脱落上皮细胞类生物检材的自动化提取

目的建立一种自动化提取脱落上皮细胞类生物检材DNA的方法。方法附着于不同载体上的脱落上皮细胞类生物检材共278份,应用Eppendorf epMotion 5075LH工作站结合DNA IQTM系统提取模板DNA,并用Identifiler试剂盒进行STR检验。结果在278份被检的生物检材,其中126份检材获得13个基因座以上的STR分型,不同类型的检材其检出率不相同,最高达73.44%,最低为10.89%。结论脱落上皮细胞类检材应用自动化工作站提取DNA模板可在法医日常检案中广泛应用。     

微量生物检材常规初检后再行PCR检验的方法

在实际检案中，经常遇到案发现场可获取的生物检材量微，在进行必要的种属检验、精斑确证实验、ABO血型检验等常规物证初检后，便无多余的生物检材移送DNA实验室进一步做法医DNA检验。因此，笔者通过对检案中遇到的上述微量物证检材的再行处理利用，在本实验室条件下，对其进行了TH０１、HUMACTBP２、AluVpA、DIS８０等位点的DNA－PCR分析，获得了良好的效果。使其在实际办案中更充分地发挥了证据作用，报告如下。１材料与方法检案中已经种属或ABO血型检验后的血痕、唾液斑（如烟蒂外层纸）浸泡凹板，加入３００μl去离子水，…     

载体法检验微量检材DNA

目的解决微量生物检材DNA检验难题。方法采用载体法对已知微量血样DNA进行检验，再与目前高灵敏度的Chelex-100提取的DNA检验的相应结果进行比较。结果载体法针对微量血样的DNA检验。不但能得到正确的STR分型结果．同时在检验灵敏度上比Chelex-100法高出2倍以上。结论载体法可提高微量生物栓材中DNA检出率，且操作简单，在法医检案工作中具有较高应用价值。     

20个STR基因座的种属特异性研究

确定本室常用的20个STR基因座对常见10种动物的种属特异性。20个STR基因座对10种常见动物血或软组织的DNA进行PCR扩增、聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染色法进行DNA分型,测定各STR基因座的种属特异性。D11S554、SE33基因座对10种动物DNA,D12S391、CSF基因座对狒狒DNA,D19S253基因座对兔、狒狒的DNA,FGA基因座对兔、猴、狒狒的DNA均有PCR扩增产物,其片段长度与人的在同一电泳区内;DYS19基因座对10种动物的DNA,FES基因座对鸡DNA,PLA基因座对猪DNA,D21S11基因座对蛇、牛、狒狒的DNA有扩增产物,但其片段长度明显与人的不同。DYS389、DYS288、DYS390、D7S809、D13S631,TH01、vWA、AR、CD4、FABP基因座对鸡、猪等动物的DNA均无PCR扩增产物。在20个STR基因座中,10个基因座只对人DNA有扩增产物,有较好的种属特异性;8个基因座对人和部分动物均有扩增产物,但产物的片段大小与人的不同,在进行个人识别时,可以用其分析DNA的种属来源;2个基因座对人和动物均有扩增产物,且片段长度相近,在进行个人识别时,应先作DNA种属来源检查。     

15个常染色体和18个Y染色体STR基因座复合扩增检测体系及法医学应用

目的建立15个常染色体和18个Y染色体STR基因座以及性别基因座的六色荧光标记复合PCR直扩检测体系,并评估其法医学应用价值。方法采用六色荧光标记技术,建立15个常染色体STR基因座(D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、D19S433、v WA、D21S11、D18S51、D8S1179、D5S818、FGA)和18个Y染色体STR基因座(DYS527a/b、DYS448、DYS456、DYS385a/b、DYS458、DYS391、DYS390、DYS19、DYS438、DYS393、DYS389Ⅰ、DYS439、DYS389Ⅱ、DYS392、GATA、DYS635)以及Amelogenin的复合扩增体系,收集800份无关人员血样进行基因座检测,评估所建复合扩增体系的稳定性、灵敏度、种属特异性、直扩可行性以及抗抑制性。结果本检测体系对800份无关人员血样复合扩增后,结果准确,灵敏度达0.125ng;种属特异性高;38份案件检材全部准确分型。在对照男性与女性的DNA浓度比值大于等于1:4时,男性DNA的所有基因座均能准确分型。若模板DNA中含一定浓度的已知抑制剂时,所有基因座也均准确分型。结论本文建立的复合扩增检测体系可同时检测15个常染色体和18个Y染色体基因座以及性别基因座,结果稳定准确,灵敏度高,可为法医DNA检测分析提供一个新选择。     

