细胞缝隙连接通讯在镉致大鼠肝细胞毒性损伤中的双重作用

为了探讨细胞缝隙连接通讯(GJIC)在镉致大鼠肝细胞损伤中的作用及α-硫辛酸(LA)的保护效应,本研究用2.5 mol/L醋酸镉(Cd)、50 mol/L LA、50 mol/L甘珀酸(CXB)处理大鼠肝细胞系BRL 3A细胞,采用显微镜观察细胞形态、CCK8法测定细胞相对存活率、试剂盒检测LDH漏出率、Western-blot法检测Bax、Bcl-2蛋白表达量、用Transwell建立细胞共培养系统、流式细胞术检测细胞凋亡率。结果显示,2.5 mol/L Cd能引起BRL 3A细胞相对存活率下降,LDH漏出率增加,Bax/Bcl-2比值升高,LA可部分缓解这些损害;GJIC抑制剂CBX可进一步加剧镉引起的细胞形态变化以及LDH漏出率的增加;在Transwell共培养系统中,CBX可有效降低镉暴露凋亡细胞诱导相邻正常细胞的凋亡率,而LA的保护作用不明显。上述结果表明GJIC在镉致大鼠肝细胞毒性损伤中具有双重作用。     

纳米氧化锌对奶牛小肠上皮细胞增殖及凋亡的影响

为研究纳米氧化锌(nano-ZnO)对奶牛小肠上皮细胞(BIECs)增殖及凋亡的影响,本实验选取初生犊牛P3代十二指肠上皮细胞为试验对象,向培养基中添加0(对照)、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8μg/mL不同浓度的nano-ZnO培养12 h后,通过倒置显微镜、CCK-8法检测细胞的生长状态和增殖活性;微量法检测LDH漏出量;DAPI荧光染色结合Image J图像测定分析nano-ZnO对BIECs凋亡的影响;实时荧光定量PCR对细胞凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax、Bcl-2 mRNA的表达进行测定。结果显示,与对照组相比,nano-ZnO低剂量各组(0.2、0.4、0.8μg/m L)细胞生长状态良好,核型正常,增殖活性增加,凋亡率无明显差异(P0.05),LDH漏出量无差异(P0.05);高剂量各组(1.6、3.2、6.4、12.8μg/m L)细胞皱缩变圆,密度减小,细胞核致密浓染、裂解,细胞增殖活性降低(P0.05),凋亡率明显升高(P0.05),LDH漏出量明显增加(P0.05);实验组基因Caspase-3、Caspase-8、Bcl-2的相对表达量与对照组相比随着nano-ZnO浓度的增加呈现先增加后下降的趋势,Caspase-9的表达量随着nano-ZnO浓度的增加先下降后升高再下降,Bax随着Nano-ZnO浓度的增加而下降(P0.05或P0.01)。结论:nano-ZnO低剂量组对BIECs的增殖有促进作用;高剂量组能够抑制BIECs增殖,促进细胞凋亡。     

ZEA和DON及其联合作用对小鼠T淋巴细胞Fas/FasL凋亡信号通路的影响

为揭示玉米赤霉烯酮(ZEA)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)及其联合作用免疫毒性的机理,试验研究了ZEA、DON及联合作用对刀豆蛋白A(Con A)刺激的小鼠离体T淋巴细胞细胞凋亡和Fas/FasL凋亡信号通路的影响。从BALB/c小鼠脾分离原代T淋巴细胞,分别设细胞空白组、刀豆蛋白A对照组(Con A组)、Con A+不同浓度ZEA染毒组、Con A+不同浓度DON染毒组、Con A+不同浓度ZEA与DON联合染毒组,染毒时间为24 h,利用流式细胞术检测细胞凋亡率,Western-blot检测Fas、FasL、Cleaved-caspase8、Bax、Bcl-2等关键蛋白表达情况。结果显示,与细胞空白组相比,Con A组细胞凋亡率上升但差异不显著(P0.05);与Con A组相比,各染毒组细胞凋亡率均上升,多组出现显著或极显著差异(P0.05或P0.01);联合处理组较单一毒素处理组细胞凋亡率升高,经CompuSyn软件拟合,ZEA和DON以20∶1联合作用时协同效应最为明显。Con A组与细胞空白组相比,Bax/Bal-2值显著降低(P0.05)、Fas、FasL、Cleaved-caspase8等蛋白的表达量无明显变化(P0.05);与Con A对照组相比,各染毒组Bax/Bal-2、Fas、FasL、Cleaved-caspase8等蛋白的表达量均上升,且呈剂量依赖性,多组出现显著或极显著差异(P0.05或P0.01);联合染毒组较单一染毒组各蛋白表达量均升高。结果表明, ZEA、DON均可通过Fas/FasL凋亡信号通路诱导T细胞的凋亡,ZEA与DON联合可发挥协同效应。     

