韭菜挥发油成分的气相色谱-质谱分析及抗常见病原菌活性研究

采用水蒸气蒸馏法提取韭菜挥发油,通过体外抑菌试验检测其抑菌活性,确定体外最小抑菌浓度(MIC);并采用气相色谱-质谱(GC-MS)法分离检测韭菜挥发油成分。结果显示,韭菜挥发油具有广谱的抑菌活性,且对不同细菌的MIC不同。在韭菜挥发油中鉴定出17个组分,主要为二丙烯基-双硫醚(39.308%)、甲基-丙烯基-双硫醚(32.763%)、甲基-丙烯基-三硫醚(12.157%)、二丙烯基-三硫醚(7.330%)。结果表明,韭菜挥发油具有研发成新型抗菌药物与食品防腐剂的潜力。     

新药甲氧基氢醌与同类化合物对畜禽常见病原菌的抑菌试验

采用试管法将化学合成的13种氢醌类化合物对引起畜禽疾病的5种主要病原菌进行了抑菌试验,同时对新型氢醌类化合物甲氧基氢醌与2-甲基氢醌(六茜素)对畜禽常见的11种主要病原菌进行了抑菌效果比较.结果表明,13种氢醌类化合物抑菌效果依次为2-甲基5-氯氢醌、2-溴氢醌、2-氯氢醌、2-苄基氢醌、2-异丙基氢醌等;甲氧基氢醌对革兰氏阴性菌的抑菌效果优于六茜素,但对革兰氏阳性菌的抑菌效果则比六茜素差.     

原白头翁素衍生物的合成及其抑菌活性

以间硝基苯甲醛、4-甲氧基苯甲醛、3,4,5-三甲氧基苯甲醛和乙酰丙酸乙酯为原料,经过Stobbe缩合、环合两步反应合成了化合物4-(3-硝基苯甲基)-5-亚甲基-2(5H)-呋喃、4-(4-甲氧基苯甲基)-5-亚甲基-2(5H)-呋喃和4-(3,4,5-三甲氧基苯甲基)-5-亚甲基-2(5H)-呋喃.同时观察了合成的这3种化合物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑茵活性.结果表明,合成的这3种化合物对2种病原茵具有较好的抑菌效果.     

FD-75对常见病原菌作用的研究

本文报道了新型半合成β-内酰胺类抗生素(FD-75)对11种常见病原菌抑制作用的试验结果。证实FD-75有较广的抗菌谱,对试验所选择的革兰氏阴性和阳性细菌均显示比较显著的抑菌效果。该药可在兽医临床上推广应用。     

Metalnikowin类抗菌肽MLP的设计及其抗菌活性的测定

为设计新型Metalnikowin类抗菌肽并评价其抗菌活性,依据抗菌肽Metalnikowin的作用机理和氨基酸组成,通过人工方法设计合成Metalnikowin类抗菌肽(Metalnikowin-like antibacterial peptide,MLP)并测定其体外和体内抗菌活性。体外抑菌试验结果显示,抗菌肽MLP对鸡致病性大肠杆菌O 1、猪致病性大肠杆菌K 99(A TCC39302)、鸡白痢沙门菌(ATCC10398)、猪霍乱沙门菌(ATCC13312)、禽多杀性巴氏杆菌(CVCC474)和金黄色葡萄球菌(ATCC29213)均具有很好的抑菌活性,其对这6种细菌的最小抑菌浓度分别为1.56、6.25、3.12、6.25、1.56和12.5 g/m L。酸稳定性试验结果显示,抗菌肽MLP在p H值为5~6时活性最高。热稳定性试验结果显示,抗菌肽MLP 100℃加热40 min后仍具有抑菌活性。在对雏鸡感染鸡大肠杆菌和小鼠感染金黄色葡萄球菌的体内疗效试验中,抗菌肽MLP显示了较好的治疗效果。本研究为临床上设计有效的Metalnikowin类抗菌肽提供了参考数据。     

