鸡腹腔巨噬细胞的体外培养与活性分析

本试验旨在建立一种适用于鸡腹腔巨噬细胞体外培养的方法,并分析体外培养巨噬细胞的形态特征及活性,以获得数量多、活性高的鸡腹腔巨噬细胞。对5～6周龄伊莎褐蛋公鸡进行腹腔巨噬细胞提取,通过扫描电镜、透射电镜和荧光染色等方法对鸡腹腔巨噬细胞的形态、吞噬活性进行检测。结果显示,成功从5～6周龄伊莎褐蛋公鸡体内分离到腹腔巨噬细胞,数量为(0.62±0.51)×10~6个/羽;细胞提取前24 h向鸡腹腔注射预冷的3%的巯基乙酸盐肉汤能显著增加鸡腹腔巨噬细胞的获得量,数量为(3.54±1.05)×10~6个/羽。鸡腹腔巨噬细胞体外培养36～48 h后呈现出最佳状态,具有完整的形态结构和活跃的吞噬活性。结果表明,3%巯基乙酸盐肉汤诱导能显著提高鸡腹腔巨噬细胞的数量,腹腔巨噬细胞体外培养36～48 h后形态和吞噬活性最佳,可用于后续试验的开展。     

断奶仔猪多系统衰竭综合征淋巴结与脾损伤的病理学观察

对通过临床特征与PCR确诊为断奶仔猪多系统衰竭综合征的8例自然病例进行剖检取材,常规石蜡切片与超薄切片,HE染色及醋酸铀一柠檬酸铅染色,观察了淋巴结与脾的病理学变化.肉眼观察可见淋巴结肿大,特别是腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结与肺门淋巴结明显肿大;脾萎缩或中度肿大.组织学观察显示,淋巴结与脾淋巴细胞坏死,数量明显减少,网状内皮细胞增生与巨噬细胞浸润,在一些网状内皮细胞与巨噬细胞的胞浆内见嗜碱性包涵体.超微结构观察显示,淋巴结与脾淋巴细胞线粒体肿胀,内质网扩张,核浓缩,边集,甚至形成凋亡小体;在巨噬细胞与网状内皮细胞核和胞浆内均可见包涵体,包涵体为大小不等,圆形、椭圆形或不规则形的均质或颗粒状2种类型,胞浆包涵体常见于肿胀的线粒体与扩张的内质网附近.表明断奶仔猪患多系统衰竭综合征可致淋巴结与脾淋巴细胞坏死、凋亡,淋巴细胞数量减少.     

野生鸡枞菌多糖的提取及其免疫活性分析

采用水提醇沉法获得鸡枞菌多糖,并对其总糖含量进行了测定;研究了不同剂量的鸡枞菌多糖对正常小鼠的免疫器官指数、血清溶血素水平、腹腔巨噬细胞吞噬功能及脾淋巴细胞增殖等免疫指标的影响。结果:鸡枞菌多糖得率为6.27%,总糖含量为94%;根据体重腹腔注射20mg/kg的鸡枞菌多糖可明显提高正常小鼠的溶血素水平(P<0.01)、脾指数(P<0.01)、胸腺指数(P<0.05)和巨噬细胞吞噬功能(P<0.01);体外试验中,与空白对照组相比,25μg/mL的鸡枞菌多糖可促进体外脾淋巴细胞增殖(P<0.05),12.5μg/mL鸡枞菌多糖对ConA或LPS引起的脾淋巴细胞增殖均有显著的协同作用(P<0.01)。结果表明,鸡枞菌多糖能显著增强小鼠的体液免疫和细胞免疫功能,有望成为一种新的天然免疫增强剂。     

猪圆环病毒2型感染对猪肺泡巨噬细胞生物学活性的影响

将猪圆环病毒2型(PCV2)BF株经口、鼻接种40日龄健康仔猪,在接种后不同时间宰杀,收集猪肺泡巨噬细胞(PAM),同时设立对照。用FITC-Annexin V/PI双染色流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳检测PAM凋亡现象,通过EA花环试验测定Fc受体数目,通过吞噬鸡红细胞试验测定吞噬功能,分析PCV2感染对PAM生物学活性的影响。结果显示,在整个试验期内2种方法均没有检测到PAM凋亡,表明PCV2感染不会诱发PAM凋亡。PAM的Fc受体数和吞噬鸡红细胞数的变化规律一致,与对照组相比,两者数量在接种后第3 d明显下降,第7 d有所回升,之后基本恢复,表明PCV2感染后PAM吞噬和清除病原的功能出现短暂下降。     

