宁夏鸡隐孢子虫病调查及人工感染试验

１９９４年８月至１９９６年１０月，对宁夏回族自治区银南、银北、固原３地区１２县（市）５４个鸡场共计４５９０４只鸡进行了隐孢子虫感染情况抽样调查。结果，隐孢子虫阳性率达３６．８１％（２１２／５７６），其中蛋用鸡阳性率为３７．５３％（１４０／３７３），肉用鸡阳性率为３６．２３％（５０／１３８），差异不显著（Ｐ＞０．０５）；银南、银北、固原三地区阳性率分别为５４．５５％（６／１１），４１．９４％（１９５／４６５）和１１．００％（１１／１００），银南地区感染率显著高于固原地区（Ｐ＜０．０１）。用从自然感染鸡中收集的隐孢子虫卵囊人工感染雏鸡９批次，感染鸡排卵潜伏期３～１３ｄ，平均７ｄ；排卵持续期１４～３４ｄ，平均２４ｄ；其症状与自然病例相似。通过卵囊形态学鉴定，认为宁夏鸡感染的隐孢子虫属贝氏隐孢子虫（Ｃｒｙｐｔｏｓｏｐｏｒｉｄｉｕｍｂａｉｌｅｙｉ）。     

湖南省牛的隐孢子虫病调查及小鼠感染试验

对湖南省８个县（市）的２９６头奶牛、１７７头水牛及１２头黄牛进行了隐孢子虫病的调查。发现６个县（市）的牛有隐孢子虫的感染。奶牛感染率为５．３％～２８．８％，其中某牧场１岁以下犊牛的感染率（４６．７％）高于１岁以上午（２３．９％），３、４月龄犊牛的感染率（分别为１００％和６０％）高于４月龄以上的犊牛；水牛感染率为６．６％～４０％；黄牛中未发现隐孢子虫感染。以牛粪中分离出的隐孢子虫卵囊人工感染小鼠成功，从而证实牛的隐孢子虫在同一宿主纲内不具有宿主特异性。     

郑州地区犬隐孢子虫病流行病学调查及动物感染试验

用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法对采自犬养殖场、郑州郊区宠物市场、实验动物房、宠物医院以及郑州郊县农村的309份犬粪便样品进行了隐孢子虫感染情况调查,同时用幼犬和SCID小鼠进行了人工感染试验。结果显示,隐孢子虫平均感染率为2.59%(8/309);犬养殖场、郑州郊县农村和实验动物房犬的隐孢子虫感染率分别为0.56%(1/179)、10.53%(2/19)、16.67%(5/30),而宠物市场、宠物医院的被调查犬未发现隐孢子虫感染。所查到的8份隐孢子虫阳性样品有6份来自1~3月龄的幼犬,表明幼犬更容易感染隐孢子虫。动物感染试验表明,犬源隐孢子虫不感染SCID小鼠和2月龄非免疫抑制幼犬,但能感染免疫抑制幼犬。组织切片用HE染色观察的结果显示,犬源隐孢子虫主要寄生在幼犬的十二指肠和空肠。根据卵囊形态大小和动物感染试验结果,将从犬分离的隐孢子虫初步鉴定为犬隐孢子虫。     

牛隐孢子虫病人工病例与自然病例的比较试验

对来自西安地区不同奶牛场的９头腹泻病牛经临床观察、病理剖检，并从肠道粪便中分离到隐孢子虫。用分离到的虫株接种新生健康犊牛２头。人工感染犊牛均发病并表现出比较典型的隐孢子虫病症状；对人工感染病犊做粪便卵囊再分离和病理学检查，不但重新分离到隐孢子虫，而且可见小肠粘膜上皮细胞坏死脱落，固有层裸露，毛细血管扩张、充血、出血，肠隐窝处含有隐孢子虫，粘膜下层炎性细胞浸润；肠粘膜压片染色镜检亦看到隐孢子虫。试验结果发现人工病例与自然病例所测指标相似，进一步证明西安地区犊牛腹泻是以牛隐孢子虫为主要病原的疫病     