Attacin-Thanatin杂合抗菌肽的融合表达及其菌内抑菌活性

构建杂合抗菌肽Attacin-Thanatin(简称mAT)融合表达重组菌株,对其在大肠杆菌系统中的表达特性及其融合表达产物的菌内抑菌活性进行了研究.将mAT重组表达质粒pET-mAT(pe)依次转化宿主菌E.coli DH5a、BL21(DE3)、Rosetta-gamiTM(DE3)pLysS,采用IPTG诱导表达;优化筛选该抗菌肽的敏感菌株、IPTG浓度、宿主菌诱导起始浓度等,初步建立了抗菌肽菌内抑菌活性检测方法,用于研究该杂合抗菌肽的体内抑菌活性.SDS-PAGE分析结果显示,宿主菌Rosetta-gamiTM(DE3)pLysS可获得表达的融合产物,而E.coli DH5α、BL21(DE3)经IPTG诱导后未检测到目的条带;优化结果显示,以E.coli DH5α宿主菌、IPTG工作浓度0.1 mmol/L、起始诱导菌浓度D600nm值0.3为检测抗菌肽菌内抑菌活性的最佳条件;mAT融合表达产物抑菌活性的检测结果显示,宿主菌被本身所表达的杂合抗菌肽融合蛋白所抑制,增殖速度放缓.利用Rosetta-gamiTM(DE3)pLysS有效融合表达mAT并初步建立的抗菌肽菌内抑菌活性快速检测方法为进一步研究mAT奠定了基础.     

克拉维酸强化的阿莫西林对致病性大肠埃希氏菌体外抑菌试验

克拉维酸是一种β-内酰胺酶抑制剂,与阿莫西林同时应用时使得通过产生β-内酰胺酶对阿莫西林耐药的大多数细菌重新成为敏感菌.对来源于鸡、猪的共31株致病性大肠埃希氏菌最小抑菌浓度(MIC)测定表明,70%以上菌株对阿莫西林耐药;克拉维酸与阿莫西林联合使用使MIC显著下降;与单一使用阿莫西林相比,头孢氨苄青霉素对大多数分离菌的MIC较低.     

黏杆菌素对两种诱导多重耐药革兰氏阴性杆菌的体外抗菌活性

为评价黏杆菌素对兽医临床常见的多重耐药铜绿假单胞杆菌和大肠杆菌的抗菌作用,以微量肉汤稀释法对2种诱导多重耐药菌株进行最低抑菌浓度和最小杀菌浓度测定;采用菌落计数法绘制黏杆菌素对2种诱导多重耐药菌株的时间-杀菌曲线。结果表明,黏杆菌素对铜绿假单胞杆菌和大肠杆菌的最低抑菌浓度分别为2和0.25μg/mL,最小杀菌浓度分别为2和0.5μg/mL。黏杆菌素在0.5、2、4、8、16倍最低抑菌浓度下,对多重耐药大肠杆菌不同时间点的杀菌速率差异显著(P<0.05),呈现浓度依赖性;对铜绿假单胞杆菌呈现部分浓度依赖性。黏杆菌素在2倍最低抑菌浓度下,多重耐药大肠杆菌和铜绿假单胞杆菌菌量在2h内显著下降,在4倍最低抑菌浓度下可在8h内将大肠杆菌全部杀死,在4h内将铜绿假单胞杆菌全部杀死。说明黏杆菌素对诱导多重耐药铜绿假单胞杆菌和大肠杆菌具有强效、速效的杀菌作用。     

红茂草生物碱抑菌活性的测定

用醇提法提取红茂草生物碱,经石英色谱柱层析分离、结晶后测定了红茂草生物碱对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、粪肠球菌的体外最小抑菌浓度(MIC)、抑菌率和半数抑菌浓度(IC50)。结果显示,红茂草生物碱对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、粪肠球菌的MIC分别是0.22、0.18、0.18、0.30mg/mL;对这4种供试菌的IC50分别是0.180 7、0.140 70、.140 70、.260 5 mg/mL。表明,红茂草生物碱对这4种细菌具有明显的抑制作用。     

