应用ELISA检测猪瘟免疫抗体

猪瘟是危害养猪业的主要疫病之一。 1985年以前 ,该病在青海省流行比较严重 ,曾造成较大的经济损失。从 1987年起青海省采取每年春秋两季给猪全面预防注射猪瘟疫苗 ,并随时补针的免疫措施 ,使西宁、互助等地猪瘟的致死率由 1987年的 9.14 %下降到现在的 0 .2 0 %以下 ,基本上控制了猪瘟的发生和流行。但是 ,青海省断乳仔猪以及由外地引入仔猪的猪瘟病例时有发生。为了掌握青海省猪瘟免疫状况 ,笔者于 2 0 0 1年应用ＥＬＩＳＡ方法在省内 6个县 (市 )进行了猪瘟免疫血清抗体检测。1　材料和方法1.1　诊断试剂　猪瘟强毒、弱毒单克隆抗体纯化…     

用琼脂扩散试验检测滤纸片血样中小鹅瘟抗体

用琼脂扩散试验检测滤纸片血样中小鹅瘟抗体田晋红（四川畜牧兽医学院荣昌６３２４６０）近年来，国内外运用滤纸吸取血样进行某些疫病的抗体检查，这种方法不需要分离血清，且采血方便、操作简单、易于运送和保存。本试验利用琼脂扩散试验（ＡＧＰ）检测滤纸片血样中的小...     

猪瘟病毒血清抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立快速、准确的猪瘟病毒(CSFV)血清抗体检测方法,根据Gen Bank上猪瘟兔化弱毒全基因序列,设计1对引物,扩增E2蛋白主要抗原区基因片段;然后,将其克隆入载体p ET-28a(+),采用大肠杆菌Rosetta(DE3)表达出含E2蛋白主要抗原区的重组蛋白。以纯化的截短E2蛋白为包被抗原,优化间接ELISA反应条件,建立了检测CSFV血清抗体的间接ELISA。经过优化,确定最佳抗原包被浓度为8 g/m L,待检血清稀释倍数为1∶160,酶标二抗稀释倍数为1∶2000。该方法的阳性临界值为0.37,阴性临界值为0.32。批内变异系数在1.58%~3.33%之间,批间变异系数在2.67%~5.35%之间,说明该方法重复性良好。特异性检验中,该方法与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒、猪流感病毒、传染性胃肠炎病毒、乙型脑炎病毒、伪狂犬病病毒、猪细小病毒阳性血清均没有交叉反应。用该方法与IDEXX CSFV抗体检测试剂盒对1 101份临床猪血清样品进行符合性检测,结果,该方法的敏感性、特异性、符合率分别为89.07%(603/677)、77.59%(329/424)和84.65%(932/1101)。上述结果表明,该方法可用于临床CSFV血清抗体的检测,为CSFV血清抗体检测试剂盒的研制奠定了基础。     

直接法McAb－Dot－ELISA在检测药物治疗血吸虫病耕牛血清循环抗原中的应用

直接法ＭｃＡｂ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ在检测药物治疗血吸虫病耕牛血清循环抗原中的应用叶萍，施福恢，沈纬，田锷，林矫矫，张正达，石耀军，林邦发，钱承贵（中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所２００２３２）张雪娟（浙江省农业科学院畜牧兽医研究所）我们已报告应用...     

应用间接ELISA法检测火鸡血清及分泌液中Ig的含量

火鸡与鸡等禽类Ｉｇ含量的检测,目前尚缺乏能被一般实验室普遍接受的方法。本试验用间接ＥＬＩＳＡ法,将样品直接包被微孔板,以兔抗鸡ＩｇＧ,ＩｇＡ和ＩｇＭ血清作为第一抗体,酶标记羊抗兔ＩｇＧ作为第二抗体,对火鸡１～６０日龄的血清、泪液、气管冲洗液、胆汁及肠...     

应用单克隆抗体ELISA抑制法检测细胞培养中的猪瘟兔化弱毒

应用2种针对不同抗原决定簇的抗猪瘟兔化弱毒单克隆抗体建立了检测细胞培养中猪瘟兔化弱毒的ELISA抑制试验。对20份不同批次的猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞培养物的测定结果表明,该法可较准确地反映病毒在细胞培养中的产量;将病毒培养物置4℃、25℃和37℃3天、超声裂解、冻融3次和6次等不同方法处理对试验结果无显著影响(P>0.05);通过与兔体接种试验比较,探讨分析了猪瘟兔化弱毒疫苗生产工艺中的问题。     