四川麻鸭隐孢子虫病的调查

笔者在四川省永川县、泸县、荣昌县的6群2月龄左右的鸭群中发现有4群感染隐孢子虫。用所收集的鸭隐孢子虫卵囊进行人工经口感染7只1月龄雏鸭,感染后第8～9天开始从粪便中排出大量卵囊,持续排卵囊期约为12天。感染后13天开始,分期扑杀动物,取其气管、各段肠道、法氏囊进行组织学检查,发现法氏囊有大量隐孢子虫寄生。引起法氏囊粘膜不同程度的变性、坏死、萎缩及上皮细胞脱落;电镜扫描观察发现法氏囊粘膜上皮细胞膜下有大量不同发育阶段的虫体,形成大小不同的颗粒状突起,引起上皮细胞的损伤,从而初步证明鸭隐孢子虫对麻鸭有一定的致病性。     

牛隐孢子虫和隐孢子虫病的研究进展

从牛隐孢子虫病的病原分类、内生发育史、体液免疫和细胞免疫、流行病学特点、诊断、防治等几方面阐述了牛隐孢子虫和隐孢子虫病的研究现状,总结了前人对牛隐孢子虫3个有效种的生物学特性研究的结果,为进一步了解牛隐孢子虫病的流行病学及有效防制该病提供了参考。     

南京地区犊牛隐孢子虫感染情况调查

以南京地区3个奶牛场的55头6月龄以内的犊牛为调查对象,在16头犊牛的粪便中查到隐孢子虫卵囊,平均感染率为29.1%(16/55).A、B 2个奶牛场犊牛的感染率(分别是40.0%和35.7%)高于C场犊牛的感染率(19.2%),但3个奶牛场感染率的统计学差异不显著(P＞0,05).各奶牛场1～3月龄犊牛隐孢子虫的感染强度和感染率均比4～6月龄犊牛高(P<0.05).     

湖南省部分地区禽隐孢子虫感染情况调查

从湖南省长沙、益阳、常德3市6个鸡场的436只鸡,2个鸭场的160只鸭,2个鸽场的32只鸽,1个鹌鹑场的30只鹌鹑采粪样检查.结果,3个市的鸡和鸭均有隐孢子虫感染,感染率分别为4.59%和3.75%.其中2～18周龄鸡的感染率为7.14%,25～60周龄鸡的感染率为1.51%;AA鸡、伊莎鸡和艾维茵鸡的感染率分别为5.56%、5.21%和3.33%.罗曼鸡、长沙黄鸡为阴性.鸽和鹌鹑未查到隐孢子虫.剖检20只隐孢子虫阳性鸡,取盲肠、腔上囊、小肠前段和中段、气管粘膜涂片镜检,感染隐孢子虫的标本分别占所检标本数为85.00%、40.00%、45.00%和0.     

河南省绵羊隐孢子虫病的流行病学调查

为获得河南省绵羊隐孢子虫的流行病学资料,应用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法对河南省4个地区的5个羊场共1701份绵羊粪样进行了检测,并对绵羊隐孢子虫感染的风险因素进行了评估.结果表明,查出隐孢子虫阳性样品80份,总阳性率为4.70%,3周龄羔羊和产后3周母羊的感染率最高,分别为41.18%和6.29%.根据隐孢子虫卵囊的形态学数值分析结果,将发现于绵羊的隐孢子虫卵囊初步鉴定为微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫.同时发现绵羊隐孢子虫感染存在年龄差异,但未见明显的季节性变化.     

河南省鹌鹑隐孢子虫病的流行病学调查

为进一步掌握河南省鹌鹑隐孢子虫病的流行状况,于2006年9月至2007年8月对河南省鹌鹑养殖量较大的5个地市47个鹌鹑养殖场(户)进行了调查.共采集1 818份粪样,经饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法检查,隐孢子虫感染率为13.15%(239/1 818).根据形态学特征,将分离到的2种隐孢子虫鉴定为贝氏隐孢子虫和火鸡隐孢子虫.调查结果表明,河南省不同品种鹌鹑之间隐孢子虫的感染率差异不显著,但鹌鹑隐孢子虫的感染率具有一定的地区、季节及年龄差异.     

