点进行复合扩增检测,计算相关遗传学参数。结果 107份血样中A、B、O~A、O~G 4个等位基因的频率分别为0.355 1、0.168 2、0.230 0、0.247 6,其中A~G和顺式AB未检出,ABO基因分型结果与血清学检验的结果一致。结论 SNaPshot技术适用于ABO血型基因的分型。     

检验人精浆特异蛋白P30免疫胶体金试剂条的研制

目的制备用于检验人精浆特异蛋白P30-主要是来自法医学案件的免疫胶体金层析试剂条.方法选取针对不同抗原决定簇的抗P30单克隆抗体细胞株,并制备其小鼠腹水,分离纯化单克隆抗体.制备胶体金并以纯化抗体包被,制成免疫胶体金,以免疫胶体金浸泡玻璃纤维.选取适宜的硝酸纤维素膜并于其上不同位置以未金标的另一株P30单克隆抗体和羊抗鼠IgG包被.搭建试剂条并检测其灵敏度和特异性.结果所制成的试剂条灵敏度至少可达4ng/ml;对6人份混合的人精液物质在稀释20万倍后仍出阳性结果,且无非特异性反应.结论检验人精浆特异蛋白P30的免疫胶体金试剂条可对嫌疑人精物质做出排查,有利于法医物证检验.     

TES缓冲液在陈旧性血斑金标抗人Hb试剂条试验中的应用

目的分析评价TES缓冲液在陈旧性血斑金标抗人Hb试剂条试验中的应用效果。方法对31份10年以上的陈旧性血斑进行联苯胺试验;分别使用蒸馏水和TES缓冲液震荡浸泡检材,于0h、6h、12h、24h进行金标抗人Hb试剂条试验。结果 31份陈旧性血斑联苯胺试验呈不同程度阳性;金标抗人Hb试剂条试验,TES缓冲液组有9份检材检测为阳性,6h后14份检材出现阳性结果,而蒸馏水组仅有1份检材浸泡6h后检测为阳性。结论对于10年以上的陈旧性血斑,使用TES缓冲液进行金标抗人Hb试剂条试验,并适当延长浸泡时间能显著提高种属鉴定检出率。     

可疑斑迹前列腺特异性抗原检测1例

正1案例1.1简要案情某夫妻携带一张附着有可疑斑迹且潮湿的卫生纸到本鉴定中心,该卫生纸为丈夫在家里客厅垃圾桶中所捡。该夫妻要求检验卫生纸上可疑斑迹中是否有男性精液及女性成分,对其进行DNA检测,并与夫妻双方DNA分型结果进行比对。1.2检验过程及结果通过金标试剂条法对卫生纸上的斑迹进行人精液前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)检验,结果呈阳性(图1),提示该卫生纸上含有人精液或人前列腺液。     

三条带模式与稀有等位基因共存样品DNA检验1例

1案例资料 1.1简要案情 2009年12月14日,伊某报案称被人强奸,现场提取受害人伊某的外裤一条,同时提取嫌疑人王某的血样、唾液斑各一份。经初步检验,在受害人的裤子上发现白色可疑斑迹一处,经酸性磷酸酶试验及抗人精PSA金标试剂条检验,结果均为阴性,该斑迹经涂片染色在高倍显微镜下未检见精子,     

新鲜血痕样本直接扩增试验条件比较

目的探讨新鲜血痕在不同直接扩增试剂盒的试验条件。方法存放2d内的新鲜血痕FTA卡540份和存放1~3m的陈旧性血痕FTA卡270份,各分别随机均分为3组,每份血痕打3片1.0mm纸片,分别用DNATyperTM15Plus试剂盒、GoldeyeTM20A试剂盒和华夏TM试剂盒在标准条件(说明书条件)、优化条件1(标准条件+1μL DMSO)和优化条件2(标准条件+室温浸泡1h)扩增检验,比较在3种条件下各组STR检验成功率。结果陈旧血痕样本用3种直扩试剂盒,在3种条件下,检验成功率均97.00%,且均高于新鲜血痕。新鲜血痕在标准条件和优化条件1下,成功率为27.22%~31.67%,在优化条件2下,检验成功率相似(97.00%),与标准条件和优化条件1比较,有统计学差异(P0.01)。结论新鲜血痕在加入直接扩增试剂后于室温浸泡1h,可有效提高STR检验成功率。     

