抗链球菌溶血素O微量法在兽医临床上的应用

为了在家畜风湿病与类似疾患之间找到一种比较可靠的实验室鉴别诊断的方法,并了解A族溶血性链球菌对家畜的致病作用,我们采用微量测定法对家畜机体感染了溶血性链球菌后,体内产生的相应的抗链球菌溶血素O(ASO)抗体进行了测定,为马、牛溶血性链球菌疾病的诊断提供了数据。     

实验家兔血清中溶菌酶的测定

实验家兔血清中溶菌酶的测定谢秩勋，李素，朱国标（解放军成都军区总医院６１００８３）对纯种家兔血清、尿液、关节液和泪液等生物体液中溶菌酶活性的测定，可作为对风湿病、眼病、肾脏等疾病的诊断依据。目前，对于纯种兔等动物血清及体液中溶菌酶活性测定尚未见有关文...     

骨营养不良乳牛血清钙及血清游离羟脯氨酸含量测定

应用改良Fujii氏光电比色法和EDTANa2 滴定法对 88头乳牛进行血清钙、游离羟脯氨酸检测。结果表明 :有明显或轻微骨营养不良临床症状的乳牛 (以下称病牛 )与临床检查无骨营养不良症状的乳牛 (以下称对照牛 )比较 ,病牛的血清钙高于对照牛 (P <0 .0 5 ) ;血清游离羟脯氨酸亦明显高于对照牛 (P <0 .0 1)。因此 ,血清钙升高可作为乳牛骨营养不良诊断的参考指标 ,而血清游离羟脯氨酸升高是乳牛骨营养不良早期诊断的指标     

大熊猫血清溶菌酶的平板测定法

对大熊猫血清、尿液、关节滑液和泪液等生物体液中溶菌酶测定,可作为对其风湿病、眼病、肾病等疾病的诊断依据。我们经过多次实验,初步建立了一种适宜于大熊猫血清溶菌酶测定方法,为大     

电子计算机处理ELISA数据诊断牛蓝舌病

酶联免疫吸附试验(ELISA)已被广泛地应用于检查人和动物血清中特异性抗体。用间接ELISA诊断牛血清中蓝舌病病毒(BTV)的组特异性抗体已有报道,并认为是一种敏感、实用的方法。     

牛霉形体免疫相关性蛋白P51的筛选与鉴定

为了筛选免疫原性蛋白,建立牛霉形体的快速诊断方法,利用二维凝胶(2-D)电泳、Western-blot分析及蛋白质谱分析,筛选出一个免疫相关性蛋白P51。以牛霉形体中国分离株Hubei-1为模板,扩增了p51基因,并克隆到原核表达载体pET32a上。结果显示,重组蛋白pET32a-p51与牛霉形体阳性血清的Dot-blotting试验结果为阳性,而Western-blotting试验结果为阴性。以pET32a-p51重组蛋白为包被抗原的ELISA试验表明其能与自然感染和人工感染牛霉形体的阳性血清发生特异性反应,而与灭活疫苗免疫的阳性血清不发生特异性反应,与牛传染性胸膜肺炎的阳性血清没有交叉反应。表明P51可能是牛霉形体特有的一种构象依赖性免疫相关蛋白,是一种有前景的诊断用抗原。     

牛传染性鼻气管炎抗体的纳米胶体金斑点免疫渗滤法检测

将无血清细胞培养的牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)抗原包被于硝酸纤维素膜,加入待检血清样品后,利用纳米胶体金标记的山羊抗牛IgG显色,建立了检测IBR抗体的纳米胶体金斑点免疫渗滤法检测试纸盒。整个试验过程仅需5min即可判断结果,与蓝舌病、牛赤羽病、牛地方流行性白血病、牛病毒性腹泻黏膜病、猪瘟、猪伪狂犬病和猪细小病毒病的阳性血清不发生交叉反应。将该法与用于IBR抗体检测的ELISA方法同时对300份临床牛血清样品进行IBR抗体检测,结果二者的阳性符合率达94.4%。结果表明,该法具有特异、敏感、快速可靠、效果直观、结果容易判断的特点,非常适用于IBR的早期诊断和流行病学调查。     

牛隐孢子虫病的研究——免疫琼脂扩散试验

采用蔗糖不同密度梯度离心分离牛隐孢子虫卵囊,超声波加冻融裂解,制备可溶性和颗粒抗原,与参考阳性血清和免疫家兔血清呈阳性反应;与参考阴性血清和从非疫区采集的30份犊牛血清呈阴性反应;对牛焦虫病血清、球虫病血清、轮状病毒性肠炎血清均无交叉反应;对被检测的96份自然感染隐孢子虫犊牛血清阳性检出率为81.25％;对42份实验感染隐孢子虫雏鸡血清阳性检出率为78.57％。初步证明用免疫琼脂扩散试验诊断牛隐孢子虫病是可行的。     