早期断乳应激性腹泻对仔猪肠道形态结构与肠道菌群的影响

为研究早期断奶应激性腹泻对仔猪肠道形态结构和肠道菌群的影响,选取21日龄体况相近的早期断奶腹泻仔猪6只,于腹泻次日采集各肠段样本进行病理组织学观察,并测定其肠道菌群。结果显示,早期断奶应激性腹泻仔猪的十二指肠黏膜呈轻度卡他性炎,黏膜上皮脱落,核溶解,绒毛稀少;空肠和回肠肠绒毛脱落,顶端凝固性坏死;空肠和直肠固有层大量中性粒细胞、巨噬细胞浸润;各段肠上皮细胞出现充血、出血、水肿、空泡变性等形态结构的改变。仔猪肠道菌群改变,主要表现为与健康仔猪相比,腹泻仔猪各肠段的类杆菌、大肠杆菌、梭菌数量显著升高(P<0.05),双歧杆菌、乳杆菌数量显著降低(P<0.05)。证实早期断乳应激性腹泻能引起肠道形态结构的破坏和肠道菌群失调,从而加重仔猪腹泻。     

锌对镉染毒小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能损伤的抑制效应

旨在研究镉对小鼠腹腔巨噬细胞的毒性损伤及锌对镉染毒巨噬细胞免疫损伤的拮抗作用。提取雄性ICR小鼠腹腔巨噬细胞,建立体外镉染毒(20、50、100μmol/L)和锌补充(20μmol/L)模型,分别对巨噬细胞形态学、吞噬功能和炎性细胞因子表达进行检测。另外,通过饮水方式对小鼠进行镉攻毒(25、250μmol/L)和锌补充(220μmol/L),3个月后提取各组小鼠腹腔巨噬细胞,观察其形态变化和吞噬活性。结果显示,镉染毒造成小鼠腹腔巨噬细胞浓度依赖性形态和超微结构损伤,细胞吞噬功能下降和LPS诱导的炎性细胞因子(IL-1β、TNF-α和IL-6)表达量降低。锌补充能显著提高各浓度镉染毒小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力,不同程度增强轻度(20μmol/L)和中度(50μmol/L)镉染毒巨噬细胞LPS诱导的IL-1β、TNF-α和IL-6基因表达(P0.05),但对高浓度(100μmol/L)镉染毒巨噬细胞免疫保护作用不明显。结果表明,镉染毒造成小鼠腹腔巨噬细胞浓度依赖性细胞毒性和免疫功能损伤,锌补充能显著增强镉染毒小鼠巨噬细胞的吞噬活性,恢复轻度、中度镉染毒巨噬细胞炎性细胞因子的表达水平。     

复方丁氨丙磷溶液对小鼠免疫机能的影响

为研究复方丁氨丙磷溶液对机体免疫机能的影响,将48只小白鼠随机分成阴性对照组、阳性对照组、低剂量给药组和高剂量给药组共4组。连续给药7d后,采用碳廓清法、流式细胞术和分光光度法分别检测各组小鼠单核巨噬细胞吞噬功能、外周血淋巴细胞CD4 、CD8 和CD19 细胞百分含量以及血清溶血素。结果表明,高剂量给药组小鼠吞噬指数显著(P<0.05)高于阴性对照组;各给药组小鼠外周血淋巴细胞CD4 细胞百分率和CD4 /CD8 值均明显(P<0.05)高于阴性对照组,且血清溶血素含量均极显著(P<0.001)高于阴性对照组和阳性对照组。试验结果表明,复方丁氨丙磷溶液是通过增强机体非特异性防御机能和特异性细胞免疫反应以及特异性体液免疫功能来增强机体免疫功能的。     