鸡β防御素2在毕赤酵母中的组成型表达及其发酵条件的优化

合成鸡β防御素2(AvBD2)成熟肽基因,构建重组质粒pGHK-AvBD2;将其电转化至毕赤酵母GS115;Tricine-SDS-PAGE和Western-blot检测表达产物,琼脂扩散法测定产物的抑菌活性,并测定产物的溶血活性;响应面法优化接种量、装液量和发酵温度。Tricine-SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,在5.8ku位置出现目的蛋白质条带;抑菌活性检测表明,表达产物对粪肠球菌(ATCC29212)、大肠杆菌(CMCC44102)、金黄色葡萄球菌(ATCC25923)和巴氏杆菌具有明显的抑菌活性;发酵产物在500mg/L时的溶血活性仅2.17%。由建立的响应面模型得到重组酵母最佳发酵条件为:接种量528mg/100mL、装液量8.43%、发酵温度27.8℃,产物蛋白浓度较优化前提高20%。本研究实现了AvBD2在毕赤酵母中的组成型表达,表达产物有较好的抗菌活性,为AvBD2作为新型饲料添加剂的应用奠定了基础。     

菌威克对鸡大肠杆菌病的预防和治疗试验

用硫酸庆大霉素和硫酸黏杆菌素混合制剂菌威克对试验性鸡大肠杆菌病进行了预防与治疗试验。硫酸庆大霉素和硫酸黏杆菌素对鸡大肠埃希氏菌的最小抑菌浓度分别为 7.5× 10 - 4mg/L和 5 .9× 10 - 5mg/L ,最小杀菌浓度分别为 1.5× 10 - 3mg/L和 1.2× 10 - 4mg/L。在成本相近的情况下 ,以杀菌效果最佳比例配制的菌威克制剂的疗效要高于单独使用任何一种药物。预防与治疗试验结果表明 ,大剂量与中剂量菌威克对鸡大肠杆菌病的预防与治疗效果高于低剂量菌威克与单独应用硫酸庆大霉素和硫酸黏杆菌素的效果 (P <0 .0 5 )。     

公英乳康涂膜剂不同配方的抑菌作用

用公英乳康涂膜剂的3种不同配方A、B、C及六茜素和克林霉素进行乳牛乳腺炎主要致病菌金黄色葡萄球菌和无乳链球菌的对比抑菌试验。结果显示,A、B、C 3 种配方对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)依次为125、250、250 mg/mL;对无乳链球菌的MIC分别为250、500、500 mg/mL;而六茜素和克林霉素对金黄色葡萄球菌的MIC分别为400和25μg/mL,它们对无乳链球菌的MIC分别为400和50μg/mL。结果表明,公英乳康涂膜剂对2 种致病菌的抑菌作用不如六茜素和克林霉素,但其也有较好的抑菌作用,且配方A的抑菌效果强于B和C。     

抗菌肽Dermadistinctin串联表达载体的构建及表达产物抗菌活性的鉴定

根据GenBank中Dermadistinctin K(DDK)和Dermadistinctin L(DDL)的氨基酸序列,选择大肠杆菌偏嗜性密码子,采用SOE法合成了DDK和DDL基因.在DDK及DDL基因序列中引入肠激酶裂解位点,并将其依次克隆入pET-32a(+)质粒,构建了串联体融合表达载体P-DDK,并将其转入Rosetta(DE3)中进行融合表达;表达产物在终浓度为0.1 mmol/L IPTG诱导4 h后可达到最大表达量.对重组蛋白DDK进行镍离子亲和层析柱纯化以及肠激酶裂解之后,对酶切产物进行了抑菌活性分析.分析结果表明,抗菌肽DDK与DDL的混合物对金黄色葡萄球菌(Cowan Ⅰ)、大肠杆菌DH5α、致病性大肠杆菌O_1、猪霍乱沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌均具有一定的抑菌活性.     

