肉用鸡垂体-肾上腺轴与免疫功能关系的研究

以艾维茵肉鸡为试验动物,研究了垂体-肾上腺轴在传染性腔上囊病病毒(IBDV)强毒株攻击时对免疫系统的调节作用.结果表明,用IBDV强毒株攻击后,试验鸡垂体-肾上腺轴活动加强,血清促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮(F)上升,抗IBDV抗体、白细胞介素2(IL-2)和白细胞介素3(IL-3)上升,T淋巴细胞转化率下降.未经IBD疫苗免疫的鸡由于免疫系统遭到IBDV破坏,在IBDV强毒株攻毒后,抗IBDV抗体、IL-2和IL-3的上升幅度均比经IBD疫苗免疫的低.试验鸡血清ACTH和F分别与抗IBDV抗体、IL-2和IL-3呈显著正相关,与T淋巴细胞转化率呈显著负相关,显示机体受病原微生物攻击后垂体-肾上腺轴对免疫系统的调节作用,即增强特异性免疫反应,抑制非特异性免疫细胞的扩增.     

BALB/c小鼠SLIT2和ROBO4基因组织特异性表达与分布的研究

SLIT2/RO BO4信号通路在炎症血管反应、白细胞渗出和血管再生等方面发挥重要作用。为深入了解SLIT2/ROBO4信号转导途径在炎症性疾病发生发展过程中的作用机制,本研究采用RT-q PCR和免疫组织化学的方法对SLIT2和ROBO4基因在BALB/c小鼠组织特异性的表达和分布进行了研究。结果表明:SLIT2在肾脏、心脏、肺脏和大脑中表达相对较高,在肾脏表达量最高;ROBO4在心脏、肝脏、肺脏和肾脏中表达相对较高,在心脏中表达量最高。免疫组织化学检测表明,SLIT2和ROBO4在心肌细胞、肝细胞、脾脏的内皮细胞、肺泡上皮细胞、肾小管上皮细胞和大脑皮质神经元中表现出相似的阳性定位。研究结果为深入探讨SLIT2/ROBO4信号通路在炎症性疾病发生发展和调控中的分子作用机制提供了基础数据,也为发展基于该通路的器官特异性炎症治疗策略提供了科学依据。     

高原甘加藏羊发情周期GnRHR基因在垂体和卵巢表达规律的研究

探究高原甘加藏羊发情周期促性腺激素释放激素受体(GnRHR)基因在垂体和卵巢组织中的表达规律,选取处于繁殖期健康未孕高原甘加藏羊48只,分为4组,每组12只,分别于发情前期、发情期、发情后期、间情期从甘加藏羊垂体和卵巢组织中提取总RNA,应用荧光定量RT-PCR方法,以GAPDH为内参,研究高原甘加藏羊发情周期垂体和卵巢组织中GnRHR基因表达的差异。结果显示:高原甘加藏羊整个发情周期不同阶段GnRHR mRNA在垂体和卵巢组织中均有表达。在甘加藏羊发情前期、发情期、发情后期、间情期垂体组织中GnRHR mRNA的相对表达量依次为0.8246±0.1739、1.5100±0.4187、0.2923±0.0202、1.0000±0.2100,其中发情期的相对表达量最高,与发情后期差异极显著(P0.01),与发情前期、间情期差异显著(P0.05);在卵巢组织中,GnRHR mRNA的相对表达量分别为1.0910±0.7665、0.5420±0.0763、1.3799±0.7452、1.0000±1.1221,其中发情后期的相对表达量最高,与发情期差异极显著(P0.01),与发情前期、间情期差异显著(P0.05)。这一研究结果为在分子水平上研究藏羊生殖活动调控机理提供了科学数据。     

比格犬β-防御素cBD1基因的原核表达与鉴定

为获得比格犬β-防御素cBD1基因的表达产物,根据GenBank中登录的犬β-防御素基因cBD1(canis familiarisβ-defensin-like peptide 1)的序列设计引物,提取比格犬睾丸组织总RNA,利用PCR扩增cBD1基因,然后将其克隆至pET-32a(+)载体,构建原核表达质粒pET-32a-cBD1,通过PCR、酶切鉴定和测序确认,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,并进行IPTG诱导和His-Ni-resin纯化目的蛋白。经SDS-PAGE检测,获得了约28ku的表达产物,与预期大小的β-防御素cBD1的分子质量相一致。Westernblot分析表明,表达产物与抗His标签鼠单克隆抗体发生反应,显示重组蛋白获得了表达。结果表明,成功表达的cBD1为新型抗菌制剂的研制奠定了试验基础。     

