鸡传染性贫血病毒VP1基因的克隆表达及抗原性分析

参考已发表的鸡传染性贫血病毒(CIAV)VP1基因序列,设计并合成了2对引物,经PCR扩增获得了2个基因片段。将PCR产物克隆至pGEM-T Easy载体中,成功构建了克隆载体pGEM-CIAVVP1A和pGEM-CIAVVP1B。将上述重组质粒和原核表达载体pMXB10分别用NdeⅠ+EcoRⅠ、NdeⅠ+XhoⅠ双酶切,并将纯化的2个基因亚克隆至pMXB10中,构建出原核表达载体pMXB10-VP1A和pMXB10-VP1B。在0.3 mmol/L IPTG诱导下,目的基因在大肠杆菌ER2566中以分泌型得到了大量表达。Western-blot分析发现,表达蛋白具有CIAV抗原性。表达蛋白经纯化后作为包被抗原,用间接ELISA鉴定,与CIAV阳性血清均能发生特异性反应。2组蛋白免疫SPF鸡后,用全病毒ELISA试剂盒检测血清呈阳性,表明2组蛋白均可诱发机体产生抗CIAV的抗体。     

感染性分子克隆衍生的马传染性贫血病毒的免疫学特性

将马传染性贫血病毒驴白细胞毒疫苗(DLA EIAV)、DLA EIAV感染性分子克隆衍生毒(vOK8226)以及强弱毒嵌合毒(vOKVltr)分别接种健康马,并于接种后第 220 d,用 EIAV强毒辽宁株(L EIAV)攻击,观察临床变化,并测定接种后各结构蛋白的抗体变化。结果发现,攻毒后,2匹非免疫对照马和克隆衍生毒接种组中的 1 匹马体温均出现典型的稽留热并死亡,死亡马呈现典型的马传染性贫血的病理组织学变化,其他免疫马未见任何临床变化;在攻毒后第 450 d剖杀所有存活马,也未见任何病理组织学变化。抗体检测结果表明,免疫接种后攻毒前各组 p11 和 p9 抗体均检测不到,嵌合毒接种组p15、p26和gp45抗体水平高于其他组。攻毒后非免疫对照马体内抗p9、p11、p15、p26和 gp45抗体均显著升高,并持续至死亡;嵌合病毒接种马体内各结构蛋白抗体水平与攻毒前没有显著变化,克隆衍生毒接种马体内各结构蛋白抗体水平比攻毒前有所升高。通过临床观察、病理组织学检测以及攻毒后各结构蛋白抗体记忆反应情况分析,置换了强毒 LTR 的DLA EIAV感染性分子克隆衍生毒(强弱毒嵌合病毒)免疫马能够抵抗马传染性贫血病毒强毒的攻击,获得完全保护,而DLA EIAV感染性分子克隆衍生毒免疫马未能完全抵抗强毒的攻击。     

ABC-Dot-ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒

建立了ABC-Dot-ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的方法,其最佳反应条件是包被液为0.05 mol/LpH 9.6的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(CBS),兔抗IBV IgG的最佳工作浓度为180,抗原的最佳浓度为1800,封闭剂选用0.01 mol/L pH 7.4含30mL/L白明胶的PBS,B-AgG和ABC-HEP的最佳工作浓度为1200.用ABC-Dot-ELISA与琼脂扩散试验(AGP)比较检测255份自然发病鸡和20份人工感染雏鸡的口咽拭子、气管、肺、肾,前者的检出率远高于后者.     