蓝狐源嗜酸乳杆菌ZJBF003株的分离鉴定及其体外益生潜能的评价

为获得动物源乳酸菌并对其益生潜能进行评价,对蓝狐源乳酸菌进行了分离鉴定并通过测定其生长曲线、产酸能力、对低p H和高胆盐环境的耐受性、在体外模拟胃肠道溶液中的存活能力、抑菌能力、抗生素抗性、对蓝狐小肠上皮原代细胞的黏附能力、抗氧化性及安全性评价了菌株的益生特性。将从蓝狐的肠道内容物中分离到的1株优势乳酸菌命名为ZJBF003,经菌落菌体形态、生理生化特性和16S rRNA基因序列分析将其鉴定为嗜酸乳杆菌。该菌株的产酸能力较强且在37℃培养时能迅速进入对数生长期;在pH为5的MRS培养基中耐受6 h时仍能保持较好的生长情况,在胆盐质量浓度为3 g/L的条件下至少可耐受6 h,且存活率接近70%,在人工模拟胃液和肠液中耐受3 h时存活率高于95%;对大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌效果;对蓝狐小肠上皮原代细胞的黏附能力为(39.03±6.57)CFU/cell;1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率为24.80%,表明菌株ZJBF003具有一定的抗氧化活性;小鼠安全性试验结果表明,无毒副作用。这些特性表明,新分离的蓝狐源嗜酸乳杆菌ZJBF003株具有优良的体外益生性能,可作为潜在益生菌制剂材料进一步研究。     

哺乳动物雄性生殖系统β-防御素的研究进展

β-防御素是哺乳动物体内一种重要的抗菌肽,广泛分布于黏膜上皮细胞和中性粒细胞中,在先天性免疫和获得性免疫中具有重要作用。近年来,β-防御素(beta-defensin,DB)被发现在哺乳动物雄性生殖系统中广泛表达,并参与对抗生殖系统微生物的感染,维持附睾上皮、附睾腔内的环境稳定,发挥抑菌抗炎的作用,同时与精子结合,调节精子的功能,参与动物有效生殖。迄今为止,雄性生殖系统β-防御素在人及鼠等物种的研究比较深入,但在其他哺乳动物的研究还很有限。本文结合已有的研究成果对β-防御素在哺乳动物雄性生殖系统的表达分布、参与哺乳动物有效生殖的方式和机制进行了综述,并对其应用前景做出展望。     

鸡β-防御素-8 cDNA在大肠杆菌中的融合表达

为了评价鸡β-防御素的功能与基因工程化生产的可能性,从已构建的重组载体pGEM-T Easy-gal-8中克隆gal-8成熟肽cDNA,将该cDNA插入原核表达载体pGEX-6P-1中,构建表达质粒pGEX-6P-1-gal-8,然后将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中.挑取阳性克隆菌用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果检测显示,融合表达的GST-gal-8蛋白大小约30 ku,经灰度扫描显示该融合蛋白的表达量占细菌总蛋白的119 mg/L.用固定化的谷胱甘肽亲和层析柱进行蛋白纯化,融合蛋白经Prescission蛋白酶酶切并纯化获得了完整的gal-8成熟多肽.抑菌活性试验显示,表达的gal-8成熟肽对黄色微球菌有一定的抑菌活性.     

复方白毛藤注射液的抑菌效果及对小鼠免疫功能的影响

采用试管 2倍稀释法对复方白毛藤注射液的最小抑菌浓度 (MIC)和最低杀菌浓度(MBC)进行了测定 ,并采用免疫学方法进行了复方白毛藤注射液对小白鼠免疫功能影响的试验。结果表明 ,该制剂对链球菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌、巴氏杆菌、大肠埃希氏菌的最小抑菌浓度和最低杀菌浓度分别为 1.5 6、1.5 6、12 .5 0、12 .5 0、2 5 .0 0mg/mL和 3.13、3.13、2 5 .0 0、2 5 .0 0、5 0 .0 0mg/mL;该制剂能使小白鼠白细胞总数、T淋巴细胞百分率、血清总蛋白、血清球蛋白、胸腺指数和脾指数增加 ,高剂量复方白毛藤注射液 (0 .2mL/只 )组与对照组相比 ,上述指标于停药后 2 4h差异显著 (P <0 .0 5 ) ,停药后 7d差异极显著 (P <0 .0 1)。     