排便后擦拭手纸DNA检验1例

<正>1案例资料1.1简要案情樊某,女,4岁。2011年2月被一男性猥亵,因其之后已洗澡,故提取现场粘有粪便的手纸、樊某当时穿的棉毛裤及樊某血样,要求进行DNA分型检验。1.2 DNA检验DNA提取剪取手纸(P30试验阴性)及棉毛裤上的可疑斑迹(P30试验阳性)少许,用双蒸水浸泡、离心,手纸疑斑迹用Chelex-100法提取DNA并采用磁珠法进     

检验A、B、H血型物质指示红细胞的研制

采用单克隆抗Ａ、抗Ｂ、抗Ｈ抗体致敏人Ｏ型红细胞 ,所获得的检验人体液 (斑 )的Ａ、Ｂ、Ｈ指示红细胞 ,为检验人体液斑迹的ＡＢＯ血型提供了一种新的试剂。在制备过程中 ,抗体载体的选定、致敏所需抗体的浓度和致敏环境的酸碱度都直接影响指示红细胞的凝集效价。经过反复实验探索 ,选择出了理想的条件。1　材料与方法1 1　人Ｏ型红细胞的醛化取多人份混合的人Ｏ型红细胞 ,用生理盐水充分洗涤后 ,将压积红细胞用 4℃预冷 ,含 0 5%戊二醛的ＰＢＳ缓冲液稀释成 10 %的悬液 ,作用 30ｍｉｎ后 ,2 0 0 0ｒ/ｍｉｎ离心 2 0ｍｉｎ ,弃上清液 ;将压…     

生物检材中的PCR抑制物及其处理技术

DNA分型技术在刑事案件的侦破中已得到广泛应用,但不同来源的各种生物检材往往含有PCR抑制物,其对扩增反应的影响不容忽视。因此,DNA样本扩增前预处理就显得尤为重要。本文主要就PCR抑制物种类及其对PCR的抑制机制、PCR抑制物应对技术等相关研究进展进行简要综述,旨在为相关研究和应用提供参考。     

人体组织/体液来源的法医学鉴定

生物检材的组织/体液来源鉴定是法医学检验的重要内容之一。法医学组织/体液鉴定的方法较多,无论是基于酶促反应或免疫学检测的传统鉴定方法,还是光谱法或近年来基于mRNA、microRNA或DNA甲基化差异的分子生物学组织鉴定技术,均各有特点。本文就各种法医学组织/体液鉴定方法的特点及其法医学应用价值作一简要综述。     

生物检材中杀鼠药检验的研究进展

综述了近十几年来生物检材中常见杀鼠药检验的研究成果,分析讨论了在杀鼠药检验中TLC、GC、HPLC等方法的特点及适用范围.     

超滤管在陈旧生物检材中的应用

目的探讨millipore超滤管滤过方法对陈旧生物检材DNA分型检验的应用价值。方法将23份陈旧血样分别剪取同样合适大小的血片3组,标为A、B、C组,磁珠法提取DNA,分别用80μL、80μL、20μL洗脱液洗脱得到模板DNA,其中A、C组模板直接扩增,B组用millipore超滤管滤过浓缩后扩增。PCR产物用AB3130x L基因分析仪检测,Gene Mapper ID V3.2软件进行自动分型。所得实验数据用SPSS软件分析处理。结果 A组没有1例样本扩出全部STR基因座,B组有18例样本扩出全部STR基因座,C组有11个样本扩出全部STR基因座。结论应用millipore超滤管滤过方法可以明显提高陈旧生物检材的DNA分型成功率。     

