混合生物检材的个人识别及研究进展

混合生物检材一般指两个或多个生物学成分混杂在一起的一类检材,包括不同个体来源的精液、阴道分泌液、血液、尿液、汗液等形成的混合斑迹和含有少量胎儿细胞的母体外周血等。这类检材的个体识别是法医学实际检案中经常遇到。由于不同个体的遗传物质混合存在,往往给检验工作带来很大的麻烦。多年来,学者们就这一问题进行了广泛的探讨,积累了不少成功的经验。与分析单纯生物检材一样,分析混合生物检材所使用的遗传标记一般也为血型、多态蛋白等表型标记及DNA多态标记,但在检验方法及分析策略上则有所不同。本文就各类遗传标记在混合检材中…     

六色荧光标记快速PCR扩增体系的建立及验证

目的建立PCR快速扩增程序和体系,并对其技术指标进行验证。方法采用六色荧光标记技术,对24个常染色体STR基因座、1个Y-STR基因座和Amelogenin、Y-In Del基因座进行复合扩增及毛细管电泳检测,同时考察体系的灵敏度、特异性、同一性、稳定性、混合样本及批量样本测试,并观察各种常见检材及降解、脱落细胞检材的分型情况。结果所建立的体系灵敏度达0.062 5 ng,快速扩增仅耗时65 min就可获得准确分型;种属特异性高;各种纸质血样本和混合、降解、脱落细胞检材的分型正确。结论本研究建立的快速扩增体系可显著提升检验速率,分型准确、稳定,对建立STR数据库、研究群体遗传学和进行法医学鉴定有重要意义。     

3种分离提取混合斑精子DNA的方法比较

性犯罪案件中最常见的生物学检材为精液与阴道分泌液混合斑,其精子DNA的提取通常情况下采用常规的差异裂解细胞法结合酚、氯仿抽提[1],但由于检材条件各不相同,有些混合斑中精子细胞极少,核酸得率和纯度较低,有检测失败的可能或致使精子STR分型困难[2]。文献曾报道过多种改良方法[3,4],但其成功与否很大程度上受到检验人员的经验、水平等主观因素以及检材的具体条件影响。本文作者应用差异裂解法、Phase lock GelTM法[5]和D ifferexTM法[6]对三组不同条件的混合斑样品分离提取精子DNA,使用Powerplex16TM试剂盒分型,对3种方法进行比…     

改良EVO150-8方法在DNA自动化检案中的应用

目的探讨改良EVO150-8方法在批量生物检材DNA检验中的应用价值,建立一种自动化、简单、快速的DNA提取方法。方法采用改良EVO150-8自动化核酸提取纯化仪器与DNA IQ磁珠法纯化试剂盒,对各现场提取的880份血迹、烟蒂、口香糖、精斑（混合斑）、组织、骨骼、脱落细胞等常见生物检材进行DNA提取与纯化,采用Identifiler试剂盒进行扩增检验,用3130XL电泳,GeneMapper ID V3.2分析软件进行分析比对。结果在880份生物检材中,有836份检材成功获得STR分型;检验92份检材仅需时128min。结论改良EVO150-8适合批量生物检材的自动化提取。     

PALM结合低体积扩增技术在混合斑检验中的应用

目的PALM系统联合应用低体积扩增技术,建立一种提取混合斑中精子DNA的分型方法。方法利用PALM切割捕获理想检材的精子细胞,将捕获的细胞直接放置到低体积扩增玻片的反应位点上,裂解细胞之后进行PCR扩增。结果20个精子细胞8次分型中,7次分型结果完全正确。10个精子细胞8次分型中,4次分型结果完全正确。1个精子细胞8次分型中,出现位点的基因座均在10个以上。将该方法应用于两例实际案例的混合斑检材,取得了满意效果。结论联合运用PALM系统和低体积扩增技术对混合斑检材中的精子细胞检验具有重要意义。     

PALM结合低体积扩增技术在混合斑检验中的应用

目的PALM系统联合应用低体积扩增技术,建立一种提取混合斑中精子DNA的分型方法。方法利用PALM切割捕获理想检材的精子细胞,将捕获的细胞直接放置到低体积扩增玻片的反应位点上,裂解细胞之后进行PCR扩增。结果20个精子细胞8次分型中,7次分型结果完全正确。10个精子细胞8次分型中,4次分型结果完全正确。1个精子细胞8次分型中,出现位点的基因座均在10个以上。将该方法应用于两例实际案例的混合斑检材,取得了满意效果。结论联合运用PALM系统和低体积扩增技术对混合斑检材中的精子细胞检验具有重要意义。     