英黄散水煎液对奶牛乳房炎致病菌的体外抑菌及抗炎效果的观察

为探讨复方中药英黄散水煎液对奶牛乳房炎致病菌的抑菌能力及抗炎效果,首先对乳房炎患牛奶中的致病菌分离鉴定,通过牛津杯法进行药敏试验,采用常量肉汤稀释法测定英黄散对不同致病菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度;将小鼠随机分为英黄散低、中、高剂量组,阿司匹林药物组,空白对照组,然后开展二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验、小鼠棉球致肉芽肿试验、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性变化试验,观察英黄散的抗炎作用。结果,经分离鉴定,得到3种致病菌,分别为无乳链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌;这3种致病菌对英黄散均具有一定的敏感性;其最小抑菌浓度依次为31.25、62.5、125 mg/m L;最小杀菌浓度依次为62.5、125、250 mg/m L。抗炎试验结果显示,与空白对照组相比,英黄散高剂量组及阿司匹林药物组能明显减轻小鼠耳廓肿胀度且差异极显著(P0.01),中剂量组差异显著(P0.05);英黄散高剂量组与阿司匹林组小鼠腹腔渗透液吸光度明显低于空白对照组且差异极显著(P0.01),中剂量组差异显著(P0.05);英黄散低剂量组及阿司匹林组肉芽肿增重明显低于空白对照组且差异极显著(P0.01),中剂量组差异显著(P0.05)。上述结果表明,英黄散具有良好的抑菌能力及抗炎效果。     

硒化甘草多糖联合抗生素体外抑菌作用及体内免疫调节作用研究

旨在研究硒化新疆乌拉尔甘草多糖(Se GUP)对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌是否有较好的体外抑菌作用,与抗菌药物联合使用是否能够增强抗菌药物的抑菌效果及其免疫相关活性研究。采用微量法检测Se GUP与抗生素的最小抑菌浓度(MIC),筛选出3种较为敏感的常用抗生素;采用棋盘法测算出Se GUP与所筛选的对细菌敏感的抗生素进行联合后的FIC指数,判定Se GUP与抗生素联合作用性质;采用ELISA法,测定不同剂量Se GUP组小鼠血清中Ig G、IL-1、IL-2含量,确定其免疫活性调节作用。体外抑菌试验结果表明,Se GUP对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有一定的抑制作用,其MIC值分别为100、200 mg/mL;头孢噻呋钠、卡那霉素与Se GUP联合作用后,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌耐药菌株均表现为一定的相加作用,其MIC值分别降低到25、50、50、50 mg/mL,而与恩诺沙星进行联合后的抑菌效果并不明显,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌耐药菌株表现为无关作用。免疫试验结果表明,不同剂量的Se GUP对小鼠血清中Ig G、IL-1和IL-2的含量均有不同程度的提高作用,其中,高、中剂量组的Se GUP的提高作用显著(P0.05),与免疫抑制组相比差异极显著(P0.01)。由此可知,一定剂量的Se GUP与头孢噻呋钠、卡那霉素联合后,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌具有较好的抑菌效果的同时,能减少抗生素的使用剂量,并且Se GUP能提高小鼠血清中相关细胞因子含量,增强机体免疫力。本次试验结果为充分挖掘中药中有效成分提供了更多理论依据,为寻找更多有效防治金黄色葡萄球菌、大肠杆菌病的药物组合和对抗及减缓多重耐药菌株出现提供了新思路。     

鸡肺表面活性蛋白A的可溶性表达及活性检测

利用RT-PCR扩增鸡肺表面活性蛋白A(cSP-A)基因,将其连接pMD19-T Simple载体,经测序正确后,扩增成熟肽基因片段并酶切克隆入pCold-TF原核表达载体中,转化到感受态宿主菌BL21(DE3)中,加入不同浓度异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)于16℃诱导表达24h,超声波裂解,通过His·Tag纯化试剂盒纯化,分别进行SDS-PAGE检测。结果扩增得到615bp的成熟肽基因片段;SP-A蛋白获得可溶性表达,融合蛋白的大小为80ku。Western-blot结果显示,该蛋白可被特异性多克隆抗体识别。抑菌试验结果显示,与纯化的天然cSP-A蛋白不同,cSP-A原核表达产物并不具备抑菌活性。