硝基苯染毒致小鼠脑的毒性作用

为探讨硝基苯染毒致小鼠脑的毒性作用,用灌胃的方法对试验小鼠进行了硝基苯染毒,染毒剂量分别为26、52、105 mg/kg,每日染毒1次,共30 d.于末次染毒后第2 d将小鼠脱颈椎处死,立即取出脑,检测SOD和GSH-Px活性和MDA含量,并对其显微及超微结构进行了观察.结果,硝基苯对小鼠脑有明显的毒性作用,主要表现为大脑血管间隙扩大,周围神经纤维疏松;小脑、海马区部分浦肯野氏细胞核固缩、核溶解,锥体细胞核固缩;神经细胞肿胀,线粒体明显肿胀,粗面内质网形态扩张;大部分胶质细胞电子密度增加,胞核变小、核固缩,胞质内细胞器明显减少;有些神经纤维脱髓鞘,神经微丝溶解;随着染毒剂量的加大,MDA含量逐渐升高,CAT和SOD活性不断显著降低.结果表明,硝基苯可以通过氧化应激和诱发细胞凋亡对小鼠脑组织造成损伤.     

三氧化二砷对鸡马立克氏病肿瘤细胞凋亡的影响

研究了三氧化二砷(As2O3)对诱导鸡马立克氏病(MD)肿瘤细胞株MDCC-MSB1细胞凋亡相关基因Fas、Caspase-3 mRNA表达及Caspase-3活性的影响,进而探讨了As203诱导MD肿瘤细胞株凋亡的机制.以体外培养MDCC-MSB1为研究对象,经终浓度分别为0、2、4和8μmol/L的As2O3.作用48 h后,采用荧光显微镜观察细胞的形态学变化,DNA Ladder法检测细胞凋亡情况,RT-PCR方法检测Fas、Caspase3 mRNA的表达水平,试剂盒比色法检测Caspase-3活性的变化.结果表明,As2 O3能引起典型的凋亡形态学变化,并出现典型的DNA Ladder,同时Fas、Caspase-3 mRNA的表达水平和Caspase-3活性均增加,组间差异均极显著(P＜0.01),呈现剂量依赖性.证实 As2O3诱导鸡MD肿瘤细胞株MDCC-MSB1细胞凋亡是通过增加Fas、Caspase-3 mRNA的表达和提高Caspase-3活性来实现的.     

线粒体损伤在阿维菌素致体外培养神经细胞凋亡中的作用

通过体外培养王鸽脑神经细胞,并按终浓度0、2.5、5和10μg/L阿维菌素(AVM)染毒,培养24 h时,经透射电镜观察神经细胞超微结构,DNA断裂评价细胞凋亡,MTT法测定线粒体活性,酶标仪检测Caspase-3、Caspase-9活性,流式细胞术测定线粒体跨膜电位(Δψm),探讨线粒体损伤在AVM致体外培养神经细胞凋亡中的作用。结果显示,AVM可明显抑制神经细胞线粒体的活性,引起Δψm下降,Caspase-3和Caspase-9活性升高,神经细胞发生凋亡,存在明显的剂量效应关系。证实,线粒体损伤是AVM致体外培养神经细胞凋亡的机理之一。     