鸡衣原体病的调查研究——病原学与人工感染试验

本研究从患有纤维素性心包炎、气囊炎、肝周炎、腹膜炎和脾肿大的病死鸡中分离到3株衣原体(JLC-3、JLC-5和JLC-6株)。该分离物接种7日龄鸡胚卵黄囊能致鸟胚在96～120小时内规律性死亡。剖检死亡鸡胚可见明显的病变,卵黄囊膜涂片镜检能观察到大量原生小体;交叉补体结合试验证明,该分离物能与标准衣原体补体结合试验抗原和阳性血清发生交叉反应,具有抗原相关性;对磺胺嘧啶的具有抵抗力;碘染不着色;对鸡胚的致死毒价为10~(11)ELD50/0.4ml;静脉途径接种小鼠后产生毒素,在24～48小时内致死小鼠; 经提纯后在电镜下能观察到衣原体的原生小体和始体。以上结果表明所分离到的衣原体为鹦鹉热衣原体(Chlamydia ps-ittaci)。将该分离物分别以腹腔、滴鼻、口腔途径接种7日龄雏鸡,并接种生理盐水作为对照,结果腹腔和滴鼻途径接种能复制出与自然发病相同的病例。     

广东省乳牛隐孢子虫病的流行病学调查

对广东省 10个奶牛场进行了隐孢子虫病的流行病学调查 ,并按大致 10 %的采样率采集了 10 87头乳牛的新鲜粪便 ,以饱和蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法检查隐孢子虫卵囊 ,其中检出卵囊的阳性牛 92头 ,阳性率为 8.4 6 % ;有 7个场检出隐孢子虫卵囊 ,场阳性率为 70 %。这 7个奶牛场的卵囊阳性检出率分别是 10 .0 0 %、7.19%、6 .6 7%、9.80 %、6 .72 %、12 .76 %和 6 .72 %。调查发现 ,乳牛隐孢子虫的阳性率和感染强度与乳牛年龄呈负相关关系 ,而且可能与气候有关 ;所检出的隐孢子虫卵囊经形态学鉴定为鼠隐孢子虫 (Cryptosporidiummuris)。     

广西奶牛隐孢子虫病的流行病学调查

为了调查广西奶牛隐孢子虫病的流行情况,采用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法对广西9个奶牛场和4个奶牛个体养殖户的1 612头份粪样进行隐孢子虫卵囊的检测,并以基于18SrRNA基因的PCR-RFLP技术对分离的隐孢子虫卵囊进行种类鉴定。结果显示,7个奶牛场发现存在隐孢子虫感染,隐孢子虫阳性粪样为189头份,总感染率为11.72%(189/1 612)。在感染的年龄段上,1～6月龄犊牛的隐孢子虫感染率为21.3%,显著高于7～12月龄的青年牛(9.6%)和大于1岁龄的成年牛(3.8%)(P<0.01)。感染季节以冬季感染较高,但与夏季感染结果相比差异不显著(P>0.05)。PCR-RFLP分析显示,分离的7个隐孢子虫株均为安氏隐孢子虫。调查表明,广西奶牛隐孢子虫虫株以安氏隐孢子虫为主,感染率与河南、江苏、安徽、吉林等省份相似。     

河南省部分地区乳牛隐孢子虫病的流行病学调查

为进一步掌握乳牛隐孢子虫病在河南省的流行动态,从河南省郑州、开封、济源和鹤壁4个地区9个奶牛场采集12月龄以内的乳牛粪便样品582份,用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法进行检测.结果显示,隐孢子虫总感染率为26.12%(152/582).其中,断乳前犊牛(5日龄至2月龄)隐孢子虫感染率为30.91%(51/165),断乳后犊牛(3～12月龄)感染率为24.22%(101/417).依据形态数值初步鉴定为2种隐孢子虫,即微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫.微小隐孢子虫在断乳前犊牛阳性样品中的比率为50.98%(26/51),在断乳后乳牛阳性样品中的比率为9.90%(10/101).另外,饲养方式(断乳前犊牛单独隔离饲养和未隔离饲养)对断乳前犊牛2种隐孢子虫的感染率有显著影响.     

