牛霉形体PCR检测方法的建立

参考GenBank中牛霉形体和无乳霉形体P81基因的序列差异,设计了针对牛霉形体P81基因的PCR引物,建立了牛霉形体PCR检测方法.并对该方法进行了敏感性和特异性试验.该方法可以从100ccu/mL(ccu:color change unit,颜色变化单位)的牛霉形体培养物中检出目的片段;经对丝状霉形体丝状亚种SC型(MmmSC)PG1株、丝状霉形体丝状亚种LC型(MmmLC)Y-goat株、山羊霉形体山羊亚种(Mccp)87001株、无乳霉形体(M.agalactiae)PG2株、绵羊肺炎霉形体Y-98株等亲缘关系相近的霉形体纯培养物检测,结果证实该方法具有良好的特异性.利用建立的PCR检测方法可以从人工感染牛的鼻拭子和临床发病牛肺中扩增出目的片段,与分离培养结果完全符合,本方法为国内首次建立的敏感、特异、快速的牛霉形体PCR检测方法.     

霉形体及霉形体病研究进展

霉形体 (Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ)是软皮体纲 (Ｍｏｌｌｉｃｕｔｅｓ)霉形体目(Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｔａｌｅｓ)中的一类原核微生物[1] 。霉形体及霉形体病的研究 ,始于 1898年Ｎｏｃａｒｄ从牛传染性胸膜肺炎病灶中分离出该种病原体 ,至今已愈百年 ,但早期由于诸多因素 ,这方面的研究进展缓慢。 1962年Ｃｈａｎｏｃｋ及Ｈａｙｆｌｉｃｋ在人工培养基上分离肺炎霉形体获成功后 ,霉形体的研究得以迅速发展。资料报道 ,截至 2 0 0 0年分离出的霉形体达 160种 ,遍布世界各地[2 ,3 ] ,对人类及牛、羊、猪、鸡等的危害较大。同时实验动物及细胞培…     

牛乳房炎国际讨论会简介

1985年5月21～24日.在联邦德国的基尔市召开了牛乳房炎国际讨论会。会议由国际乳品业联盟(IDF)主持。这是继1975年在英国召开的第1次会议10年之后的又一次专门讨论牛乳房炎的国际性会议。 参加会议的有26个国家的260名代表,其中有主办国联邦德国35名,美国17名,英国15名,丹麦和瑞典各14名,挪威、荷兰及法国各10名,瑞士9名,芬兰和日本各7名,其他亚洲国家未参加。大会主席为联邦德国乳品研究所所长A.Tolle博士,秘书长为该所W.Heeschen教授。会议发表的主要论文15篇:①Kla-strup,O. (丹麦)定义和诊断;②Booth, T.M.(英国)散装牛奶中的细胞数测定;③Broluno, L(瑞典)个体牛的细胞数测定;④Schultze, W.D.(美国)乳房炎病原菌;⑤Brainlev, A.J(英国)乳房炎病原菌;⑥O′Shea, J.(爱尔兰)由挤奶器传播的病原菌;⑦Williams, D.M.(澳大利亚)由挤     

应用电导率诊断牛乳房炎

目前,乳房炎诊断多用化学和生物学的方法,应用物理的方法较少。近年来国外开展了电导率诊断牛乳房炎的研究,据报道,具有简便、迅速、准确的特点。但由于牛的品种、饲养条件、使用的仪器的不同,不同的学者划分电导率诊断牛乳房炎的阈值范围也各不相同。在国内虽然也有人做了这方面的研究,但未见系统报道。为此,我于1982年 9月,以日本PL-乳房炎诊断液和NaOH凝乳试验为对照,在北京长阳农场进行了本试验,以找出电导率诊断牛乳房炎的阈值范围。并对其准确率进行初步估计。     

鸡败血性霉形体病免疫述评

鸡败血性霉形体(Maycoplasma gallisepticum,简称MG)是鸡慢性呼吸道病(CRD)的病原菌。本病多发生于1～2个月龄鸡,主要侵害呼吸道粘膜,附着于表层细胞,由于毒素作用引起一系列病理变化。常出现浆液性、粘液性鼻漏,窦炎,结膜炎,气管炎和气囊炎等。临床表现为气管罗音、流鼻汁、咳嗽、食欲减退、体重减轻、产卵量下降、孵化率及成活率降低等。带菌状态雏鸡常由于活苗气雾免疫而造成大批死亡,表现为急性炎症过程。本病可经卵传染,是不易清除的主要原因。     

PCR检测鸡毒霉形体和鸡滑液囊霉形体的研究

根据禽霉形体 16SrRNA的基因序列设计、合成了 1对引物 ,用这对引物对鸡毒霉形体 (Mycoplasmagallisep ticum ,MG)和鸡滑液囊霉形体 (Mycoplasmasynoviae ,MS)菌株DNA进行PCR扩增 ,得到了与预期大小相一致的约 5 80bp的PCR产物 ,而这对引物对其他禽病病原DNA或RNA模板的扩增结果为阴性。PCR方法对MG和MS的最小检出量分别为 2 pg和 3pg。应用已建立的PCR方法检测MG人工感染样品和临床样品 ,从人工感染样品中均检测到MG ,临床样品的MG阳性检出率为 10 .2 5 % ,高于常规分离培养的阳性检出率     

