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免疫酶斑点试验(Do t-ELISA)检测抗体,具有敏感、简便等优点,因此,近年来被用于检测多种寄生虫抗原和抗寄生虫抗体。笔者利用亲和素-生物素(Avidin-Biotin)的生物放大作用,将Avidin Biotin-HRP Complex(ABC)与Dot-ELISA结合,建立了ABC-Dot-ELISA,用于检测人工感染华支睾吸虫家兔血清中的特异性IgG,同时做ABC-RLISA进行比较。(一)材料和方法1.抗原制备:按常规方法进行,蛋白质含量为5 mg/ml。2.生物素化羊抗兔地IgG(b-SARIgG)和 相似文献
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Hawkes等(1982)建立了斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)后,已有许多学者将其用于寄生虫、细菌、病毒的检测,认为比普通ELISA简单、特异、敏感、快速。70年代末建立的生物素亲和素酶联免疫吸附试验(ABC-ELI-SA),大大提高了ELISA的敏感性。我们结合两者之长,建立了生物素亲和素斑点酶联免疫吸附试验(ABC-Dot-ELISA),用于检测仔猪、羔羊及婴儿腹泻粪便中轮状病毒抗原及羊(山羊、绵羊)与人血清中的轮状病毒抗体,并同Dot-ELI-SA、ABC-ELISA及ELISA进行了比较。 相似文献
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生物索-亲和素酶联免疫斑点法(BA-Dot-ELISA)是将生物素-亲和素系统(BAS)引入常规酶联免疫斑点法(Dot-ELISA)形成的一种新型的免疫学诊断方法。笔者应用这种方法,进行了猪囊虫病血清学诊断的初步研究。 相似文献
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我们从1988年开始,应用生物素亲和素系统BA-ELISA法,对295头份牛血清进行了检测,并同时与常规ELISA方法在敏感性、特异性、稳定性等进行了对比试验。均取得了满意结果。(一)材料和方法1.试剂:①结核杆菌纯蛋白衍生物(PPD)抗原,由北京中国生物药品检定所提供。本品批号:0083。②生物素化葡萄球菌A蛋白(B-SPA);③抗生物素标记辣根过氧化物酶(A-HRP);④兔抗牛IgG;⑤牛血清白蛋白;⑥小牛血清,以上由中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所提供。⑦聚合“OT”,由湖北医学院微生物学教研室提供。 相似文献
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本文应用国产BAS试剂,首次建立了检测实验猪旋毛虫病的亲合素—生物素—过氧化物酶复合物(ABC)染色法。本法与常规间接免疫过氧化物酶(IIP)染色法相比,敏感性强、特异性高、稳定可靠,其血清滴度比IIP法高2.24倍;与IIP法相比,可提前检出抗旋毛虫抗体;该法有助于低抗体水平旋毛虫病猪的诊断。 相似文献
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本试验使用生物素——亲和素免疫酶标法(BA-ELISA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)对221份绵羊布氏菌病血清抗体进行了检测,同时与常规血清学检测法进行了比较。结果表明BA-ELISA和ELISA的检出率明显高于其它方法。在其中63份菌检阳性和免疫血清中,BA-ELISA和ELISA分别检出60/63份(95.3%)和52/63份(82.5%),而试管凝集试验为20/41份(48.8%),补体结合试验为17/41份(41.5%),虎红平板试验为16/41份(39.0%),此外,还就BA-ELISA法特异性,敏感性等方面进行试验,显示出BA-ELISA具有很强的特异性,其敏感性比ELISA高4~8倍,比常规补体结合反应高256倍。这些都表明BA-ELISA是绵羊布氏菌病血清学诊断上具有发展前途的新方法。 相似文献
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本文报告了用N—羟基丁二酰亚胺法制备生物素酯以及应用羧甲基纤维素离子交换法从鸡蛋清中提取纯化亲合素的全过程,并对二者的部分理化性质和生物学活性进行了鉴定。所得生物素酯在普通显微镜下为白色结晶。熔点(MP)为201℃,质谱所得分子量(MW)为340dlt。纯化亲合素所带电荷和泳动方向与溶菌酶相同,SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为64000dlt,用N—溴琥珀酰亚胺作用于亲合素可灭活其活性,阻止了与生物素间的结合,用233nm紫外分光光度法和用羟基偶氮苯甲酸可见分光光度法测得亲合素活性值为10.3个单位。此外,还对生物素酯与抗体之间结合比以及应用改良过碘酸钠法酶标亲合素过程进行了探讨。生物素与抗体间结合比以1:7为最佳,酶标亲合素的工作浓度约5mg/ml(1:1600)。 相似文献
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应用生物素-亲和素系统(BAS)的BA法分别在两种载体上与常规ELISA法对比,进行了诊断人、绵羊棘球蚴病实验研究。结果以聚苯乙烯板为载体的BA-ElISA法诊断人棘球坳病:敏感性92~100%,特异性95~100%,常规ELISA法敏感性67~83%,特异性92~100%,检测绵羊棘球蚴病,敏感性61~90%,特异性67~90%、常规ELISA法敏感性为49~72%,特异性80~93%。用硝酸纤维素膜为载体的BA-Dot-ELISA法检测人血清:敏感性100%,特异性91.7~100%,Dot-ELISA检测绵羊血清:敏感性73.3~75.6%,特异性78.9~89.5%。试验证明BA法较常规ELISA有着更高的敏感性和特异性,斑点法可以取得与聚苯乙烯板完全等同的效果。 相似文献