猪毛首线虫病的诊治

我市猪体内寄生虫以蛔虫、绦虫等最为常见 ,猪毛首线虫 (猪鞭虫 )较为罕见 ,笔者对一起仔猪毛首线虫病进行诊治 ,效果满意。1　发病情况本地区某农户自繁自养仔猪 2 3头 ,12日龄时开始发病。病猪食欲减退、腹泻 ,有的粪便带有粘液和血 ;病至中后期 ,病猪呼吸浅而快 ,极度虚弱。经多种抗生素治疗无效后到我站就诊 ,其病程已过 2 0ｄ ,期间死亡仔猪 4头。2　剖检变化病猪极度虚弱 ,严重消瘦 ,可视粘膜苍白。剖检可见肾苍白 ,肝轻度肿胀、淤血 ;盲肠、结肠病变尤为显著 ,结肠盘系膜呈轻度水肿 ,内含少量胶冻样物质 ,盲肠和结肠内有大量的乳白色…     

大叶贯众多酚对免疫抑制小鼠免疫功能和抗氧化的影响

为测定大叶贯众多酚(CMPE)对环磷酰胺(CY)诱导的免疫抑制小鼠模型免疫功能和抗氧化功能的影响,笔者将90只雄性BALB/c小鼠随机分为6组,除健康对照组和阳性对照组外,3个试验组和模型组均腹腔注射80 mg/(kg·d)环磷酰胺,连续3 d,然后3个试验组灌胃给予50、100、200 mg/kg的CMPE,健康对照组和模型对照组给予生理盐水,阳性对照组灌胃给予400 mg/kg的CMPE,持续18 d。于最后一次给药后第24小时,每组抽取3只小鼠用碳粒廓清试验检测巨噬细胞的吞噬指数,3只小鼠用MTT法测定淋巴细胞增殖,其余小鼠称重后颈椎脱臼处死,采集内脏并称重,计算脾、胸腺指数,测定心、肝、肾匀浆液中T-AOC、MAD、CAT、SOD和GSH-Px水平。结果显示,3个CMPE组以剂量依赖的方式增加小鼠的脾指数、胸腺指数、脾淋巴细胞增殖和巨噬细胞的吞噬指数、SOD、CAT、GSH-Px和TAOC活性;而3个CMPE组MDA水平以剂量依赖的方式降低。结果表明,CMPE可以逆转环磷酰胺诱导的免疫器官萎缩,增强免疫抑制小鼠的细胞免疫和巨噬细胞功能,有效清除自由基,可作为潜在的免疫调节剂。     

甘草甜素甘草多糖和光甘草定对小鼠巨噬细胞的毒性与免疫功能的调节

为探讨甘草的3种主要成分甘草甜素、甘草多糖和光甘草定对小鼠腹腔巨噬细胞的毒性与免疫功能的调节作用,将3种药物均设6个质量浓度(0.1、1、5、20、100和400μg/mL),分别与巨噬细胞作用12、24和36h后,利用CCK-8细胞活性检测试剂盒检测药物对巨噬细胞的毒性作用;荧光显微镜观察无细胞毒性浓度下对巨噬细胞吞噬大肠杆菌的影响,用ELISA试剂盒检测3种药物对巨噬细胞分泌细胞因子的影响。结果显示,400μg/mL甘草甜素和光甘草定对细胞有一定毒性;所有试验浓度的甘草甜素和甘草多糖均能显著增强巨噬细胞的吞噬能力(P0.01),而仅5、20和100μg/mL光甘草定有这种作用(P0.01);所有试验浓度的3种药物均能显著增强巨噬细胞分泌IL-1β、IL-6、IL-12和TNF-α的能力(P0.01),高剂量抑制IL-4、IL-10和TGF-β的分泌(P0.01),而低剂量没有明显变化。结果表明,甘草的3种主要成分甘草甜素、甘草多糖和光甘草定对小鼠腹腔巨噬细胞基本无毒性,呈剂量依赖性地增强巨噬细胞吞噬能力和分泌促炎性细胞因子以及降低抑炎性细胞因子的分泌。     