混合精斑DNA三种提取方法的比较

在法医物证学上,对于混合斑检材,一般采用Chelex法[1,2]抽提DNA,由于得率和纯度较低,检测存在失败的可能。为了提高成功率,作者对检案过程中抽提DNA的步骤进行了优化,现报道如下。1材料与方法1.1检验材料1号检材为卫生巾,2号检材为卫生纸,3、4号检材均为蓝色内裤,其中3号检材较脏且混有血痕。分别剪取1～4号检材微量,涂片经伊红美兰染色,镜检,1、2、4号检材均检见人精子,3号检材检见大量上皮细胞及少量人精子。1.2仪器与试剂梯度PCR仪(德国,Eppendorf);DYY-Ⅲ-4型稳压稳流电泳仪(北京六一仪器厂);人STR六个双基因座复合扩增银染试剂…     

国产Goldeneye~(TM) 20A试剂盒性能指标验证

目的测试国产GoldeneyeTM20A试剂盒技术性能指标,评估其法医学应用能力。方法从方法学验证、准确性、峰值均衡性、灵敏度、批次间试剂及稳定性测试、耐受性、不同检材的适应性与一致性、种属特异性、混合样本等9个方面对GoldeneyeTM20A试剂盒进行测试。结果阳性DNA样本分型正确,内标和等位基因分型标准物符合要求;等位基因间的均衡性≥83%,同一荧光标记基因座间的均衡性≥55%,不同标记物间的均衡性≥52%;0.125ng DNA阳性样本可检出全部STR基因座分型,不同批次间和反复冻融后试剂盒测试可以获得正确分型,对降解检材和混有抑制剂的样本等具有一定的耐受性,能对案件中多种检材进行分型且分型结果一致,具有一定的种属特异性和混合DNA样本检测能力。结论国产GoldeneyeTM 20A试剂盒可用于法庭科学实际检案与建库。     

衣帽上脱落细胞微量DNA检测方案初探

由于个案中微量DNA检材的成功提取及STR检测技术的不断提高,强化了现场勘察人员提取衣帽上脱落细胞微量DNA检材的意识。针对本实验室受理的此类检材逐渐增多及衣帽上微量DNA检材的特点,本文作者在检案中摸索出通过多重提取、纯化并选择最佳扩增体系的检测方案,明显提高了检测成     

联合应用chelex100和磁珠法检测霉变皮上衣微量DNA1例

微量疑难检材DNA的提取是目前检案的难点之一.笔者在办案中,遇到1份微量、陈旧、霉变的检材;经联合应用chelex100法和磁珠法(DNA IQIM)成功从检材中提取并获得了足量、高纯度的模板DNA,采用PCR扩增和荧光检测获得理想的STR分型结果,为破案提供可靠有力的科学依据.现报道如下.     

法医物证DNA自动化检验技术体系的研究

目的建立自动化工作站同步提取不同种类涉案法医生物检材DNA的新方法。方法选用TECAN Freedom EVO100．4、75—2型自动化提取、加样工作站,采用磁珠法及Chelex-100法对各类涉案生物检材进行DNA提取、PCR扩增、毛细管电泳检测其STR分型,进行比较测试。在“全国公安机关DNA数据库应用系统”中建立并应用实验室信息管理系统（LIMS）模拟实施规范化DNA检案。结果1552份各类检材,采用工作站-磁珠法提取DNA效果最佳,STR检测成功率为95％,工作站-Chelex法为88％;二者分别与其手工提取法比较,成功率无明显差异。92个样本同期检测,自动化工作站较手工操作DNA检案时间可缩减1．25倍。结论工作站域珠法提取涉案检材DNA,可获得满意的STR分型结果。应用LIMS管控,可有效防控污染,明显提高检案效率及鉴定质量。     