应用聚合酶链反应检测鸡毒霉形体和滑液霉形体的研究

利用鸡毒霉形体（ＭＧ）与滑液霉形体（ＭＳ）基因一定区域互补的序列,合成能分别针对ＭＧ和ＭＳ目的基因的２对引物。用这２对引物对１０个国际标准的ＭＧ与ＭＳ菌株ＤＮＡ模板进行ＰＣＲ扩增,结果均得到与预期大小相一致的约７３２ｂｐ（ＭＧ）和２０７ｂｐ（ＭＳ）的ＰＣＲ产物。特异性试验结果表明,这２对引物对其它９种禽病病原ＤＮＡ或ＲＮＡ模板扩增均为阴性;敏感性试验结果显示,ＭＧＰＣＲ能检出１００ｆｇ的ＭＧＤＮＡ,ＭＳＰＣＲ检出量为１０ｆｇ的ＭＳＤＮＡ。     

禽类霉形体简介

霉形体原译作枝原体。禽类霉形体病是一种慢性呼吸道感染,其特征是咳嗽流鼻,窦部肿胀,呼吸困难,有气管罗音。 禽类霉形体主要以禽类作为宿主。早在1935年Nelson在检查鸡的慢性呼吸道病时,就发现了一种球杆菌样小体,当时由于种种原因而未能定论。直到六十年代初,随着分离培养技术的完善,霉形体的研究工作才得以迅速发展。国际霉形体学会专门设立了禽类毒形体研究组织,对禽类霉形体的研究起到了积极作用。目前,国内外有关霉形体的研究报告不少,但     

应用多重聚合酶链反应检测鸡毒霉形体和滑液霉形体的研究

根据鸡毒霉形体（ ＭＧ） 、滑液霉形体（ ＭＳ） 的基因文库,设计并合成了分别与ＭＧ、ＭＳ 某段基因序列互补的两对引物,用这两对引物进行多重聚合酶链反应（ ＭｕｌｔｉＰＣＲ） 同时检测ＭＧ 与ＭＳ。当样品中同时含有ＭＧ 和 ＭＳ 的目的模板ＤＮＡ 时,均同时得到２ 条大小与试验设计相符的７３２ ｂｐ（ ＭＧ） 和２０７ ｂｐ （ ＭＳ） 的ＰＣＲ 扩增带;而对其它８ 种禽病病原的扩增均为阴性。敏感性测定结果表明,该多重ＰＣＲ 技术最低能同时检出１００ ｆｇ 的ＭＧ、ＭＳ ＤＮＡ 模板量     

牛霉形体免疫相关性蛋白P51的筛选与鉴定

为了筛选免疫原性蛋白,建立牛霉形体的快速诊断方法,利用二维凝胶(2-D)电泳、Western-blot分析及蛋白质谱分析,筛选出一个免疫相关性蛋白P51。以牛霉形体中国分离株Hubei-1为模板,扩增了p51基因,并克隆到原核表达载体pET32a上。结果显示,重组蛋白pET32a-p51与牛霉形体阳性血清的Dot-blotting试验结果为阳性,而Western-blotting试验结果为阴性。以pET32a-p51重组蛋白为包被抗原的ELISA试验表明其能与自然感染和人工感染牛霉形体的阳性血清发生特异性反应,而与灭活疫苗免疫的阳性血清不发生特异性反应,与牛传染性胸膜肺炎的阳性血清没有交叉反应。表明P51可能是牛霉形体特有的一种构象依赖性免疫相关蛋白,是一种有前景的诊断用抗原。     

鸡感染鸡毒霉形体和滑液霉形体情况的调查

鸡毒霉形体感染和滑液霉形体感染是世界养鸡业中两种主要霉形体感染。毕丁仁(1984)自北京和南宁两地分离的49株鸡源霉形体中有27株是鸡毒霉形体,2株滑液霉形体,说明国内养鸡场中也存在着这个问题。但是国内这两种霉形体感染情况,却未见报道。作者在各兽医生物药厂监察室同志协助下,对来自20个省、市自治区的21个地区的鸡血清进行了血清学反应检测,对这种感染情况获得初步的数据。     

霉形体检测技术简介

霉形体 (Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ)是一类缺乏细胞壁的原核生物 ,最早分离自牛传染性胸膜肺炎病例 ,初称之为胸膜肺炎微生物 (ＰＰＬＯｓ)。在分类学上 ,霉形体属于原核生物界、软壁菌门、软膜体纲、霉形体目、霉形体科、霉形体属 ,在医学和兽医学上是一类重要的病原微生物 ,对人类及猪、牛、禽和试验动物等有广泛的致病性 ,主要侵害呼吸道和生殖道 ,还有关节、乳腺、眼部。霉形体个体微小 ,结构简单 ,无细胞壁 ,呈多形性形态 ,因而可通过细胞滤器。霉形体还常污染用于生产生物制剂的细胞或鸡胚 ,导致生物制剂品质下降或废弃 ,因此霉形体的检测…     