日粮中添加大豆抗原蛋白对断奶仔猪血清中IgG和IgE水平以及肠道ZO-1表达的影响

为了评价大豆抗原蛋白对断奶仔猪有无致敏作用及对肠紧密连接蛋白ZO-1表达的影响,选取70头24日龄断奶仔猪,随机将其分为7组,A组饲喂基础日粮,B组、C组、D组的饲粮中分别按仔猪初始体重添加500、2 000、5 000 mg/kg的β-伴大豆球蛋白,E组、F组、G组的饲粮中按仔猪初始体重分别添加500、2 000、5 000 mg/kg的大豆球蛋白,通过ELISA检测仔猪24及30日龄时血清中IgG及IgE的质量浓度,并于仔猪30日龄时,每组选取5头仔猪放血致死,采集小肠组织,通过免疫组化检测小肠紧密连接蛋白ZO-1的表达情况,并用实时荧光定量PCR测定ZO-1 m RNA的相对表达量。统计学分析结果表明,在仔猪日粮中添加大豆抗原蛋白能刺激断奶仔猪血清IgG和IgE的质量浓度升高(P0.01),小肠ZO-1蛋白表达和ZO-1 m RNA的相对表达量降低,且大豆抗原蛋白的添加剂量越多,ZO-1表达越低。上述结果表明,β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白能引起仔猪肠道过敏反应,损伤肠道紧密连接;β-伴大豆球蛋白的致敏作用大于大豆球蛋白。     

辛硫磷对大鼠肝细胞凋亡的影响

通过给大鼠肝细胞培养液中加入辛硫磷(染毒终浓度分别为3、10、30、100和300 μmol/L)染毒,于12、24 h后用流式细胞仪分别测定细胞凋亡率、细胞死亡率和细胞内活性氧(ROS)水平,并在扫描电镜和荧光显微镜下观察细胞凋亡情况,研究了辛硫磷对原代培养大鼠肝细胞凋亡的影响.结果显示,辛硫磷具有明显的细胞毒性,在3～100 μmol/L范围内随着染毒剂量的增大和染毒时间的延长,细胞死亡率、凋亡率和ROS水平显著升高,且发生了明显的细胞凋亡的形态学变化;但300 μmol/L辛硫磷培养24 h,肝细胞凋亡率和ROS水平下降,死亡率升高.表明辛硫磷对肝细胞有直接的毒性作用,并通过产生ROS诱导了肝细胞凋亡.     

硝酸镧对MDCC-MSB1细胞形态及细胞周期的影响

以体外培养的MDCC-MSB1细胞为研究对象,分剐经终浓度为0、8、32、64ìg/mL的硝酸镧作用24、48、72 h后,采用台盼蓝染色测定细胞活性,荧光显微镜观察细胞的形态学变化,流式细胞术测定细胞周期.研究了硝酸镧对鸡MD肿瘤细胞株MDCC-MSB1细胞形态及细胞周期的影响,进而探讨硝酸镧对MDCC-MSB1细胞的影响机制.结果表明,硝酸镧能够降低MDCC-MSB1的细胞活性,能够引起典型的凋亡形态学变化及细胞周期的改变,并呈现细胞凋亡的细胞型,变化均呈现时间-剂量效应.证实,一定浓度的硝酸镧具有诱导体外培养MDCC-MSB1细胞凋亡的作用.     

TLR4/MyD88通路在油酸促进BRL 3A细胞脂肪变性中的作用

为研究TLR4通路在油酸(oleic acid,OA)致BRL 3A细胞脂肪变性中的作用,用不同浓度的OA(0、1.2、1.8、2.4 mmol/L)处理BRL 3A细胞24 h,再用显微镜观察细胞损伤状况,DAPI染色观察细胞核形态,油红O染色观察脂滴生成量,甘油三脂(TG)试剂盒测定TG含量,Western-blot检测TLR4通路蛋白TLR4、My D88、TBK1的表达量。结果显示:与对照组相比,随着OA浓度增加,细胞损伤增加,细胞核变形、破碎、皱缩,呈一定的浓度梯度依赖性;细胞内脂滴生成量增加,TG含量显著增加(P0.05);与对照组相比,TLR4、My D88及TBK1的表达量随着OA浓度增加呈显著或极显著增加(P0.05或P0.01)。这表明油酸可能通过TLR4/My D88途径促进BRL 3A细胞发生脂肪变性。     