猪盖塔病间接ELISA检测方法的建立与应用

为建立一种快速、准确、敏感性高、特异性好的猪盖塔病检测方法,采用超速离心纯化的灭活盖塔病毒(Getah virus,GETV)作为抗原包被ELISA板,分别用GETV免疫小鼠腹水和正常小鼠腹水作为阳性、阴性对照,建立检测猪盖塔病的间接ELISA方法。采用棋盘滴定法确定最佳抗原包被质量浓度,为7.795ng/mL;通过对70份阴性猪血清的检测,确定判定标准;特异性试验表明,该方法与同属病毒以及其他易感病毒之间无血清学交叉反应,具有良好的特异性;用所建立的ELISA方法与血清中和试验(SNT)、间接免疫荧光试验同时检测不同GETV抗体效价的猪血清,结果表明该间接ELISA敏感性最高,且检测用时最短;用金标准SNT检验所建立的ELISA方法,结果显示这2种方法的一致性为88.89%,Kappa为0.776,具有较高的一致性。用建立的GETV间接ELISA方法对双江县90份临床样品进行检测,阳性率为47.78%,提示双江县猪群中存在GETV感染,盖塔病对养猪业存在潜在风险。结果表明,成功建立了猪盖塔病间接ELISA检测方法。     

猪瘟强毒单克隆抗体酶联免疫吸附试验对猪瘟血清抗体的检测

应用猪瘟强毒单克隆抗体酶联免疫吸附试验 (ELISA)对青海省 4个县的免疫猪场 62 9份猪血样进行检测。结果 ,检出抗体阳性 42份 ,平均阳性率为 6.68%。提示经猪瘟疫苗免疫猪群感染了猪瘟强毒。     

IHA AGP及Dot-ELISA检测猪瘟抗体的比较试验

从1990年以来,我们用血凝抑制(IHA)和琼脂扩散(AGP)试验在本省12个县(市),对猪瘟疫苗免疫猪群进行抽样检测血清抗体,结果:IHA法检测的阳性率(达保护抗体滴度)为89.26％(1869/2094);AGP法检测的阳性率(出现沉淀线)为73.84％(1284/1739)。其中黄平、惠水两县分别使用三联苗和猪瘟冻干苗,给田间猪群免疫,均用150个免疫量,免疫后2月检测抗体。两种方法共检测521头(份)血清,均为阳性的有427头(份),其阳性率为81.95％[IHA法的阳性率为86.76％(452/521);     

猪SIgA直接ELISA检测方法的建立及应用

采集猪肠黏液并分离纯化出猪分泌型免疫球蛋白A(SIgA),制备兔抗猪SIgA IgG抗体,经HRP标记,并优化直接ELISA检测猪SIgA的条件,建立了检测猪SIgA的直接ELISA方法。结果显示,筛选的最佳反应条件:黏液蛋白包被浓度为10μg/mL,兔抗猪SIgA IgG-HRP酶标抗体的工作浓度为1∶200,反应时间为60min。包被SIgA浓度标准曲线的线性范围为90～1 400ng/mL,回收率为85.85%～133.88%,变异系数为13.12%～17.67%。采用该方法对猪肺炎支原体灭活疫苗免疫与攻毒后的仔猪肺冲洗液和肠黏液中的SIgA进行检测;结果显示,攻毒后免疫猪肺冲洗液中SIgA含量平均为205.81ng/mL,显著高于攻毒对照猪的147.56ng/mL和空白对照猪的124.37ng/mL(P<0.05);免疫猪肠黏液中SIgA含量平均为67.94ng/mL,与对照猪无明显差异。结果证实,建立的猪SIgA直接ELISA方法具有经济、适用和准确的特点。     

单克隆抗体阻断ELISA检测SPF猪与非SPF猪肺炎霉形体抗体的比较

单克隆抗体阻断ＥＬＩＳＡ检测ＳＰＦ猪与非ＳＰＦ猪肺炎霉形体抗体的比较严彩红刘志南（北京市ＳＰＦ猪育种管理中心１０００９５）猪霉形体肺炎是由猪肺炎霉形体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）引起的一种慢性呼吸道传染病，带菌猪是主要传染源。...     

猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA检测方法的建立及应用

利用PCV2-Cap蛋白中和性单克隆抗体建立了一种检测猪血清中PCV2中和抗体的阻断ELISA方法.用该方法与免疫过氧化物酶单层细胞试验对353份试验猪血清样品进行平行检测,结果两种方法的符合率为96.0%;该方法的敏感性为97.9%,特异性为92.4%,且与其他几种猪病毒参考阳性血清无交叉反应.该阻断ELISA与血清中和试验的检测结果呈显著正相关(r=0.997 0),其敏感性还优于血清中和试验.用阻断ELISA对PCV2灭活疫苗免疫与攻毒试验猪血清样品进行检测,结果显示,疫苗接种后第2周就能检测到PCV2中和抗体,4周后阳转率达100%.另外,用该方法对东北三省不同地区送检的703份血清样品进行检测,结果阳性检出率为73.0%.表明,东北三省猪场中的PCV2感染率较高,危害严重.     

