Chelex-100法和QIAcube纯化法在接触性检材检验中的比较

<正>在法医DNA检验中,能否提取到足够浓度与纯度的DNA模板,是决定DNA检验成败的关键之一。本研究分别采用Chelex-100法与QIAamp DNA Investigator试剂盒结合QIAcube核酸自动化提取仪(QIAcube纯化法)提取实际检案中的DNA,同等条件下进行PCR扩增与电泳,比较分析二者的图谱,报道如下。1材料与方法1.1材料65份接触性生物检材来自本实验室日常检案积累,其中瓶口32份,工具手柄18份,绳索衣物类     

M48磁珠法和Chelex-100法提取脱落细胞DNA的初步比较

目的对M48磁珠法和Chelex-100法提取脱落细胞DNA的检验效果进行比较,为优化提取方法提供参考。方法选取案件受理检材50例烟蒂、50例纺织物品、50例作案工具,根据不同条件分别用吸附法、沾附法获得DNA,采用磁珠法（M48）和Chelex-100法提取后,常规STR检测。结果烟蒂类检材采用2种方法提取DNA,所得结果没有明显差异;纺织物品和作案工具上脱落细胞DNA的提取采用M48磁珠法提取的效果明显优于Chelex-100法。结论相对而言,M48磁珠法更具优势。     

胎盘粉DNA分析1例

1案例1.1简要案情某年3月5日,某县发生一起强奸致孕案,之后受害人姚某在私人诊所内非法实施引产手术,诊所私自截留胎盘进行干燥、粉碎、加工处理并作为保健品原料贩卖。最后警方根据线索追回疑似受害人姚某引产所留部分胎盘粉,为明确该胎盘粉是否为受害人所留,要求对胎盘粉进行检验。     

联合应用chelex100和磁珠法检测霉变皮上衣微量DNA1例

微量疑难检材DNA的提取是目前检案的难点之一.笔者在办案中,遇到1份微量、陈旧、霉变的检材;经联合应用chelex100法和磁珠法(DNA IQIM)成功从检材中提取并获得了足量、高纯度的模板DNA,采用PCR扩增和荧光检测获得理想的STR分型结果,为破案提供可靠有力的科学依据.现报道如下.     

磁珠法提取粪便检材DNA

正疑难生物检材的发现、提取和检验越来越多地应用到了各类刑事案件的侦破中,并发挥了良好的作用。现场粪便检材因其中含有的抑制物种类繁多并且不易去除,检验成功率不高。本研究采用磁珠分离试     

Chelex-100提取生物检材DNA实时PCR定量研究

目的研究Chelex-100法提取的生物检材DNA用量与复合STR分型成功率的关系。方法113份各种生物检材采用Chelex-100法提取DNA，应用Quantifiler人类DNA定量试剂盒在ABI 7500荧光定量PCR仪上进行实时PCR定量，同时用Identifiler复合扩增系统在ABI 3100遗传分析仪上对这些DNA样品进行STR分型。结果各种生物检材提取的DNA浓度分别为：37份滤纸、纱布血痕0．042～5．28ng／μl，16份口腔拭子1．15—4．21ng／μl，18份烟头0．016～1．46ng／μl，10份肋软骨0．531—14．40ng／μl，8份肌肉5．75—24．80ng／μl，7份指甲0．788—11．50ng／μl，17份精斑0．79～99．50ng／μl。在建立的8μl扩增体系中，根据上述结果，调整用于复合STR扩增的DNA模板量在0．5—3ng之间，大部分样品可获得完全的STR分型。结论Chelex-100法提取的检材DNA模板用量在0．5—3ng之间可得到有效STR扩增，浓度为0．5ng／μl以上的DNA样品，用小体积模板（1μl）比大体积（3μl）模板扩增效果好。     

EVO 150磁珠法提取基因组DNA用于STR分型

1材料与方法 564份日常案件现场提取的生物检材,包括各种载体如泥土、木屑、金属刀具、砖块、衣服上附着的血迹352份,经过雨水、踩踏等因素影响的烟蒂89份,咀嚼过的口香糖32份,精斑25份,以及从手套、     

MPure-12全自动核酸纯化仪与Chelex-100法的比较CSCD

目的通过对DNA含量不同的血痕和多种类型生物学检材进行DNA提取和STR分型检测,探讨MPure-12全自动核酸纯化仪(MPure-12法)在DNA提取中的法医学应用价值。方法收集血痕、精斑、唾液等9种类型的生物学检材,应用MPure-12法和传统Chelex-100法提取DNA,经过PCR扩增和电泳,获取STR分型图谱。结果 MPure-12法对发根、口香糖、烟蒂、肌肉组织、唾液斑、血痕、精斑这些检材能够成功分型,唾液出现了个别等位基因丢失现象,接触拭子分型较差。Chelex-100法对血量为20μL、15μL、10μL、5μL、1μL制成的血痕均有完整分型结果,MPure-12法在血量为1μL时出现等位基因丢失现象。结论 MPure-12法适用于一定浓度血样的检验,而对于微量血样,Chelex-100法提取DNA的效果可能更优。仪器应用于DNA提取具有操作简单、快速、提取效率高,分型成功率高,减少人为污染等优势。     

