空肠弯杆菌肠毒素细胞检测法的建立

中国仓鼠卵巢细胞（ＣＨＯ），非洲绿猴肾细胞（Ｖｅｒｏ），人宫颈癌细胞（Ｈｅｌａ）和乳仓鼠肾细胞（ＢＨＫ－２１）４种细胞对空肠弯杆菌（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒｊｅｊｕｎｉ）细胞紧张性肠毒素（ＣｙｔｏｔｏｎｉｃＥｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ，ＣＥ）的敏感性试验表明，ＣＨＯ细胞对ＣＥ敏感；ＣＨＯ细胞与大鼠肠袢试验比较检测ＣＥ，以ＣＨＯ细胞对ＣＥ最敏感；试验发现布氏肉汤对细胞有毒性作用，确定了以Ｍ１９９＋１０ｇ／Ｌ胰蛋白胨培养基进行空肠弯杆菌产生ＣＥ的培养方法，依次建立了ＣＥ的ＣＨＯ细胞检测法。     

空肠弯杆菌的分离与鉴定的研究

本文报道了从奶牛、产蛋鸡、屠宰场的猪、舍饲的绵羊和山羊的粪便及肠内容物分离空肠弯杆菌的试验结果。从肠内容物取样,猪分离率为32.61％;粪便材料,猪、鸡、奶牛、山羊和绵羊分别为26.47％,13.04％,9.76％,13.33％和6.82％。利用改良的布氏半固体培养基,接种新分离株后置37℃保存,解决了弯杆菌新分离株保存难题。5株新分离株分别于10、20、30和40天检查,全部存活,效果可靠。这一方法对分离鉴定弯杆菌时菌株的短期保存,具有实际的应用价值。     

畜禽空肠弯杆菌分离培养的影响因素

比较观察了空肠弯杆菌分离培养中微需氧法、培养时间、采样时机、运送时间、运送培养基、增菌培养法以及噻孢霉素和头孢哌酮钠等因素对该菌检出率的影响。结果表明 ,在 10 0mL/LCO2 气体环境中微需氧培养比烛缸内培养空肠弯杆菌检出率高 13 .0 % ,即显示 10 0mL/LCO2 法明显优于烛缸法 (P <0 .0 1) ;空肠弯杆菌分离培养时间以 48h即可 ,无须延长培养时间 ;产蛋鸡采样时机为产蛋前 ;检样运送时间、运送培养基和增菌培养后对空肠弯杆菌检出率的影响不明显(P >0 .0 5 ) ,用单一的一种分离培养方法不能反映动物的实际带菌水平 ;噻孢霉素对空肠弯杆菌检出率的影响和抗生素药敏性试验结果表明 ,噻孢霉素不能替代头孢霉素Ⅰ ,而头孢哌酮钠可取代Camp BAP琼脂中的头孢霉素Ⅰ。     

人和畜禽的空肠弯杆菌分离培养及带菌状况调查

对195例不同年龄腹泻病人的粪样及656只健康和腹泻畜禽的直肠和泄殖腔拭子进行空肠弯杆菌培养,总检出率为26.1%(222/851).人和畜禽的带菌率分别为健康蛋用鸡为61.0%(61/100),腹泻后备蛋用鸡为53.3%(40/75),健康后备蛋用鸡为22.0%(11/50),腹泻仔猪为88.0%(88/100),健康羔羊为5.7%(6/106),牦牛犊为12.4%(15/121)和0(0/104)腹泻病人为0.5%(1/195).蛋用鸡各组间的带菌率差异极显著(P＜0.01),腹泻后备蛋用鸡的带菌率明显高于健康后备蛋用鸡(P＜0.01),显示后备蛋用鸡腹泻与该菌感染相关.腹泻仔猪的带菌率很高,也提示该菌感染与仔猪腹泻存在一定关系.噻孢霉素对空肠弯杆菌检出率的影响和抗生素药敏性试验结果表明,噻孢霉素不能替代头孢霉素Ⅰ,而头孢哌酮钠(头孢必)可取代Camp-BAP琼脂中的头孢霉素Ⅰ.在100mL/LCO2气体环境中微需氧培养比烛缸内培养空肠弯杆菌检出率高13.0%,显示分离该菌以100mL/L CO2法明显优于烛缸法(P＜0.01).     