限制性组合分析法推定男女混合斑中个体分型初探

正混合斑是指包含两名或两名以上个体的混合生物检材,在多数情况下,此类检材的DNA分型往往表现为两人或多人的混合分型,使结果分析较为复杂[1]。本文尝试采用2005年国际法医遗传学会(ISFG)推荐的关于混合斑结果分析中的计算方法对混合斑案件中单一个体DNA分型结果进行分析。1材料与方法1.1样本及检验样本由公安部物证鉴定中心提供强奸案件中床单上混合斑检材1份,为日常检案积累,根据案情调查证实该检材系混合斑。DNA检验采用Chelex法提取上述检材DNA,经DNATyperTM15 plus试剂盒扩增后在ABI 3130遗     

免疫磁珠法分离混合样本中血液成分的探究

目的 基于免疫磁珠法分离脱落上皮细胞中的白细胞，消除或减弱混合检材中血液来源STR分型对结果分析的干扰。方法 分别取两名不同个体的血液和口腔脱落上皮细胞，按不同比例制备成混合样本作为实验组，并同时制备细胞量相等的对照组。应用免疫磁珠法分离实验组样本中白细胞，并与对照组以相同条件进行DNA提取、扩增、分型，对比两组STR分型结果。结果 当血液量较少时，对照组为混合STR分型，经免疫磁珠法分离混合检材中白细胞后，实验组为单一来源STR分型；当血液量较多时，此时对照组为混合STR分型，但口腔脱落上皮细胞来源的STR分型谱带峰高较低甚至丢失，经免疫磁珠法后，实验组仍为STR混合分型，但口腔脱落上皮细胞来源的STR分型谱带成为主峰；当混合样本中口腔脱落上皮细胞微量，血液占比极大时，此时对照组为血液来源的单一STR分型结果，经免疫磁珠法后，实验组为STR混合分型，包含口腔脱落上皮细胞来源的所有等位基因分型。结论 该方法可用于分离脱落上皮细胞中血液成分，降低血液来源的DNA比例，能够改善此类混合检材中目的细胞的STR分型结果，为刑事案件中含有血迹浸染的混合生物检材的检验提供了一种新思路。     

X-STR在精斑混合检材检验中的法医学应用

目的应用X和Y染色体STR分析含有相同父系祖先个体DNA的混合检材。方法用差异裂解法提取混合检材基因组DNA,用PowerPlex 21试剂盒、GoldeneyeTM DNA身份鉴定系统27Y试剂盒、SureID?PathFinder扩增荧光检测试剂盒和GoldeneyeTM DNA身份鉴定系统17X试剂盒检测混合检材。结果根据X-STR和Y-STR单倍型成功鉴别具有相同父系祖先的嫌疑人,确定混合检材中存在4个男性个体DNA。结论 X-STR可以应用于检验精斑混合检材,结合Y-STR数据可区分相同父系男性个体,并辅助判断混合检材中男性个体的数量。     

精液混合斑检验方法的应用

目前精斑-混合斑的检验方法很多,本文重点介绍其选择、综合检验方法,此法可相互印证,起到复核作用,结果可靠,使用0.5cm~2检材检验可取得理想结果。 1.现场提取性犯罪检材,涂片镜检出 精子,可直接用解离法或配合中和法测其血型。 2.检材未直接检出精子,可参考表中方法制定检验方案。     

混合生物样本组分含量的计算方法及应用初探

在法医学实际检案中,混合样本的DNA检验经常遇到,也有相关的研究报告[1-3],但由于检材中混合样本浓度比例较复杂等问题,使检验结果的分析常存在不确定性。本文制备不同混合比例的混合样本进行DNA分型检验,希望通过对结果的分析,探讨精确计算混合样本各组分含量的方法,希望能为实际应用提供数据参考。     

红外差谱技术用于微量混合油漆的比对检验

对交通事故中的漆片检材进行同一物质比对时,某些情况下难以提取到单一的油漆碎片而是两辆车的油漆混合在一起,给物证比对带来困难。红外差谱技术具有辨别混合物中不同成分的功能,因此可应用于交通事故中混合油漆检材的比对检验。本文对一起交通事故的漆片检材,分别用三种方式提取、制样,用红外光谱仪进行分析,借助红外差谱技术对谱图进行处理,排除混合油漆的干扰。处理后得到的谱图与样本的谱图进行比对,结果显示两者主要官能团吸收峰位置、峰型、峰强度基本一致,可出具比对一致的结论。针对混合油漆检材的比对检验,红外差谱技术可提供支持。     

应用Differex~(TM)法提取混合斑中精子DNA

对混合斑中精子的检验,采用传统的Chelex-100两步消化法存在消化时间长、离心洗涤次数不易控制等缺点,一旦操作不当,就会因此而引起DNA混合、损失,导致PCR反应失败。本文应用D ifferexTM系统法,解决了部分混合斑检材的精子DNA提取问题,在实际的案件鉴定中取得了满意的效果。1材料与方法1.1案件检材所用检材系案件鉴定中含有精子的现场提取床单上的混合斑、被害人的短裤、擦拭用的报纸、被害人的阴道及口腔拭子,以及在室温下存放约1年的阴道拭子。1.2 DNA提取方法1.2.1 Chelex-100两步消化法[1]取适量检材剪碎,加入适量TNE,37℃水浴…     