应用间接酶联免疫吸附试验检测鸡传染性支气管炎抗体的研究

建立了辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记兔抗鸡ＩｇＧ检测鸡传染性支气管炎（ＩＢ）抗体的间接ＥＬＩＳＡ法，其抗原包被浓度为４ｍｇ／Ｌ，待检血清与酶结合物的最佳稀释度各为１８０，酶结合物、抗原抗体的作用时间分别为６０ｍｉｎ，３０ｍｉｎ，封闭液的浓度和作用时间分别为１％和６０ｍｉｎ，ＯＤ值大于０．２８７的判为阳性。用此法检测经ＩＢＶ灭活苗免疫鸡所产蛋孵出的雏鸡的母源抗体，ＯＤ值的Ｐ／Ｎ值为６．０，１５ｄ后降至２．０以下。检测１１日龄经ＩＢＶＨ１２０弱毒苗免疫雏鸡的抗体，其Ｐ／Ｎ值于免疫后第１８ｄ达峰值（３．７）。调查的５４群发病鸡，其抗体阳性率为１００％，Ｐ／Ｎ值为４．０～７．５     

现地马传贫琼扩阴性酶联免疫法阳性病马血清的特异性试验

在内蒙古牙克石市图里河镇非马传贫注苗区，用琼脂扩散试验（ＩＤ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）两种方法对６４匹马进行了对比检查，检出ＩＤ、ＥＬＩＳＡ双阳性马４匹、ＥＬＩＳＡ单阳性马３匹。对３匹ＩＤ阴性，ＥＬＩＳＡ阳性马血清用不同浓度琼扩抗原重复检测结果均为阴性，而用不同批次的ＥＬＩＳＡ抗原包被板及酶标抗体检测结果均为阳性，用马传贫病毒抗原对３匹单阳性马血清中和后，再进行ＥＬＩＳＡ测定，ＯＤ值均降低５０％以上。     

应用间接酶联免疫吸附试验检测鸡传染性法氏囊病病毒

用制备的抗鸡ＩｇＧＭｃＡｂ－ＨＲＰ作为免疫试剂，以ＩＢＤＶ的高免阳性鸡血清作为抗体，用间接ＥＬＩＳＡ法检测经ＩＢＤＶ强毒攻击鸡的各脏器含毒情况，同时与ＡＧＰ法进行比较。结果表明两种方法具有良好的平行关系，间接ＥＬＩＳＡ法比ＡＧＰ法更为敏感；攻毒鸡的法氏囊带毒最多，而在脾、胸腺、肾中均未检出病毒抗原     

Tat蛋白对马传染性贫血病毒长末端重复序列启动子活性的影响

将来源于马传染性贫血病毒(EIAV)强毒株第25代和第118代病毒的LTR,白细胞弱毒(EIAV-DLA)的LTR,以及TAR起始碱基和/或poly(A)附加位点发生突变的驴胎皮肤细胞弱毒(EIAV-FDD)的LTR分别克隆到pCAT3-Basic质粒中,获得了6个重组质粒pCAT-25、pCAT-118、pCAT-FD、pCAT-G219A、pCAT-A294C和pCAT-G219A-A294C。同时用pcDNA3.1(+)构建了EIAV反式激活蛋白(Tat)基因的重组真核表达质粒pcTM7-D。将pcTM7-D分别与含有不同LTR的重组质粒共转染驴胎皮肤细胞,考察Tat对LTR启动子活性的增强作用。结果表明,在皮肤细胞中Tat蛋白可以特异性增强来源于皮肤细胞弱毒疫苗株LTR的启动子活性,而对白细胞源的LTR无明显增强作用;TAR起始位点和poly(A)的单碱基突变和联合突变对Tat的反式激活作用并无明显影响。     

牛传染性鼻气管炎间接ELISA诊断方法的建立

以牛肾细胞系(MDBK)培养牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)Bartha Nu/67株,经超速离心纯化病毒,再经超声破碎处理后作为诊断抗原,建立了检测牛血清IBRV抗体的间接酶联免疫吸附试验。该ELISA的判定标准为:血清D490 nm值大于0.369的判为阳性,小于0.295的判为阴性,在0.295与0.369之间的为可疑。特异性和重复性试验结果表明,该方法特异性高、重复性好。与法国进口ELISA抗体诊断试剂盒比较,其符合率为96.3%;与中和试验比较,符合率为95.8%,且敏感性更高。应用该诊断方法调查了我国部分地区IBRV的感染情况,结果显示,这些地区的IBRV感染率为67.1%。     