棕榈酸致BRL 3A细胞脂肪变性过程中对自噬和凋亡的影响

为了探讨自噬和凋亡在棕榈酸(PA)诱导BRL 3A细胞脂肪变性中的作用机制,以不同浓度(0、0.2、0.4、0.6 mmol/L)PA处理BRL 3A细胞24 h,用油红O染色观察其对脂滴生成的影响,试剂盒测定TG含量的变化,Western-blotting检测LC3Ⅱ、P62、Bax和Bcl2蛋白的表达情况,流式细胞术检测细胞凋亡率。Western-blotting检测0.4 mmol/L PA处理细胞不同时间(0、6、12、24 h)以及0.4 mmol/L PA与5 nmol/L Baf A1共处理时LC3Ⅱ和P62蛋白的表达情况,观察PA处理对BRL 3A细胞自噬流的影响。结果显示,0.4mmol/L PA作用BRL 3A细胞24 h对细胞增殖无显著影响,但细胞内产生脂滴较多;TG含量随PA浓度增加而显著增加(P0.05或P0.01);LC3Ⅱ和P62的蛋白表达水平随PA浓度增加而上升;与对照组相比,0.4 mmol/L PA处理BRL 3A细胞12 h时,LC3Ⅱ的表达水平上升(P0.05),P62的表达水平下降(P0.05),而处理24 h时LC3Ⅱ和P62的表达水平均上升;与对照组相比,0.4 mmol/L PA与5 nmol/L Baf A1单独处理组LC3Ⅱ、P62相对表达量均升高(P0.01);与Baf A1单独处理组相比,PA与Baf A1共处理组LC3Ⅱ、P62相对表达量进一步升高(P0.01);随着PA浓度增加,细胞凋亡率增加,Bax/Bcl2值逐渐增加。结果表明,0.4 mmol/L PA处理BRL 3A细胞24 h可成功诱导脂肪变性,处理12 h内可使自噬水平升高,而处理24 h可使细胞发生自噬流阻滞和凋亡增加。     

线粒体复合物与氧化应激在锰致鸡胚神经细胞凋亡中的作用

为探讨线粒体复合物及氧化应激在锰致体外培养鸡胚脑神经细胞凋亡中的作用,以体外培养的鸡胚脑神经元为研究对象,在含终浓度为0、1.5、2.0、2.5mmol/LMnCl2的DMEM培养液中培养24h,检测神经元内ROS和GSH含量、线粒体呼吸链复合物活性、细胞凋亡指数。结果显示,随着MnCl2浓度的增加,线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ均呈降低趋势,线粒体呼吸链复合物Ⅴ先升高后降低,细胞内ROS含量增加,GSH含量呈降低趋势,鸡胚脑神经元细胞凋亡指数增加,出现凋亡的形态学变化。表明MnCl2能抑制线粒体复合物活性,引起氧化应激,诱导鸡胚脑神经元发生凋亡。     

大鲵蛙病毒诱导的鲤鱼上皮瘤细胞凋亡的研究

为研究大鲵蛙病毒(Chinese giant salam ander ranavirus,CGSRV)对细胞凋亡的影响,以CGSRV感染鲤鱼上皮瘤(EPC)细胞,分别于感染后第0、3、6、9、12、15小时收集细胞,用倒置显微镜和透射电镜观察感染的EPC细胞的形态学变化,Annexin V-FITC/PI双染与JC-1染色后用流式细胞仪检测细胞凋亡率与线粒体膜电位(Δψm)崩解率。结果显示,EPC细胞在感染后第6小时出现细胞收缩变圆,脱落,漂浮于培养基中;电镜下,被感染的EPC细胞的细胞核出现典型的染色质边集呈月牙形和染色质浓缩形成凋亡小体的现象。流式细胞仪检测结果显示,感染后第3小时即出现凋亡率和线粒体膜电位崩解率显著上升,6 h后实验组各时间点凋亡率和线粒体膜电位崩解率都极显著地高于对照组(P0.01)。结果表明,CGSRV感染EPC细胞可通过线粒体途径诱导EPC细胞凋亡。     