斑点酶联SPA诊断动物血吸虫病的研究

应用斑点酶联SPA(Dot-PPA-ELISA)和间接血凝试验(IHA)对188头份黄牛血吸虫病血清及275头份兔血吸虫病血清样品进行了对比,结果,该两种诊断方法都能测出人工感染4周以上的病畜抗体,其阴阳性符合率均达100％,能作到早期诊断。Dot-PPA-ELISA和IHA对5头人工感染血吸虫病牛治疗后50份血清的测定结果,前者在治疗后8～10个月抗体消失,而后者除1头牛血凝价从160倍降到20倍外,其余4头牛在治疗后7～9个月抗体消失。初步认为Dot-PPA-ELISA作为牛血吸虫病诊断及疗效考核方法是可行的。     

动物病原性大肠杆菌与大肠杆菌病

大肠杆菌是人和动物肠道的正常寄居菌,但也能够引起疾病。在自然界中,存在着大量的大肠杆菌血清群,而这些疾病仅和相对少量的血清群有关。这些血清群菌株倾向于宿主特异性,如引起新生犊牛腹泻的大肠杆菌,通常不同于牛败血症大肠杆菌;在猪肠道病中发现的大肠杆菌,很少在牛、羊、家禽中遇到。当然也有一些例外,现在已为大家所知的O_(78)K_(80)菌株,经常从患大肠杆菌败血症的禽、牛和羔羊中分离到,但很少在猪中发现。大肠杆     

中西结合治疗马、牛、猪风湿病的报告

中兽医把风湿病叫作痛风,或叫传经痛。我省民间一般都叫“传”。风湿病的发病原因尚有争论,中兽医认为是因外受风寒湿邪的侵袭,使气血凝滞经络,引起四肢轮流疼痛的一种疾病。 此病在我省最为常见,据我院兽医院1969年门诊病例统计,占马、牛外科疾病的53.5％,     

牛病毒性腹泻——粘膜病Oregon C_(24)V弱毒株的研究

牛病毒性腹泻——粘膜病(BVD/MD)自1946年在美国发现以来,世界许多国都证明有此病的发生和流行,几乎遍及所有养牛业国家,是一种全球性的牛的传染病。 对于本病的诊断和防制,各国进行了大量的研究。1981年初,我们在农业部动检所、上海动植物检疫所的协作下,探索出了病毒-血清中和试验的血清学诊断方法,以OregonC_(24)V做抗原,采用这种方法对从新西兰进口的680头绵羊进行了检疫,查出血清抗体阳性羊占被检羊的47％。同年6月和1982年底,以同样方法对北京和四川送检的黑白花奶牛和牦牛血清     

大熊猫溶菌酶测定方法的探讨

血清、尿液、关节滑液及泪液等体液中溶菌酶的测定,可作为对大熊猫风湿病、眼病、肾脏等疾病的诊断依据。我们在制板、微球菌筛选、孵育时间及缓冲液中是否加NaCl等测定方法上作了一些探讨,初步建立了一种适宜于大熊猫溶菌酶测定法,为抢救国宝大熊猫提出了有效的实验指标,对大熊猫免疫功能的研究积累了资料。     

牛支原体P48蛋白的表达及间接血凝检测方法的建立与应用

优化并合成牛支原体的p48基因,将其克隆到pET-32a(+)表达载体上后,转化大肠杆菌BL21(DE3),16℃低温诱导表达,获得可溶性表达的大小约66ku的重组P48蛋白。将纯化后的重组P48蛋白致敏戊二醛和鞣酸处理过的绵羊红细胞,建立了检测牛支原体抗体的间接血凝试验。重组P48蛋白致敏红细胞的最佳质量浓度是20~40μg/mL,牛支原体超免疫血清抗体效价达1∶2 048~1∶4 096。该方法对牛肺疫、牛巴氏杆菌病、牛病毒性腹泻病、布氏杆菌病、结核病、口蹄疫、牛生殖道支原体感染、里奇氏支原体感染、大肠杆菌病阳性血清的检测结果均为阴性。该方法的特异性为100%,敏感性为93.33%。与国外商品化的牛支原体ELISA试剂盒相比,平均符合率为96.15%。对833份田间血清和1 084份乳清进行检测,阳性率分别是15.37%和19.56%。结果表明,该方法敏感性高、特异性强和重复性好,可用于牛支原体抗体水平检测、牛支原体病的辅助诊断和流行病学调查。     

乳牛酮血症PFn水平动态变化

血浆纤维蛋白连结素(Plasma Fibronectin,PFn)是一簇存在于血液及各型细胞表面,为一组多功能的非免疫性高分子糖蛋白,由多种细胞合成与分泌,具有诱导细胞分泌,连结细胞和间质,参与血液凝固和机体防御等功能,PFn含量的改变与多种疾病有关。本文旨在通过牛酮血病的PFn检测,探讨对该病的价值。 (一)材料与方法 1.病例选择:10例病牛经临床和乳酮体检测确定酮血病,为北京奶牛场提供。 2.对照牛:北京奶牛场健康奶牛10头。     