中国汉族人群 8个 STR位点荧光标记同步检测及其频率分布

目的 对血液等微量生物学检材进行 8个 STR多态性位点及一个性别鉴定位点的复合检测 ,并调查了 350名中国汉族无关个体上述基因位点等位基因分布情况。方法 所选位点为 vWA、 TH01、 TPOX、 CSF1PO、 D5S818、 D13S317、 D7S820、 D16S539及性别鉴定位点 Amelogenin,应用荧光染料标记引物,利用 PE－ 377 DNA片段分析仪对扩增产物进行基因分型。结果 共检出 63个等位基因及两个性别决定基因 ,总鉴别机率（ TDP）值达 99.999 999 98％,对法医学常见极微量生物学检材的检测获得成功, DNA模板需要量为 0.5～ 1.0ng,通过家系调查,证明上述位点遗传稳定,符合孟德尔遗传规律。结论 上述 8个 STR多态性位点具备了个体认定能力 ,是对微量生物学检材进行个体识别鉴定的理想方法。     

低拷贝模板STR分型及其存在的问题

微量、超微量生物学检材的STR分型常常是案件调查中进行DNA分析的难点。多年来 ,法医DNA分析工作者一直努力探索对微量DNA进行分析的方法。应用少于试剂盒规定的最小DNA模板量进行STR扩增检验 ,并对结果加以分析解释 ,被定义为低拷贝模板 (lowcopynumber ,LCN )STR分型[1、2 ] 。LCN STR分型不同于标准的STR分型 ,在实际应用中也存在许多问题需要引起注意[1～ 5] 。为了避免在LCN STR分型中出现误判 ,本文对如何正确地使用LCN STR分型技术加以介绍。1　LCN STR分型根据生产厂家的推荐 ,标准STR分型方法使用最低的模板…     

怒族STR基因频率分布及在法医学中的应用研究

<正> STR是由2～7bp重复单位构成的微卫星DNA,其多态片段长度范围大多在100～500bp之间。STR基因座具有扩增效率高和判型准确,并且适用于微量甚至降解生物检材的DNA分型技术等优点,被广泛应用于法医学领域。 本文作者用基因扫描技术对我国云南怒族人群84名无关个体和10个家系进行TH01、TPOX、CSF1PO、D5S818、D13S317、D7S820、D3S1358、VWA、FGA等9个STR基因座基因频率分布调查及STR分型方法标准化的探讨,从群体水平上阐明该民族STR遗传结构及其变化规律。     

运用二代测序技术拆分混合STR分型

目的探讨二代测序技术在混合STR分型拆分中的应用。方法对一例强制猥亵妇女案中受害人颈部的拭子和血样作DNA提取,以Precision ID GlobalFiler^TM NGS STR Panel v2试剂盒制备文库,经Ion S5测序仪测序,运用Torrent_Suite_v5.2.1软件进行数据分析后,将检测基因座的序列多态STR分型与长度多态STR分型进行比较。结果在D8S1179、D21S11、D2S441、D2S1338、D10S1248五个基因座发现存在序列特异的等位基因亚型,利用这些亚型对混合STR分型进行了成功拆分。结论二代测序技术提供的等位基因序列信息可对混合STR分型的拆分起到帮助作用。     

24个基因座复合扩增系统的应用

目的建立24个基因座的复合扩增系统,并对其性能指标进行评价。方法选择24个基因座（包含D8S1179、D5S818、D2S1338、D18S51、D6S1043、D2S441、D3S1358、vWA、D19S433、D16S539、CSF1PO、Penta D、D22S1045、D13S317、D1S1656、D7S820、TPOX、Penta E、D10S1248、TH01、D12S391、D21S11、FGA等23个STR基因座及1个Amelogenin基因座）;合成引物,上游端标记荧光染料;收集DNA数据库建库血痕及口腔拭子样本及相关11种动物样本,采用本文方法进行复合扩增;并对方法的准确性、灵敏度、稳定性、种属特异性、检材适用性、混合样本的检验等系统性能指标进行验证。结果本文复合扩增系统对最长保存9年的各种血痕检材完整分型成功率为100%,且均衡性良好,无非特异性扩增,口腔拭子的成功率为97.8%,灵敏度达125pg,对含有抑制剂样本,在血红素浓度≤600μmol/L,腐殖酸浓度≤50ng/μL时检出效果稳定,种属特异性好。结论本文24个基因座复合扩增系统在DNA数据库建设中具有较好的应用价值。     