17β-雌二醇对小鼠胸腺上皮细胞增殖和凋亡的影响

为探讨17β-雌二醇对小鼠胸腺上皮细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制,将小鼠胸腺上皮细胞系(MTEC1)细胞经不同浓度的17β-雌二醇处理24 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖活力的变化;流式细胞术检测细胞周期的变化;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况;DAPI染色法检测细胞核形态的变化;高通量测序技术获得差异基因表达谱并运用KEGG通路分析预测差异基因的作用通路;String基因互作分析差异基因的相互作用;实时荧光定量PCR验证p53通路相关基因的表达情况。结果显示,17β-雌二醇显著抑制MTEC1细胞的增殖活力,并呈浓度依赖性;使细胞周期出现G2/M期阻滞;能诱导MTEC1细胞凋亡,细胞核呈现不规则形态、核碎片、染色质凝聚和凋亡小体等典型的凋亡特征;KEGG通路分析显示,与细胞增殖和凋亡密切相关的p53信号通路呈极显著性差异;String基因互作分析显示,p53信号通路的相关基因互相作用,形成紧密联系的网络;p53信号通路的下游周期基因Cyclin B1表达下调,凋亡相关基因Trp53、Gadd45a、Fas、p21、Apaf1和Bax的表达水平显著上调。结果提示,雌激素可能通过p53信号通路对MTEC1细胞的增殖抑制、周期阻滞和细胞凋亡产生影响。     

功能性重组乳杆菌NC8-RLP对HUVEC细胞氧化应激损伤的抑制作用

为探究功能性重组乳杆菌NC8-RLP在缓解细胞内氧化应激损伤中的作用,首先构建氧化应激细胞模型,使用不同浓度的NC8-RLP作用细胞模型,通过MTT方法检测细胞的存活率和NC8-RLP毒性作用,观察细胞形态的变化;检测细胞模型内ROS含量的变化;采用Western-boltting检测NOX2、iNOS、Nrf2蛋白表达的情况。结果显示,成功建立氧化应激细胞模型OS-HUVEC,MTT结果发现NC8-RLP对HUVEC细胞无毒性作用,且具有一定的促进细胞增殖作用,同时可减少OS-HUVEC细胞凋亡。当NC8-RLP保护OS-HUVEC模型2 h后,细胞内的ROS含量降低,iNOS、NOX2蛋白表达量与阳性对照组相比明显减少,Nrf2蛋白表达量增加。说明NC8-RLP对缓解细胞内氧化应激损伤作用有很好的调控作用。     

FSH对仔猪睾丸支持细胞增殖和GDNF表达的调节

以原代培养的仔猪睾丸支持细胞(SC)为试验模型,研究了FSH对SC胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达及其增殖的影响。结果显示,外源性添加FSH可促进GDNF蛋白表达,而且这种促进作用具有浓度和时间依赖关系,GDNF蛋白水平随着FSH浓度的增加而升高,当FSH浓度为50 ng/mL时,GDNF水平达到最高,然后逐渐降低;FSH(50 ng/mL)作用30 min,可显著促进GDNF蛋白的表达(P<0.05),当FSH作用1 h时,GDNF蛋白水平达到最高,随后逐渐降低。FSH可以时间-剂量依赖性促进SC增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,FSH(50 ng/mL)作用30 min时,PCNA的表达显著增加(P<0.05),作用1 h达极显著水平(P<0.01),至2 h时,PCNA蛋白的表达水平达到最高,随后逐渐降低。提示,FSH可在体外条件下通过刺激SC表达GDNF进而促进其增殖。     