用牛指状丝虫成虫抗原诊断人和动物丝虫病

国外有用蟠尾丝虫、指状丝虫、棘唇丝虫、犬恶丝虫、唇乳突丝虫等进行人丝虫病抗体检测和用棉鼠丝虫检测犬恶丝虫、鹿腹腔丝虫的报道,说明丝虫都有共同抗原部分。70年代国内医学界运用动物异种抗原诊断人丝虫病,认为用犬恶丝虫抗原皮试,进行人丝虫病普查是可行的。国内外在研究人丝虫病的异种抗原中,亦将牛指状丝虫作为诊断人丝虫病的一个重要的异种抗原来源进行研究,但迄今国内还未见有用一种丝虫抗原对人和动物的丝虫病进行免疫诊断的研究报道。本试验在国内初步报道了用牛腹腔指状丝虫作为诊断抗原以2种生化技术对人和犬、牛、猴、兔丝虫抗体的测试结果。     

白血病乳牛乳酸脱氢酶及其同功酶的变化

乳牛白血病是由牛白血病病毒(BLV)引起的慢性传染病。临床上可用微量琼脂免疫扩散试验检出白血病阳性牛,其中有部分牛表现外周血液淋巴细胞增多症(称双阳性);少数牛可导致淋巴肉瘤而死亡。乳酸脱氢酶(LDH)是组织中糖酵解过程中的重要酶,当组织受损害时,LDH便释放进入血液和体液中,因而患恶性肿瘤的动物,常表现血清乳酸脱氢酶(S-LDH)活性增高。本试验在应用MID进行牛白血病普查的基础上,对96头乳牛进行S-LDH活性值及其同功酶谱的测定,以探索其对白血病肿瘤牛的早期诊断价值。 (一)材料和方法     

牛布氏杆菌间接ELISA检测方法的建立

采用原核表达并纯化的布氏杆菌周质蛋白BP26作为包被抗原,建立了检测牛布氏杆菌血清抗体的间接ELISA(iELISA)方法。用建立的iELISA方法对138份临床奶牛血清样本进行了检测,并与虎红平板凝集试验(RBPT)和套式PCR(nested-PCR)进行了比较。结果表明,所建立的iELISA与RBPT和nes-ted-PCR的符合率分别为97.82%和98.55%。尽管该方法的敏感性略低于nested-PCR,但用iELISA检测病牛血清的阳性率可达93.00%。该iELISA方法可作为一种有效的牛布氏杆菌病血清学诊断的备用方法。     

牛地方流行性白血病液相蛋白芯片检测方法的建立

应用xMAP液相芯片技术原理,以原核表达的重组牛白血病病毒gp51蛋白为抗原,建立了检测牛白血病病毒抗体的LiquiChip液相蛋白芯片检测方法,并进行了特异性、敏感性、重复性与稳定性试验。结果表明,该方法对牛白血病病毒阳性血清检测阳性,对其他常见牛病毒阳性血清检测阴性,表明特异性好;液相蛋白芯片方法对牛白血病病毒抗体的检测敏感性可达119.7ng/μL,对多份牛白血病病毒阳性血清的检测结果显示该方法的检测敏感性与商品化ELISA试剂盒无显著差异;对3份牛白血病病毒阳性血清进行4次重复检测,批内、批间的变异系数均低于10%。所制备的偶联微球芯片保存3个月,其检测结果无显著差异。采用该方法对169份临床牛血清样品进行检测,检出阳性率达57.4%,该检测结果与瑞典进口ELISA试剂盒检测结果的符合率为94.67%。本方法为牛地方流行性白血病的进出境检疫、疫病监测和流行学调查研究提供了一种特异、敏感的新型快速检测技术。     

应用纯化抗原对流免疫电泳技术诊断马脑脊髓丝虫病的研究

马脑脊髓丝虫病是由指状丝虫(Setaria digitata)的童虫引起的疾病。本病对马匹危害严重。关于免疫学诊断方法,国外至今未见报道,国内已报道的方法有皮内试验和直接凝集试验等。但都出现不同程度的假阳性和假阴性结果。许多研究表明,在丝虫科各虫种之间及丝虫与其它线虫之间存在共同抗原成分。Dissanayake等应用牛腹腔指状丝虫成虫冷浸液提取物作为诊断人班氏丝虫病的抗原,高桥顺治等应用犬恶丝虫成虫冷浸液提取诊断人班氏丝虫病的特异抗原,都取得了满意结果。我们在应用对流免疫电泳技术诊断本病的研究中亦发现成虫冷浸抗原(粗抗原)能与许多健马血清发生反应,假阳性率高达