空肠弯曲杆菌生物膜的体外形成及鉴定

采用结晶紫染色与正交试验相结合的方法,对空肠弯曲杆菌在不同温度、pH值、气体条件以及不同培养基条件下形成生物膜的能力进行了检测和比较;并以筛选出的最佳培养条件在盖玻片上形成的生物膜为对象,用光学显微镜及扫描电镜观察生物膜的结构。结果显示,在正常气体条件下培养1～3d,生物膜形成水平明显高于其他2种气体条件(P<0.01),4d后3种气体条件下的生物膜形成量均有增加,但3组间差异不显著,说明正常空气组分的条件更有利于生物膜的快速形成,而且37℃、正常空气条件下,在pH7.0的MH肉汤中培养5d,通过显微镜和扫描电镜观察,在盖玻片上可形成典型的、可观测的生物膜结构。     

大肠杆菌耐热肠毒素b及其致动物腹泻的机理

介绍了大肠杆菌耐热肠毒素b(STb)的编码基因、理化性质、免疫学特征、分泌特征、毒性相关氨基酸残基、空间结构、膜受体以及STb致动物腹泻的机理。认为STb是一种十分重要的肠毒素,应进一步加强对STb及其致腹泻机理的研究。     

空肠弯曲菌NCTC11168基因组表达文库的构建及鉴定

将空肠弯曲菌NCTC11168基因组用Sau3AⅠ部分酶切,回收400～3 000bp的片段。用BamHⅠ酶切原核表达载体pET30a(b,c),用SAP去磷酸化后,切胶回收线性载体片段。将基因组片段与载体按摩尔比例10∶1连接,转化DH5α感受态细胞,PCR分析插入片段大小的分布和插入的正确率。从转化的平板上提取质粒,转化表达宿主菌BL21(DE3),获得基因组表达文库。用IPTG诱导BL21(DE3),SDS-PAGE鉴定蛋白表达情况。提取基因组,以0.5U/μg Sau3AⅠ于37℃部分酶切基因组,回收400～3 000bp片段。载体用2.5U/μg BamHⅠ线性化后,用0.8U/μg SAP将其完全去磷酸化。基因组片段与载体连接转化DH5α感受态细胞,获得了基因组表达文库,库容达52 700个克隆,可以覆盖弯曲菌全基因组4次以上,片段插入正确率为83.3%～91.7%,片段大小为400～3 000bp,且均匀分布,IPTG诱导表达文库后蛋白呈现高效表达,表明成功构建了空肠弯曲菌的基因组表达文库。     

空肠弯曲菌质粒与其生物学特性的关系

对不同来源的空肠弯曲菌的质粒及其与菌株来源、生物型、致病性和耐药性的关系进行了研究。共检出大小分别为 1.9、2 .3、2 .6、5 .6、12 .6、33.0、82 .0和 10 8.0kb的 8种CCC型质粒 ,构成 7种质粒谱型。健康鸡源菌的质粒阳性率为 0 ;患病鸡源菌为 1.96 % ;患病猪源菌为 4 5 .8% ;健康羔羊源菌为 0 ;患病人源菌为 0。空肠弯曲菌的质粒用EcoRⅠ酶切后 ,1.9和 2 .3kb质粒的酶切谱随菌株来源的不同而异 ,其他 6种质粒的酶切谱没有差异。统计分析表明 ,空肠弯曲菌质粒的质粒谱型和酶切谱型与菌株来源、Lior生物型、致病性相关 (P <0 .0 0 1) ;也与对链霉素 (P <0 .0 0 1)、萘啶酸 (P <0 .0 5 )的耐药性相关 ;空肠弯曲菌对链霉素的耐药性与 2 .3kb的质粒有关 (P<0 .0 5 )。     