抗冷冻蛋白Ⅲ对玻璃化冷冻猪GV期卵母细胞及其DNA的保护作用

为了寻找冷冻液中最适合的抗冷冻蛋白Ⅲ（AFPⅢ）添加浓度,并探索AFPⅢ对玻璃化冷冻卵母细胞、活性氧（ROS）及其DNA损伤的保护作用进行评价。本研究分别在冷冻液中添加250、500、750、1 000、1 200 ng/m L AFPⅢ,通过冷冻液处理和冷冻-复苏筛选出最合适的AFPⅢ添加浓度,荧光探针检测卵母细胞中活性氧的含量,彗星电泳检测卵母细胞DNA的变化。结果显示,冷冻液中添加500 ng/m L AFPⅢ对玻璃化冷冻猪GV期卵母细胞的保护效果最佳;冷冻液中添加AFPⅢ的冷冻组ROS含量显著低于冷冻对照组（P<0.05）;添加AFPⅢ的冷冻组尾部DNA百分比（Tail DNA%）和Olive尾矩值（OTM）显著低于冷冻对照组（P<0.05）。结果表明,AFPⅢ可以提高玻璃化冷冻后卵母细胞的体外发育能力,降低冷冻-复苏后卵母细胞ROS含量,缓解玻璃化冷冻引起的卵母细胞DNA损伤。     

鹅胸腺细胞自然凋亡的电镜观察

应用透射电镜观察表明,鹅胸腺细胞发生凋亡时,细胞经历一系列的形态变化.其中,细胞核的变化最为明显,表现为染色质凝集、边集,呈现为新月形、C字形、花瓣状、圆环状或圆斑状.部分凋亡胸腺细胞可见线粒体轻度增生现象.至凋亡后期,胸腺细胞由其膜性结构分隔、包裹形成凋亡小体;最后,凋亡小体或凋亡细胞被巨噬细胞吞噬、清除.     

Fas/FasL信号通路在镉致PC12细胞凋亡中的作用及NAC的保护效应

为研究Fas/Fas L信号通路在镉致PC12细胞凋亡中的作用及N-乙酰半胱氨酸(NAC)的保护效应,本试验用10 mol/L醋酸镉和10 mg/L anti-Fas L抗体、40 mol/L Z-IETD-FMK、100 mol/L NAC单独或联合处理PC12细胞24 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡形态学变化,Western-blot法检测Fas、Fas L、FADD和cleaved caspase-8的蛋白表达量。结果,anti-Fas L抗体和Z-IETD-FMK极显著抑制镉致PC12细胞凋亡率升高(P0.01);NAC极显著抑制镉致PC12细胞凋亡形态学变化,Fas、Fas L、FADD和Cleaved caspase-8蛋白表达量的升高(P0.01)。上述结果说明,镉可通过Fas/Fas L信号通路诱导PC12细胞凋亡,NAC在镉致PC12细胞凋亡Fas/Fas L信号通路中具有保护作用。     

猴头菇多糖对氧化应激状态下猪小肠上皮细胞紧密连接相关基因表达的影响

为考察猴头菇多糖(HEP)对氧化应激状态下猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)的增殖和紧密连接(TJ)相关基因表达的影响,通过100 g/m L脂多糖(LPS)处理建立IPEC-J2细胞氧化应激模型,在预试验基础上选用125、250、500 g/m L不同质量浓度的HEP处理细胞2、4、8 h,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测其对正常及氧化应激的IPEC-J2细胞增殖的影响;选取其中最佳的HEP浓度,依上述方法处理细胞,实时荧光定量PCR法检测TJ相关的Occludin、Claudin及ZO-1基因m RNA表达的变化情况。结果显示,不同的HEP浓度和作用时间对正常细胞增殖均有显著影响(P0.05),对LPS诱导的细胞氧化应激均有缓解作用(P0.05);HEP的最佳质量浓度为250 g/m L、最佳作用时间为4 h;250 g/m L的HEP作用4、8 h均能显著提高氧化应激状态下,IPEC-J2细胞Occludin、Claudin和ZO-1基因的m RNA表达量(P0.05)。结果表明,HEP能够促进氧化应激状态下IPEC-J2细胞TJ相关基因的表达,缓解LPS诱导的氧化应激对IPEC-J2屏障功能的损伤。