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建立了检测CSFV的快速、敏感、特异的RT PCRELISA方法。在RT PCR过程中以地高辛标记的dUTP(DIG dUTP)标记PCR产物 ,用生物素标记的捕获探针在链亲和素包被微量板孔中杂交捕获PCR产物。该方法的敏感性较常规RT PCR方法高 10 0倍 ,可检测出 35 0 μL1∶10 0 (相当于 3.5mg)的兔脾组织悬液中的C株CSFV ,特异性强 ,避免了PCR过程中因污染导致的假阳性结果。通过对RT PCR和微量杂交系统的条件优化 ,该方法用于检测C株兔脾组织毒、细胞适应毒和野毒感染的猪组织毒样品 ,效果良好 相似文献
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应用亲合素-生物素系统(ABS)的试剂进行ABC-ELISA,并与常规ELISA和IHA予以比较,结果表明:在从90只山羊血清中检测弓形虫抗体阳性上,ABC-ELISA为56例(62.22%),常规ELISA为40例(44.44%),IHA为21例(23.33%);在检出弓形虫阳性抗体的滴度上,ABC-ELISA比常规ELISA敏感1.59倍,比IHA敏感3.07倍。ABC-ELISA与常规ELISA和IHA均呈线性正相关。因此,ABC-ELISA为弓形虫病的免疫学诊断和单克隆抗体的检测提供了比常规ELISA和IHA更敏感的新手段。 相似文献
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《中国兽医科学》2019,(8)
为了在牛上应用单个B细胞抗体技术制备口蹄疫病毒(FMDV)特异性单克隆抗体,本研究利用生物素标记O型FMDV 146S抗原,从免疫牛外周血单个核细胞(PBMCs)中分选单个抗原特异性B细胞,通过单个B细胞抗体基因测定,获得Ig G抗体重链与轻链可变区编码序列,将可变区基因插入含有牛Ig G抗体恒定区的pcDNA3.4载体中,构建完整Ig G抗体的表达质粒。将表达质粒转染中国仓鼠卵巢悬浮细胞(CHO-S)进行抗体表达与纯化。经病毒中和试验(VNT)、间接免疫荧光试验(IFA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、Western-blot验证抗体的生物活性。结果显示,获得了4株FMDV特异性单克隆工程抗体,其中2株(A35、B57)可以中和O型FMDV;2株(A7、E32)IFA检测为阳性,其中E32可特异性结合O型和A型FMDV两种抗原,但没有病毒中和活性;ELISA结果显示,E32具有较好的亲合力;Western-blot结果显示,E32可特异性结合衣壳蛋白VP2,说明在衣壳蛋白VP2存在型间保守的抗原位点,为通用型FMDV抗原检测方法的研究提供了材料。 相似文献
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(一)定义酶联接(标记)免疫吸附试验(EnzymeLinkedImmunosorbentAssay,以下简称ELISA),是根据抗原与抗体的免疫反应原理和酶的高效催化作用的显色原理,以酶降解底物而显色浓淡和消光值大小为指标,用酶标记的抗免疫球蛋白抗体检测特异性抗体或抗原的一种较敏感的技术。 相似文献
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本试验采用解剖学、组织学(AE)、组织化学(ANAE,RNA)、免疫组织化学(BAS)、电镜技术和血清学检验方法对28日龄雏鸡人工感染IBDV-J_1-C_7F_5强毒株后不同时期的病理形态学变化、免疫反应、病毒抗原组织定位和病毒消长规律等方面进行了研究。试验表明:IBDV经口感染后可经血液和粘膜上皮侵入法氏囊,病毒在体内运行有两次病毒血症过程。IBDV主要致法氏囊淋巴组织的坏死和萎缩,受损的法氏囊具有可复性。在IBD的抗损伤反应中,体液免疫和巨噬细胞起主要作用,细胞免疫作用不明显。生物素—亲和素酶标染色法应用于IBDV抗原组织定位具有敏感性高、特异性强的优点,该法可用于早期对IBD的诊断。 相似文献
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应用小鼠抗犬小孢子菌(Microsporumcanis)特异性多克隆抗体,以生物素-亲和素酶标免疫组织学方法检测猫皮下伪肿瘤病理切片中对应的犬小孢子菌抗原,并与其它病原真菌进行了对比。试验结果显示,将真菌体外培养物经轻度匀浆的混悬液给小鼠皮下接种,可获得高滴度的特异性抗体。1500~11000稀释的血清和1100的二抗,以氨基乙烯苄唑(AEC)作底物进行免疫组织学检验,可将组织切片中对应的抗原染成红色。犬小孢子菌抗体与所检酵母型真菌的抗原不发生交叉反应,与褐色丝状真菌瘤中的常见病原如烟曲霉菌(Aspergilusfumigatus)、短颈扫帚霉菌(Scop-ulariopsisbrevicaulis)、脱毛分枝孢子菌(Cladosporiumtrichorches)、疣状瓶霉菌(Phialophorarerrucose)也无交叉反应,与链格孢菌(Alternariaalternata)有部分交叉。从而可区别皮肤真菌与其他常见病原真菌,为研究皮肤真菌感染非典型病理提供了一种可靠的手段 相似文献
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随着分子生物学的飞速发展,利用核苷酸碱基配对原理建立的核酸杂交技术已广泛地应用于分子生物学、医学和兽医学的各个领域。核酸杂交技术的应用使疾病诊断由检测体内正常、异常成份变化的理化诊断方法和检测抗原-抗体反应的免疫学诊断方法发展到了基因诊断水平,从而使疾病的诊断更为准确、可靠。核酸杂交技术中,常用放射性同位素(~(32)P、~3H、~(35)S、~(14)C)或其它标记物(半抗原、酶、生物素)标记特异核苷酸片段来制备核酸探针。现将常用核酸探针制备的方法作如下简介。 相似文献