荧光标记检测STR复合基因座的应用

自DNA检验应用于法医鉴定以来,经过了十几年的发展,已建立了许多各种各样的方法和技术.STR分析方法虽发展时间不长,但由于其本身特有的特点,如等位基因片段短小,易于扩增,灵敏度高;基因座多,识别力强;对降解DNA能进行分析,可检验腐败陈旧生物检材;易于实现自动分析和计算机管理等,已日益成为日常DNA分析的主要、首选方法.STR分析从单个位点扩增分析到多个位点复合扩增分析,从银染到荧光检测分析,日趋自动化.反过来,检验程序的自动化进一步促进STR技术在日常案件检验中的应用.现荧光标记检测STR复合基因座技术已开始在法医DNA检验中应用并将被广泛采用.本文就其应用中的一些问题进行讨论.     

PEP-PCR法及其在法医学中应用的可行性研究

提高微量检材的利用率 ,建立PEP方法并对其法医学应用进行可行性研究。用 15个随机寡核苷酸的序列作为引物 ,低特异性下扩增出微量DNA ,以此扩增物作为模扳 ,进行特异基因座扩增。经PMCT118,GABAR ,DYS19,D18S849,D3S1744,D12S10 90 ,D8S1179,D2 1S11,D18S5 1,D5S818,D13S3 17,D7S82 0 ,D3S13 5 8,vWA ,FGA ,TH0 1,CSF1PO ,TPOX ,D16S5 3 9及Amelogene等 2 0个基因座的PEP PCR与直接的PCR分析比较 ,二者分型结果一致 ,即使 1ngDNA也能得到正确分型。PEP方法可用于法医学检验 ,有利于微量物证的利用 ,使物证检材提供尽可能多的信息     

腌制2年的生物检材STR检验1例

腌制过的生物检材在DNA检案中比较少见。作者遇到一例腌制2年多的尸块，并对不同部位检材（深层肌肉组织、部分肋软骨、指甲）进行STR检验，最终通过检验指甲成功得到无名尸体的STR分型，并进行了亲缘关系鉴定。现报道如下。     

混合生物样品的组分分析及其STR基因型判定

目的应用荧光标记STR多基因座联合检测技术对混合生物样品较少组分最低比例检出限和STR基因型的判定进行研究。方法 将已知浓度的人标准细胞系DNA:9947A和K562分别按照1:1、1:4、1:9、1:19、1:39、1:59、1:79和1:99比例混合后作为扩增模板,应用Profiler plus试剂盒对D3S1358、VWA、FGA、D8S1179、D21S11、D18S51、D5S818、D13S317、D7S820和性别鉴定基因座检验。结果在比例为1:19时能明确判定两个体各基因座基因型,且两样品基因型结果峰高平均值之比与样品浓度之比正相关。结论应用荧光标记STR多基因座联合检测技术可以对一定比例的混合生物样品进行STR基因型判定,并对其混合比例状况进行大致推断。     

23个STR基因座荧光复合扩增体系的法医学应用评估

目的评估新建立的23个STR复合扩增体系EX23的法医学应用价值。方法使用磁珠法提取样本DNA,应用23个STR复合扩增体系进行扩增,ABI3130XL遗传分析仪对扩增产物进行电泳,GeneMapperID 3.2软件进行基因分型,对法医学应用参数、灵敏度、种属、脱落细胞检材及降级检材分型效果进行观察,并与Sinofiler试剂盒比较。结果 DNA模板量在0.05~1.00ng时,各基因座分型结果清晰准确,均衡性好、特异性强。应用该复合扩增体系检验混合样本、降解检材及脱落细胞检材,均能获得正确的分型结果。统计结果显示该23个STR基因座累计个人识别（TDP）率达0.999999999,三联体累计非父排除率（CPE）达0.999999997。结论新建立的23个STR复合扩增体系分型效果良好,在广东地区汉族人群中具有高度多态性,可满足日常法医鉴定的需要。