猪源脑心肌炎病毒GXLC株对仔猪的致病性试验

为研究猪源脑心肌炎病毒(EMCV)GXLC株对仔猪的致病性,将其接种4周龄健康断乳仔猪,观察临床症状及病理变化,检测心、脑、脾组织及血清中的病毒含量,测定血清抗体效价,检测心、脑、脾组织中IL-1β、TNF-α、IL-6mRNA的表达水平。结果显示,仔猪感染后,出现体温升高、精神不振、腹泻等症状;剖检发现心包积液,心脏变软,脑充血;组织病理学观察发现心肌炎、脑炎,病理炎症分值显著提高;心、脑、脾、血清中均可检测到大量病毒;血清中出现高效价的中和抗体;感染仔猪心、脑、脾组织中IL-1β、TNF-α、IL-6mRNA的表达水平显著上调,而且细胞因子的表达高峰期与出现临床症状、病理损害的时间密切相关。表明,猪源EMCV GXLC株对仔猪具有致病性,IL-1β、TNF-α、IL-6等促炎细胞因子在EMCV对仔猪的致病过程中发挥重要作用。     

四川省仔猪球虫病的流行病学调查

20 0 2年 7～ 9月抽样调查了四川省 12个市、县 16个猪场的球虫病流行情况。结果 ,仔猪球虫阳性场占 93.75 % (15 / 16 ) ,仔猪球虫总感染率为 2 5 .36 % (10 7/ 4 2 2 ) ;猪等孢球虫阳性场占87.5 0 % (14 / 16 ) ,猪等孢球虫总感染率为 18.72 % (79/ 4 2 2 ) ;在球虫阳性的仔猪粪样中初步鉴定出5种球虫 ,即粗糙艾美球虫、蒂氏艾美球虫、猪艾美球虫、豚艾美球虫及猪等孢球虫。     

猪流行性腹泻和传染性胃肠炎弱毒二联疫苗免疫抗体应答的研究

用猪流行性腹泻 (PED)和传染性胃肠炎 (TGE)弱毒二联疫苗 (下称二联苗 )免疫PED和TGE抗体阴性的妊娠母猪 ,仔猪出生后第 7、14、2 1和 2 8d抽取仔猪血样用微量血清中和试验检测血清抗体。结果 ,免疫母猪所产仔猪通过哺乳获得了相当高的血清抗体 ,在出生后第 7d时接近母体的中和抗体水平 ,并随日龄增大而下降。二联苗免疫母猪所生仔猪和相同株的PED、TGE疫苗株免疫母猪所生仔猪的血清抗体变化基本相似。用二联苗免疫PED和TGE抗体阴性的 10日龄仔猪 ,并于免疫后以 7d的间隔 ( 1月龄内 )或半月 ( 1月龄后 )间隔采取血样进行血清抗体检测。结果 ,用二联苗免疫抗体阴性的 10日龄仔猪 ,抗体在免疫后第 2 1d(TGE)或第 2 8d(PED)达到最高值 ,但抗体下降缓慢 ,在免疫后第 5月 ,免疫猪血清中仍能检测出抗体。相同弱毒株的PED和TGE疫苗免疫组的结果与之基本相同。提示 ,PED和TGE弱毒株联合免疫在诱导妊娠母猪和小猪产生抗体以及母猪产后向哺乳仔猪传递抗体方面未见有相互影响的现象。     

PCV2感染对猪MCP-1和IL-8 mRNA表达的影响

将猪圆环病毒2型(PCV2)BF株经口、鼻接种40日龄健康普通仔猪,于接种后不同时间宰杀,收集肺泡巨噬细胞(PAM),同时设立对照。用竞争PCR技术测定趋化性细胞因子IL-8和 MCP-1 mRNA水平,分析PCV2感染对其mRNA表达的影响。结果显示,与对照组相比,在 PCV2感染后第7 d,IL-8 mRNA水平下降至最低,随后迅速上升,至第14 d时达到高峰,而后快速下降,但仍维持较高水平;MCP-1 mRNA水平在攻毒后第3 d下降至最低,之后逐渐上升,至第14 d时达到高峰,而后下降,第21 d以后恢复正常。结果表明,PCV2感染初期可导致PAM趋化性细胞因子IL-8和MCP-1基因的转录明显下调。     

猪伪狂犬病病毒JSZ株的分离鉴定及其病毒核酸的分布规律

用猪伪狂犬病病毒(PRV)特异性引物对江苏省某猪场疑似猪伪狂犬病的病死仔猪组织病料进行了PCR鉴定,结果可扩增到特异性的条带.用该病料接种PK-15细胞,24 h即出现细胞病变,PCR和间接免疫荧光试验结果均证明所分离病毒为PRV.用该PRV分离株接种兔后出现奇痒症状并麻痹致死;接种仔猪后出现持续发热,肌肉震颤等症状.通过对自然感染PRV病死仔猪脏器进行PCR检测,发现PRV在仔猪体内广泛分布,其中以脾的检出率最高,可达100%;对人工感染猪的直肠和鼻腔棉拭样品进行PCR检测,发现病猪排毒最长可达13 d.证实,该分离株为猪伪狂犬病强毒株,脾为病毒检测的首选靶器官.     