鸡传染性法氏囊病ELISA快速诊断盒的研制及应用

用ＩＢＤ－ＥＬＩＳＡ快速诊断盒对ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒及ＩＢＤ阳性血清，ＩＢＤＶ阴性法氏囊及ＩＢＤ阴性血清和ＩＢ，ＩＬＴ，ＥＳＤ－７６，ＲＥＯ，ＮＤ，ＭＤ等６种鸡传染病的抗原及阳性血清检测，只有ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒及阳性血清呈阳性反应，证明快速诊断盒对ＩＢＤＶ法氏囊囊毒抗原及其抗体的检测是特异的，与其它６种传染病的抗原和抗体无交叉反应。与ＡＧＰ对比试验结果表明，检测ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒时，快速诊断盒的敏感性比ＡＧＰ的敏感性高３２倍；检测ＩＢＤ阳性血清及蛋黄抗体液时，前者的敏感性比后者高２～１０倍。快速诊断盒的保存期可达２４个月以上。通过在１２个省（市、区）有关单位试用，证明ＩＢＤ－ＥＬＩＳＡ快速诊断盒具有快速、简便、特异、灵敏等优点     

马传染性脑脊髓炎的疫情调查

对1991年9月在青海玉树地区马匹发生脑脊髓炎症状的疫情进行了调查,通过发病特点、临床症状、病理解剖变化、流行病学调查、鉴别诊断和部分实验室检验,确定该病为苏联马传染性脑脊髓炎。疫情仅发生于马,发病率为8.61％,死亡率为3.31％,致死率为38.46％。     

H3N8亚型马流感病毒人工感染马的病理学观察及抗原定位

为验证鸡胚传代对H3N8亚型马流感病毒致病性的影响,利用F3代马流感病毒经鼻腔感染2匹蒙古马,应用苏木素-伊红染色和免疫组织化学染色方法,对1例临床症状明显的马进行了病理组织学观察和抗原定位。结果表明,该人工感染马镜检病变明显,鼻黏膜、气管、肺、心肌、肝、肾和脾等组织器官均出现不同程度的充血、淤血、水肿,并伴以各实质细胞的变性、坏死以及炎性细胞的渗出和增生。其中呼吸系统病变最为严重,肺表现为支气管性间质性肺炎。免疫组织化学染色结果显示,病毒抗原主要存在于呼吸系统的黏膜上皮组织中,初步证明了马流感病毒F3代对马具有致病性。     

The irrelevance of negative campaigns to political trust: Experimental and survey results

This article examines how media and partisan mechanisms of accountability influence presidential agendas in Latin America. The authors argue that responsiveness increases in powerful presidential systems when opposition parties and free media help citizens hold presidents accountable between elections. Where presidents must contend with a cohesive, ideological opposition and effective constraints to their power, they turn to valence issues with broad appeal and over which they have greater control. A free media—one without significant economic, legal, or political constraints—pressures the president to respond to the electorate's concerns, which include crime and corruption due to the incentives that motivate news content and the media's agenda-setting powers. Analyzing more than 50 presidential terms across 18 countries, the authors show that when Latin American presidents face either free and competitive media or strong legislative oppositions, homicide rates and the level of perceived corruption tend to be lower. Thus, this study proposes that efforts to improve media or partisan environments, or both, would help address Latin America's accountability deficit and promote good governance in the region.     