隐孢子虫病抗体治疗的研究进展

从超免疫初乳、超免疫血清、超免疫卵黄和单克隆抗体几个方面概述了国内外隐孢子虫病抗体治疗的研究现状,并介绍了预防隐孢子虫病疫苗的研究成果,为进一步防治该病提供了参考.     

红河州鸡衣原体病的研究——病原分离鉴定和人工感染试验

从采自发病或死亡小鸡的肝、脾、肺和腹水等病料中分离到４株衣原体。将分离物接种７日龄鸡胚卵黄囊，能致鸡胚规律性死亡；该分离株对磺胺嘧啶（ＳＤ）具有抵抗力，碘染色不着色，鉴定为鹦鹉热衣原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｐｓｉｔａｃｉ）；毒力测定对鸡胚致死毒价为１０－１０ＥＬＤ５０／０．４ｍｌ。用该分离株对健康小雏做人工感染试验，可发生与自然病例相同的症状和病理变化。同时对分离毒株形态特征进行了电镜观察     

微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫SYBR Green real time PCR检测方法的建立

根据GenBank中登录的隐孢子虫小亚基rRNA基因序列设计1对引物,并以标准基因组DNA为模板,初步建立了检测乳牛微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫的SYBR Green real time PCR方法,并对乳牛微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫阳性样品和上海40份乳牛粪便进行了检测.结果表明,此次建立的real timePCR对微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫均能扩增出曲线,且其他寄生虫(鸡贝氏隐孢子虫、刚地弓形虫、犬新孢子虫)和大肠杆菌均未检测到;标准基因组DNA的检测阈值达到5个拷贝,牛粪中卵囊的最低检测量为每克粪便5个卵囊,乳牛粪便阳性率为15%(6/40).表明,建立的荧光定量PCR快速、特异、敏感,可用于乳牛隐孢子虫病的流行病学调查.     

隐孢子虫病的诊断研究——隐孢子虫卵囊染色标本光镜检查

用5种不同染色方法对病牛粪便涂片染色,藉助卵囊和标本背景染成不同的颜色进行形态观察与鉴别诊断。试验结果,抗酸和Giemsa染色方法较好;负染法可作为大量粪样检查时初筛标本使用。     

贝氏隐孢子虫在鹌鹑与鸡体内发育比较的研究

本研究表明,鹌鹑是贝氏隐孢子虫的新宿主。贝氏隐孢子虫在鹌鹑体内和鸡体内的发育过程基本相同,潜在期均为3天,开放期分别为4～14天和4～24天,虫体的主要寄生部位为法氏囊、泄殖腔和呼吸道,发育的基本过程为3代裂殖生殖、配子生殖和孢子生殖,很少见到薄壁型卵囊。虫体形态大小在二者体内无差别,首次出现时间差别不大。经口感染,贝氏隐孢子虫可引起鹌鹑的发病与死亡,发病率为13.3％,病死率为100％,病程为2～3天。发病后主要表现为伸颈、张口呼吸和翅下垂。剖检可见气管粘膜水肿、粘液增多。H.E.染色可见气管粘膜表面有大量嗜碱性虫体,有时有大量细菌寄生;轻者粘膜上皮细胞纤毛消失,重者粘膜上皮脱落;固有层充血水肿。嗉囊注射接种表明,贝氏隐孢子虫在鹌鹑体内不存在从消化道向气管的移行。     

用蔗糖密度梯度离心法纯化小球隐孢子虫卵囊试验

用蔗糖密度梯度离心法从接种犊牛粪便中纯化小球隐孢子虫卵囊,该方法操作简便、快速、经济、获得的卵囊纯度高,回收率达92.0%,适合于国内普通实验室使用.