副猪嗜血杆菌血清5型间接血凝试验和间接ELISA抗体检测方法的建立

为建立副猪嗜血杆菌(HPS)的血清学诊断方法,通过探索HPS荚膜多糖产生的最适体外培养条件,提取了HPS血清5型菌株的荚膜多糖(CPS),并以之为抗原分别建立了间接血凝试验(IHA)和间接ELISA两种抗体检测方法,对其特异性、敏感性和符合率进行了比较研究。结果表明,两种检测方法的特异性良好,但ELISA的敏感性是IHA的5~10倍,二者的阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为79.7%、55.2%和65.3%。用这两种方法检测了320份临床送检猪血清,IHA和ELISA的阳性率分别为40%和59%。结果证实,这两种方法适用于不同实验室条件下HPS的诊断和流行病学调查。     

滤纸干血滴供检的间接血凝试验法在猪弓形体病诊断上的应用

本文把在实验兔弓形体病诊断上取得较好结果的滤纸干血滴供检的间接血凝试验法用于猪弓形体病的诊断。首先对实验感染猪弓形体抗体的出现情况进行了观察,进而对流行地区猪弓形体抗体作了检测,前后采自流行地区的753份样品中,阳性200份,阳性率26.56％。从而肯定了滤纸干血滴供检的间接血凝试验法在猪弓形体病诊断及流行病学调查上的实用前景。     

副猪嗜血杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

采用超声裂解的副猪嗜血杆菌菌体上清作为包被抗原,建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法.通过对试验条件进行筛选优化,确定了最佳反应条件:抗原包被浓度80μg/mL;37℃作用2 h后4℃过夜包被,待检血清的稀释度为1:320,抗原抗体反应时间为1 h,酶标二抗稀释度为1:15 000,作用时间为1 h,底物显色时间为15 min.待检血清S/N值≥2.5时判为阳性,S/N值<2.5时判为阴性.特异性、重复性和敏感性试验以及对200份送检血清的检测结果表明,建立的间接ELISA方法的特异性和重复性良好,敏感性比间接血凝试验高,可用于副猪嗜血杆菌的检疫和流行病学调查.     

应用酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸综合征血清抗体的研究

建立的检测猪生殖与呼吸综合征(PRRS)酶联免疫吸附试验(ELISA),其抗原包被浓度为2.4μg/mL,血清稀释度为1100,酶标二抗的工作浓度为1500.应用该方法对陕西省9个地区采集的有疑似PRRS征候的250份猪血清进行检测,检出阳性血清32份,阳性率为12.8%,从而证实陕西省存在PRRS,也为该病的大面积血清学普查提供了一种简易、快速、准确的检测方法.     

猪生殖与呼吸综合征血清抗体重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立

以纯化的猪生殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)重组N蛋白作为包被抗原 ,通过对各项试验条件的优化 ,建立起检测PRRS血清抗体的重组N蛋白间接ELISA检测方法。用此方法检测了2 0 0份血清样品 ,并与IDEXX公司ELISA试剂盒的检测结果相比较 ,敏感性和特异性分别为 93%和95 % ,总符合率达 91%。 2种检测方法的结果之间差异不显著 (P >0 .0 5 )。试验表明 ,建立的间接ELISA检测方法具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点 ,可用于PRRS血清抗体的检测。     

猪流行性腹泻病毒抗原捕获ELISA抗体检测方法的建立与应用

用猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白单克隆抗体IgG包被酶标板,以纯化的PEDV作为捕获抗原,建立了PEDV抗原捕获ELISA抗体检测方法。优化后该方法的反应条件为:单克隆抗体包被浓度为2μg/mL,37℃包被2h加4℃过夜;含50g/L脱脂奶粉的磷酸盐缓冲液作为封闭液,37℃封闭3h;捕获抗原的质量浓度为5μg/mL,37℃作用3h;被检猪血清做1∶50稀释,37℃作用1h;山羊抗猪IgG-HRP稀释度为1∶2 000,37℃作用45min;底物最佳作用时间为37℃10min。设定阴阳性血清抗体对照,计算血清样品的S/P值,S/P值≥0.37判为阳性,S/P值0.323判为阴性,介于两者之间为可疑。用建立的ELISA检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒和口蹄疫病毒等阳性血清,结果均无交叉反应性。该方法的批间和批内变异系数均小于10%。相对国产商品化抗体检测试剂盒,其敏感性、特异性和符合率分别为94.6%、91.3%和93.3%。应用本方法检测山东、浙江和江苏省的308份猪血清样品,结果 PEDV抗体阳性率达89.29%。结果表明,建立的抗原捕获ELISA敏感性、特异性和重复性良好,可用于PEDV抗体检测和流行病学调查。     

应用斑点酶联免疫吸附试验检测猪瘟病毒抗体的试验

本实验室曾研究报道了应用HRP-SPA-ELISA检测猪瘟病毒抗体的方法[见曾医大学学报7(4),391～396,1987],在此基础上,我们进一步探索适于基层兽医单位推广应用的血清学手段,建立了斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测猪瘟病毒抗体的方法。试验结果表明,该法敏感性高、特异性强,与兔体中和试验及HRP-SPA-EIISA呈极其显著的正相关。     

人工感染猪瘟猪外周血液中游离CD_2的检测

游离CD_2是由T细胞脱落/分泌至血液及其它体液中一种糖蛋白。研究认为,血液中的游离CD_2主要表现为免疫抑制作用,其存在量与某些细胞免疫功能受抑制的疾病有密切关系。因此,测定血液中游离CD_2不仅能够反映机体的细胞免疫状态,也是研究某些疾病发生机理和诊断方法的重要手段。