棉织物上血斑洗涤后无损取材方式及DNA提取方法研究

目的 探究不同无损取材方式及DNA提取方法对棉织物上洗涤血斑DNA分析成功率的影响。方法 采用棉签擦拭法、植绒拭子擦拭法、脱落细胞粘取器粘取法富集洗涤棉织物上的血痕。分别采用Chelex 100法、过柱法和磁珠法提取DNA。采用常规PCR和复合PCR技术扩增目标片段并分别运用琼脂糖凝胶电泳和毛细管电泳技术检测目标产物。结果 植绒拭子擦拭法取材的效果最差,通过脱落细胞粘取器粘取法获得的DNA浓度、STR分型成功率均高于棉签擦拭法,且粘取法操作较简单,实践中优先推荐选择粘取法作为该类检材的取材方式。此外,DNA浓度和STR分型结果均表明过柱法提取DNA的效果优于Chelex法,而磁珠法在3种DNA提取方法中效果最差,建议实践中选择过柱法作为此类检材DNA提取的首选方法。结论 针对棉织物检材上洗涤血痕无损取材及DNA分析,优先推荐选择脱落细胞粘取器粘取法和过柱法分别进行样本取材以及DNA提取。     

改良差异裂解法结合硅珠法提取混合斑精子DNA

目的采用改良差异裂解法结合硅珠法提取混合斑中精子DNA,并评价其应用价值。方法收集52例经常规差异裂解法检验含有女性分型的混合斑检材,采用改良差异裂解法结合硅珠法提取精子细胞DNA,IdentifilerTM试剂盒进行PCR扩增检验。并将常规差异裂解法结果作为对照。结果52例混合斑检材中,采用改良差异裂解法结合硅珠法检出单一男性精子成分有38例,男性分型检出率达到98．08％。结论改良差异裂解法结合硅珠法适合提取混合斑中精子DNA。     

检材量对硅珠法提取脱落细胞DNA的影响

犯罪嫌疑人遗留在犯罪现场的帽子、口罩、衣服、手套、运动鞋、袜子等含有机体脱落细胞,在实验室逐渐成为常规检材。由于这类检材含有的脱落细胞少,散在分布,给检验带来了一定的困难。本文通过增加取材量和在15mL离心管中消化后用硅珠法纯化DNA,能显著提高检验成功率。1材料与方法1.1检材本实验室日常受理的案件检材54例,其中帽子5例,口罩5例,衣服10例,手套20例,运动鞋10例,袜子4例以及对应的犯罪嫌疑人血样。     

触摸检材DNA的STR检验

触摸检材是指附有人体手部脱落细胞的生物检材。刑事案件中此类检材由于与人体接触时间短,所含脱落细胞量少,STR检验的难度相对较大。笔者在实际检案中利用硅珠法处理这类检材取得了较好的效果。     

多聚酶链反应(PCR)在法医生物学检材鉴定中的应用

法医物证学的鉴定客体主要是生物学检材，其形式是多种多样的：如在各种载体k的血痕，精液与阴道液的混合斑，毛发，骨组织，被害人指甲缝中残留的组织成份等．对这些检材进行检验的中要目的就是根据检验结果确定该生物学检材是谁所留．以往所采用的检验方法主要包括红细胞血型和蛋白质遗传标记分型等检测方法．现在我们可以在DNA水’【‘对有关生物学检材进行遗传多态性的检验，因为每一个个体（除非同卵双生）从遗传学上来看都是独一无二的，在DNA水平对生物学检材进行遗传标记的分型检测，可望达到接近个体绝对认定的结果．目前有两种…     

精子富集柱分离技术的研究

目的在传统差异裂解法基础上,研究建立新的混合斑检材中精子分离技术。方法根据精细胞的结构特点,研制精子富集柱。取混合斑检材经第一步消化后的混合液,加入精子富集柱中离心,使DNA等小分子物质透过,而精细胞被特异性黏附和拦截在富集层中。采用本文技术和常规裂解方法对12份混合斑检材中精子进行分离,分离后精子DNA采用Identifiler试剂盒进行PCR扩增和电泳检测。结果混合斑检材经精子富集柱分离后均获得单一男性精子的STR分型结果,而12份检材用常规裂解方法分离,其中有6份检材女性成分去除不完全或未能检出精子STR基因型。结论本研究建立的精子富集柱分离技术适用于常见混合斑检材中精子的分离,特别适合对含有大量女性混合物而精子量较少检材的分离提取。     

2人份混合检材STR图谱分析

目的探讨混合检材STR图谱分析结果。方法收集了3例实际案例检材,提取DNA,PCR扩增后用310型遗传分析仪检测。结果当DNA含量差距不大时,2人份混合检材检验结果易于分析,当DNA含量差距较大时或者2人份以上混合检材,图谱分析非常困难。结论根据本文提出的问题和实验结果,当遇到这样的混合样品,分析结论一定要谨慎。