银黑狐空肠弯曲菌和致病性大肠埃希氏菌带菌状况的研究

对２２６只银黑狐粪便拭子进行空肠弯曲菌检查，共检出带菌狐１４只，其中成年公狐（４０只）、成年母狐（１２１只）、母仔狐（４０只）和公仔狐（２５只）分别检出３，８，２和１只，检出率依次为７．５％，６．６％，５．０％和４．０％，平均检出率为６．２％。对１８９只银黑狐粪便进行致病性大肠埃希氏菌检查，检出带菌狐３１只，其中成年公狐（１３只）、成年母狐（１２２只）、母仔狐（５１只）和公仔狐（３只），分别检出４，１８，８和１只，检出率依次为３０．８％，１４．８％，１５．７％和３３．３％，平均检出率为１６．４％；共检出致病性大肠埃希氏菌３４株，代表１５个血清型。对６９只银黑狐粪便检查，未检出Ａ～Ｆ群沙门氏菌及Ａ群Ⅰ、Ａ群Ⅱ、Ｂ群和Ｄ群的志贺氏菌。对一起３日龄仔狐死亡原因调查，证实是由肠道致病性大肠埃希氏菌Ｏ１１４Ｋ９０所致。     

八株芽孢杆菌的分离鉴定及其抗逆性比较

从土壤中分离到3个菌株,分别命名为KF、DY和LB1,从猪粪便中分离到5个菌株,分别命名为KH、K2X、KY1、LB2和LY3,通过16SrRNA基因序列分析,结合细菌形态学、生理生化特性进行了鉴定,并对分离菌的抗逆性进行了比较。经鉴定,KF、KH、K2X和KY1菌株为枯草芽孢杆菌,LB1、LB2和LY3菌株为蜡样芽孢杆菌,DY菌株为地衣芽孢杆菌;抗逆性比较结果显示,K2X菌株对温度比较敏感,其他菌株经60℃处理30min后不影响其生长;DY菌株耐酸性最强,能在pH3的胃液中正常生长;KY1菌株的耐酸性次之,耐胆盐能力最强,能在胆盐含量为6g/L的培养基和模拟肠液中正常生长。研究还发现,这8个菌株对共培养的大肠杆菌都没有抑制作用,只有KF、KH和LB2菌株对共培养的沙门氏菌分别有28.6%、27.0%和24.6%的抑菌效果。     

Evidence-Informed Prevention of Civil Wars and Mass Atrocities

Abstract

The prevention discourse in all its forms has tended to ignore or at least downplay the epistemic problems with prevention. Forecasting political violence is not as easy as the debate on early warning often assumes. Effectively forestalling political violence and mass atrocities is much more difficult than the often used rhetoric of a ‘tool box’ implies, which creates the impression that one knows what works. An evidence-informed prevention policy needs to be aware of the limits of our knowledge, but at the same time knowledgeable of what social science research can provide – even if the results are provisional, often controversial and fraught with methodological problems.     

驯鹿β-防御素-1 cDNA 3''''末端的克隆及序列分析

为进一步研究驯鹿β-防御素-1(reBD-1)基因的分子结构,利用已克隆出的reBD-1部分片段,设计了1条特异性上游引物,并以反转录引物中的部分序列即3 sites Adaptor Primer作为下游引物,采用3′RACE技术成功克隆了reBD-1 cDNA的3′末端序列.通过与已知reBD-1片段拼接,得到了192 bp的完整开放读码框(ORF)、终止密码子TAA、118 bp的3′非翻译区(3′UTR)以及poly(A)15,其中ORF编码具有64个氨基酸残基的reBD-1前原肽.