山羊STING和TBK1基因组织特异性表达和分布的研究

干扰素刺激基因(STING)和TANK结合激酶1(TBK1)是介导宿主Ⅰ型干扰素抗病毒应答的关键因子。为深入研究STING和TBK1在山羊天然免疫应答中的作用,采用RT-qPCR方法进行了STING和TBK1组织特异性表达检测,并进行了其组织分布的研究。由于物种差异较大,缺乏山羊STING的商品化抗体,本试验首先利用原核表达的STING蛋白制备了多克隆抗体。结果显示,利用原核表达的STING重组蛋白免疫新西兰大白兔后,经ELISA和Western-blot证明获得了特异性好的多克隆抗体。组织特异性表达检测结果显示,STING在肠系膜淋巴结、心脏和脾的相对表达水平较高,而TBK1在大脑、肝、心脏和肾的相对表达水平较高。免疫组织化学检测结果显示,在心肌细胞、肝细胞、淋巴细胞、细支气管上皮细胞、肾小管上皮细胞和大脑皮层神经元中均呈STING和TBK1阳性。研究结果为进一步探索STING和TBK1在山羊天然免疫应答中的作用提供了基础数据。     

猪链球菌1/2型的分离鉴定与致病性研究

为精准鉴定从贵州临床发病死亡猪分离到的疑似致病菌,通过形态学观察、革兰染色镜检、生化鉴定、种特异性PCR鉴定、血清型分型鉴定及毒力基因、小鼠致病性、耐药性检测,确定分离菌株为血清型1/2型猪链球菌,携带fbps⁺、mrp⁺、orf2⁺毒力基因,不具有gapdh、sly毒力基因,小鼠LD₅₀为2.0×10⁹CFU/m L,致病小鼠肺和肝可见明显病变,对氨基糖苷类、喹诺酮类、氯霉素类和大环内酯类等多种抗生素敏感。结果表明,贵州省猪群存在致病性猪链球菌1/2型感染。     

马β2-微球蛋白基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的高效表达与纯化

为了构建马MHCⅠ四聚体分子,从马外周血单核细胞(PBMC)中提取总RNA,采用RT-PCR技术对去除信号肽部分的2βm基因进行了扩增,将其RT-PCR产物经纯化、BamHⅠ XhoⅠ双酶切后与经同样处理的原核表达载体pET-28a( )进行连接,转化入感受态细胞BL21(DE3)。将筛选出的阳性克隆进行测序、诱导表达并将其表达产物进行纯化。结果表明,去除信号肽部分的马2βm基因全长300 bp,含有1个开放阅读框,编码一由99个氨基酸组成的成熟蛋白;表达产物以包涵体的形式存在,经SDS-PAGE和Western-blotting分析,重组蛋白的分子质量约为15 ku,且具有免疫生物学活性。     

Vero-2和MA-104细胞系染色体组型分析与致癌─致瘤性研究——在犬五联疫苗制备中替代BHK-21细胞系细胞株的筛选和检定

在用纯化３代的猫肾原代细胞（ＦＫＣ）和犬肾原代细胞（ＣＫＣ）皮下接种裸鼠无致癌致瘤性,以人类子宫颈癌细胞系（Ｈｅｌａ）超二倍体ＫＢ株、Ｘ株及超二倍体和亚四倍体ＮＭ２０／Ｘ株皮下接种裸鼠产生进行性恶性肿瘤比率分别为１０／１０,２５／２５和５／５的前提下,非洲绿猴肾细胞系亚二倍体（Ｖｅｒｏ２）ＪＣ株５～１９代和超二倍体ＹＡ株１２～１８代分别皮下接种２０和１０只裸鼠,均未产生肿瘤,恒河猴肾细胞系亚四倍体（ＭＡ１０４）ＪＣ株４代皮下接种５只裸鼠亦未产生肿瘤。不同株的Ｈｅｌａ和地鼠肾细胞系（ＢＨＫ２１）在３．３ｇ／Ｌ琼脂中均具有抛锚独立生长特性,并在终浓度３．１２５～２００ｍｇ／ｍＬ植物凝集素（ＰＨＡ）作用下出现凝集现象,而ＦＫＣ、ＣＫＣ及Ｖｅｒｏ２细胞系ＪＣ株、ＹＡ株既不具有抛锚独立生长特性,在不同浓度ＰＨＡ作用下也不发生凝集,符合非肿瘤源性细胞的特性。因此,Ｖｅｒｏ２细胞系ＪＣ株可用作病毒疫苗毒株的传代培养,而Ｖｅｒｏ２细胞系ＹＡ株和ＭＡ１０４细胞系ＪＣ株则不适宜。