人类DRB基因单核苷酸多态性研究

目的建立一种对单核苷酸多态性(SNPs)位点进行复合检测的方法,并对人类DRB基因的单核苷酸多态性进行研究。方法 应用荧光标记双脱氧核苷酸进行单碱基延伸反应,同步检测人类DRB基因10个单核苷酸多态性位点。结果 应用该方法检验了人类标准细胞株K562、9947A及其他法医学常见生物检材,包括血斑2份、精斑5份、烟蒂8份、毛发3份,各样品间未发现相同的单核苷酸多态性组合单倍型。DNA模板需要量仅为0.5~1.0ng。结论 该方法是对微量生物物证进行个体识别鉴定的理想方法。同时还可为法医学及其他研究领域进行单核苷酸多态性分析提供快速、高效的技术手段。     

盗窃案件现场检材提取与DNA检测结果的统计分析

目的统计分析1574例盗窃案件中提取的2496个现场生物检材,为提高DNA在盗窃案件侦破中的应用成效提供参考。方法根据2496个生物检材的类型、现场提取方法、重点提取部位、DNA检测结果等进行统计和分析比较,总结常见类型盗窃案件现场生物检材的主要发现提取部位以及不同方法提取的现场生物检材DNA检出率。结果接触类检材已成为盗窃案件最多见的生物检材类型,但检出率仍然较低,对混合分型应进一步分析筛选以提高DNA的认定率;不同方法提取的现场生物检材在DNA检出率方面存在统计学差异,接触类生物检材以植绒拭子和原物提取的方式为首选;现场生物检材的主要发现提取部位根据盗窃案件的类型不同有所侧重。结论现场勘查人员在盗窃案件中发现和提取到有价值的生物检材是提高DNA检出认定能力的关键因素,应着力培养现场勘查人员的微量生物物证意识,提高现场勘查人员提取和处理微量生物检材的能力。     

运用分子生物学方法鉴定生物检材种属的研究进展

生物检材的种属鉴定在法医、海关和食品行业中均有较多应用。当前,用于鉴定种属的分子生物学方法发展迅猛。本文结合文献,从用于种属鉴定的目的基因及筛选标准、主要分子生物学方法、鉴定存在的主要问题等方面进行综述,并结合Real-time PCR和SNP技术对未来种属鉴定的发展方向进行了预测。     

混合生物样品的组分分析及其STR基因型判定

目的应用荧光标记STR多基因座联合检测技术对混合生物样品较少组分最低比例检出限和STR基因型的判定进行研究。方法 将已知浓度的人标准细胞系DNA:9947A和K562分别按照1:1、1:4、1:9、1:19、1:39、1:59、1:79和1:99比例混合后作为扩增模板,应用Profiler plus试剂盒对D3S1358、VWA、FGA、D8S1179、D21S11、D18S51、D5S818、D13S317、D7S820和性别鉴定基因座检验。结果在比例为1:19时能明确判定两个体各基因座基因型,且两样品基因型结果峰高平均值之比与样品浓度之比正相关。结论应用荧光标记STR多基因座联合检测技术可以对一定比例的混合生物样品进行STR基因型判定,并对其混合比例状况进行大致推断。     

磁珠直接吸附法对体态检材游离DNA的提取

目的采用磁珠直接吸附法对人体尿液、唾液、血液3种体态生物检材中的游离DNA进行提取检验,为法医物证中游离DNA的研究及检验工作提供参考。方法对3种生物检材采取离心吸取上清液的方法分离游离DNA,然后采用磁珠直接吸附法进行提取纯化,Identifiler-Plus试剂盒进行复合扩增后常规STR检测。结果在3种检材中均检出了游离DNA,其中血液中游离DNA检出率为100%,唾液为90%,尿液为70%。结论人体体态生物检材中存在游离DNA,同时磁珠直接吸附法可高效、快捷的提取生物检材中的游离DNA。     

固相提取在毒物分析中的应用研究

应用GC、GC/MS研究了尿、肝、胃组织用液- 液提取法制样引入样品中的有机组分;考查了十几种树脂稳定性、吸脱性能.选用的GDX-403树脂作吸附剂具有稳定性好、吸附回收率高的特点,当苯巴比妥浓度为2.96mg/ml,吸附平衡回收率达98.8%.净化巴比妥类药物具有样品图谱清晰、无干扰、吸脱率再现性好的优点.