夏季乳房炎

夏季乳房炎是奶牛常发疾病之一,轻者往往失去泌乳能力,重者发生死亡。近年来有关文献报道逐渐增多,然而国内产科学文献多未详细介绍。现将国外一些文献概括归纳成本文以供参考。“夏季乳房炎”这个病名不统一,有的文献记载为“未经产牛乳房炎”,有的为“化脓棒状杆菌乳房炎”。     

猪霉形体肺炎的诊治

20 0 1年 7月 ,安徽省含山县某猪场暴发以喘气为特征的呼吸道传染病 ,发病率达 10 0 % ,致死率 3 3 %。根据临床症状、剖检变化及实验室检验 ,确诊为猪霉形体肺炎。1　发病情况该猪场曾于 2 0 0 1年 5月上旬先后 2次购进育肥猪 12 5头 ,2 0 0 1年 6月上旬接种猪瘟、猪丹毒、猪肺疫三联疫苗。 2 0 0 1年7月中旬其中一圈的 10头育肥猪出现咳嗽症状 ,继而整个猪舍的育肥猪全部发病。2　临床症状病猪食欲不振 ,日渐消瘦 ,体温升至 40℃。呼吸增快 ,呈腹式呼吸 ,有的张口呼吸。随着病情逐渐加重 ,出现痉挛性咳嗽 ,口、鼻流黏性和脓性鼻液 ,死亡猪…     

羊肺炎霉形体病调查

1992年在西北某地区的3个县10个牧场,对2160余只羊进行了羊肺炎霉形体病的调查,血清样品673份,检出阳性101份,阳性率为16％;并从发病地区羊群采集的2例山羊和1份鼻拭子病料中分离到3株霉形体。经系统鉴定和人工感染试验确诊为羊肺炎霉形体(M.ovipneumonia)。     

败血霉形体引起鸡腹水

1987年8～12月,在本市一新建肉鸡场发生败血霉形体感染,发病肉仔鸡除具有慢性呼吸道症状外,并伴发腹腔积水。 (一)病况及症状 第一批2205只红宝雏鸡进场后,按常规在饮水中加高锰酸钾,饲料中加入土霉素、磺胺类及痢特灵等抗菌药,但雏鸡每天仍不断死亡,最高死亡率为2.46％,     

卡那霉素治疗鸡霉形体病

鸡霉形体病是由败血霉形体引起的一种慢性呼吸道传染性疾病，笔者用卡那霉素治疗，收到满意效果。临床症状初期流浆性或粘液性鼻液，常甩鼻、打喷嚏；鼻液增多时病鸡呼吸困难，张口呼吸、咳嗽和发出罗音；鸡冠、肉髯发紫；以后减食或不食。部分病鸡初期流泪，继而眼睑肿胀...     

DNA荧光染色法检测霉形体

ＤＮＡ荧光染色法检测霉形体韩国珍，王巧全，胡永强（上海动植物检疫局２０００３２）细胞培养中霉形体污染现象是相当普遍的，不但影响细胞的生长，而且引起细胞病变，改变细胞的生物学特性。因此，在细胞培养中一方面要采取措施严格控制污染，另一方面对细胞特别是对引...     

羊霉形体肺炎的防治

华池县九窑口羊场位于子午岭地带的山庄乡 ,地处丘陵沟壑区 ,林草茂密 ,气候寒冷 ,以阴湿寒冷为特征 ,是羊霉形体肺炎感染发病的重点疫区。羊场建于 1989年 ,到 1994年的 6ａ间 ,羊霉形体肺炎发病累计 1146只 ,年均发病率为 3 3 .6%,死亡 3 3 6只 ,死亡率为 2 9.3 %。　　据 1994年对该羊场附近的 10个养羊户羊霉形体肺炎的发病情况调查结果 :共养羊 85 5只 ,发病羊 2 97只 ,发病率为3 4 .7%;死亡 88只 ,病死率为 2 9.6%。本病在当地流行多年 ,对当地养羊业危害十分严重。1　发病因素1.1　季节性　羊感染本病无严格的季节性 ,冬春枯草季节由…     

早期感染霉形体、腔上囊炎病毒导致仔鸡爆发新城疫的调查

以CH10×100倍镜检单纯性败血性霉形体病(MG)雏鸡的腔上囊组织,观察到柱状细胞、杯状细胞萎缩、网状细胞坏死、出现空斑痕,淋巴滤泡坏死、异型细胞浸润,淋巴细胞轮廓模糊、核溶解。由此证明腔上囊不单纯是传染性腔上囊炎病毒(IBDV)侵害的靶器官,也是MG侵害的靶器官。由于早期感染MG、IBDV损伤了腔上囊组织,分泌激素功能降低,应答免疫效应微弱,造成肉仔鸡新城疫(ND)抗体参差不齐,诱发新城疫的问题在现地养鸡场已经十分严重。