用间接ELISA法检测鸡痘病毒抗体的研究

建立了检测鸡痘病毒抗体的间接ELISA方法 ,用该法检测 2 0份人工感染鸡血清样品 ,抗体阳性率为 10 0 % ,康复期鸡群血清抗体阳性率为 4 3% ,人工接种弱毒疫苗 6 5d和 170d鸡群血清抗体的阳性率分别为 6 0 %、70 %。经反复试验 ,确定了诊断抗原的制备方法和间接ELISA检测鸡痘抗体的最佳反应条件 ,即抗原包被浓度 10 .8μg/孔 ,待测血清最佳稀释度为 1∶10 0。     

牛病毒性腹泻病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

将牛病毒性腹泻病毒超免疫血清以常规方法提取IgG,采用过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶(HRP),建立了从粪样中检测牛病毒性腹泻病毒抗原的双抗体夹心ELISA。结果,抗体的最佳包被量为150μg/mL,酶标抗体最适工作浓度为1∶200;封闭液为50mL/L的兔血清;待检粪样及酶标抗体的感作时间为37℃120min;底物显色时间为室温15min。应用建立的检测方法对河北省8个大中型奶牛场298份乳牛腹泻粪样进行了检测,结果,阳性检出率为42.6%。     

酶联免疫吸附试验对猪瘟抗体的监测

猪瘟 (CSF)是危害养猪业最严重的传染病之一 ,自 2 0世纪 5 0年代末我国应用猪瘟兔化弱毒(CSFV)疫苗免疫预防以来 ,有效地控制了其大面积的暴发流行。但近年来温和型、非典型性CSF的发生和免疫失败 ,仍然相当普遍 ,且仔猪的感染呈上升趋势 ,已成为猪病防制中最棘手的问题之一。因此 ,为了查清甘肃省规模养猪场CSF强毒感染状况及检验CSF疫苗的免疫效果 ,笔者应省内某 4个较大规模养猪场的要求 ,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对采自上述 4个猪场的 5 93份猪血清进行了检测。1　材料和方法1.1　诊断试剂　CSF强毒、弱毒单克隆纯化酶联…     

用寡核苷酸探针对近交系小鼠DNA指纹图谱的分析

应用DNA指纹技术 ,用非放射性标记的寡核苷酸探针 (GGAT) 4对 3个清洁级近交小鼠品系C5 7、DBA/ 2、BALB/c进行检测 ,分析其DNA指纹图谱。结果显示 ,不同品系近交系小鼠的DNA指纹图谱有明显差异 ,而品系内小鼠之间的DNA指纹图谱基本一致。证明DNA指纹技术能够较好地检测出近交系小鼠的基因纯合性 ,反映其遗传质量 ,可以应用于对近交系小鼠的遗传质量监测。     

食管造影诊断犬食管扩张

1999年2月和4月,我院分别收治了1例6月龄雌性黑贝犬(病例1)和1例1岁雄性京巴犬(病例2)。主诉这2只犬均于采食后不久就发生呕吐,吐出大量未消化的食物,故前来就诊。1　临床症状这2只犬于采食前较活泼,喂给食物时表现饥饿贪食,吃食或饮水后不到1ｍｉｎ则发生严重呕吐,同时头颈伸直,呼吸困难,喘息发作,闭目无神,休息30ｍｉｎ后恢复正常,不再呕吐。检查口腔及触诊咽喉、颈部食道,未见异物或肿胀,亦无疼痛反应,粪便正常。2　Ｘ光线检查2.1　平片检查　拍左侧位颈、胸部Ｘ线平片,未见阳性异物。2.2　食管造影检查　将硫酸钡与水按1∶1(质量∶体积)…     

应用快速ELISA诊断家畜住肉孢子虫病

住肉孢子虫病是人畜共患病之一 ,其病原住肉孢子虫 (Sarcocystis)属原生动物门、孢子虫纲、真球虫目、住肉孢子虫科、住肉孢子虫属。家畜感染住肉孢子虫可引起贫血、消瘦、生产力下降 ,甚至死亡。目前 ,关于家畜住肉孢子虫病生前诊断的方法虽然很多 ,但都不太成熟 ,未能广泛应用于生产。湖南省畜牧兽医研究所与湖南医科大学共同研制的住肉孢子虫病快速ELISA诊断试剂盒经一定范围的扩大试验 ,效果良好。为进一步推广这项成果 ,笔者应用该试剂盒检测了湖南省洞庭湖地区具有代表性的华容县、沅江市屠宰水牛、猪的住肉孢子虫感染情况 ,证明该…