产毒素多杀巴氏杆菌在猪萎缩性鼻炎病因中的作用研究——给用醋酸处理或不处理的猪接种产毒素多杀巴氏杆菌引起的鼻腔病变比较

用产毒素多杀巴氏杆菌单独接种到未作任何处理的仔猪鼻腔,细菌被迅速清除,鼻甲骨不发生明显萎缩。对仔猪鼻腔用1％醋酸预先处理2天后,再接种产毒素多杀巴氏杆菌,该菌则可在鼻腔长期定居,引起严重的鼻甲骨萎缩;如再混合感染支气管败血波氏杆菌时,猪萎缩性鼻炎的病理变化和临床指征明显加重。试验结果表明,与支气管败血波氏杆菌一样,某些非传染因素也可促进产毒素多杀巴氏杆菌在猪鼻腔定居,从而导致持续性萎缩性鼻炎的发生。     

猪德尔塔冠状病毒感染仔猪引起肠道组织病理学变化及其对致病相关因子的影响

为了探究猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)感染仔猪肠道引起的组织病理学变化及其在肠道中复制并导致肠道出现炎症病变的作用机制,本研究使用PDCoV天津地区分离株TJ1经口服感染10日龄仔猪,在攻毒后第4天对仔猪进行剖检,通过病理组织学观察发现,空肠、回肠、结肠、盲肠组织主要病变表现为肠黏膜间质、黏膜固有层、黏膜下层弥漫性炎症细胞浸润,局部黏膜绒毛萎缩等。通过荧光定量PCR试验,对肠道组织中PDCo V M基因、天然免疫基因IFN-α、IFN-β、DDX58、STAT2与炎症因子TNF-α、IL-6的mRNA表达量进行检测,结果显示,PDCoV在4种肠组织中通过抑制宿主细胞天然免疫应答实现自身复制,且在空肠、回肠、结肠中通过增强TNF-α、IL-6的表达促进肠道炎症病变的发生。本研究结果可为猪德尔塔冠状病毒致病机制的研究提供理论依据。     

PRRSV和PCV2共感染对猪肺泡巨噬细胞CD80-CD86 mRNA转录的影响

用猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与猪圆环病毒2型(PCV2)共感染40日龄健康大白仔猪,利用实时荧光定量PCR技术对共感染仔猪肺泡巨噬细胞(PAM)共刺激分子CD80-CD86的mRNA转录水平进行了定量分析。结果表明,在感染后第3 d和第7 d CD80与CD86 mRNA转录显著下调(P<0.05),感染后第14 d CD86 mRNA转录水平仍低于未感染对照组。尽管CD80 mRNA转录水平在第14 d和第28 d高于对照组,CD86 mRNA转录水平在第28 d高于对照组,两者在第42 d均高于对照组,但无显著差异。证实,PRRSV和PCV2共感染可导致猪肺泡巨噬细胞的共刺激分子CD80-CD86基因转录在感染早期明显受到抑制,PAM的抗原呈递能力受到影响。     

新生猪胰腺干细胞培养方法的建立

通过对不同饲养层和培养基以及细胞因子进行筛选,比较了各种培养基和细胞生长因子对细胞传代时间和增殖细胞比例的影响,选择最佳分离条件,建立了新生猪胰腺干细胞体外培养的最佳体系。结果显示,以成纤维细胞为饲养层,在含100 mL/L胎牛血清的L-DMEM中添加表皮生长因子、干细胞因子、白血病抑制因子的培养液中培养,细胞能快速增殖,多突起、多角形、小圆形、长梭形4种类型干细胞的增殖比例适中,而且各种类型的细胞都能长期传代培养。