人体脱落上皮细胞DNA检验2例

1案件简介案例1 2006年1月,某地公园内,一女子被杀害。经现场勘查发现,除犯罪分子惊慌逃跑时遗留的一双塑料拖鞋外,未发现其它证据和线索,因此这双拖鞋上人体脱落上皮细胞DNA检验的成败,直接成为本案侦破的焦点。检验人员用纱线反复擦拭拖鞋上脚底接触面的可疑人体脱落上皮细胞     

Chelex-100法提取脱落细胞检材DNA的实时定量研究

目的研究脱落细胞检材DNA检验的简便有效的提取方法。方法对76份包括帽子、眼镜、牙刷、剃须刀、梳子、口香糖、羊水在内的7种脱落细胞检材采用Chelex-100法提取DNA,在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行定量,同时用Identifiler复合扩增系统扩增,在ABI3130遗传分析仪上进行STR分型。结果从帽子（头套）中获得的脱落细胞DNA平均含量为8.31ng,眼镜擦拭物上获得的脱落细胞DNA平均含量为6.20ng,牙刷上获得的脱落细胞DNA平均含量为49.40ng,剃须刀擦拭物上获得的脱落细胞DNA平均含量为6.92ng、梳子擦拭物上获得的的脱落细胞DNA平均含量为10.68ng,口香糖的脱落细胞DNA平均含量为16.30ng,羊水的脱落细胞DNA平均含量为320ng。以上76份检材性别及10个以上STR位点分型成功率为75.8%。结论从帽子、眼镜、牙刷、剃须刀、梳子、口香糖、羊水等检材提取的脱落细胞可用Chelex-100法提取DNA作STR分型。     

用磁珠法快速提取指甲DNA

<正>在日常检案过程中,一般采用Chelex-100法或苯酚/氯仿法提取指甲DNA。Chelex-100法提取的DNA模板有时存在着较多扩增抑制物,需进一步纯化。苯酚/氯仿法虽可以得到质量较好的DNA模板,但在提取过程中需要多步离心,有可能使DNA样品     

高度腐败组织不同DNA提取方法的比较

在法医实践中,一般采用Chelex-100法提取DNA可得到理想的STR分型,但对一些高度腐败组织,由于细胞自溶速度快,DNA降解严重,单纯依靠此法往往得不到理想的分型结果。为提高腐败检材检验成功率,本文运用Chelex-100联合DNA—IQ磁珠法和有机法联合QIAquick PCR纯化试剂盒法对高度腐败组织进行DNA提取,并比较其DNA提取的检测成功率。     

磁珠法在自动化核酸提取工作站中的应用

正在全国罪犯DNA数据库的建设过程中,需对大量人员样本进行检验,增加了检验人员的工作量。本实验将磁珠法与自动化核酸提取设备相结合以提高检验过程的准确性,减少因手工操作引起的失误,缩短检验时间,提高每次检验结果的可重复性及均一性。1材料与方法人员血样100份,为本实验室2009年上半年采集,载体为公安部物证鉴定中心生产的血样采集卡。     

自动化工作站与Chelex-100法对血样本检验效果比较

目的比较自动化工作站与Chelex-100法对不同浓度血液样本的检验效果。方法取新鲜血液,按倍量稀释法制成2~1 024倍10种不同浓度的血样本,分别采用自动化工作站和Chelex-100法提取模板DNA,应用Identifiler Plus试剂盒进行扩增及毛细管电泳检测,并对电泳结果进行比较。结果稀释2~32倍的血样本,采用两种方法的检验成功率均可达到100%;稀释64倍的样本,Chelex-100法成功率为41.3%、完整分型数为78.3%,自动化工作站成功率为13.0%、完整分型数为43.5%,两者比较,差异均有统计学意义(P0.01);稀释128倍的样本,成功率在Chelex-100法(8.7%)和自动化工作站(2.4%)之间比较,其差异无统计学意义(P0.05);稀释256倍以上,两种方法均无法获得分型结果。结论自动化工作站适用于一定浓度血样的检验,而对于微量血样,Chelex-100法的效果可能更优。     

氨基比林血痕预试验处理血痕后样本的DNA定量

目的：探讨氨基比林血痕预试验处理血痕后样本DNA含量的变化及对STR分型检测的影响。方法10名健康无关个体EDTA抗凝血液制成滤纸血痕,氨基比林血痕预试验检测,按试验后血样干燥保存时间分30 min、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h共6个实验组,并采用磁珠法、QIAcube DNA纯化法、Chelex-100法三种方法提取样本DNA,应用荧光定量PCR检测样本DNA含量,PCR-STR荧光技术进行STR分型。结果提取方法相同时,氨基比林血痕预试验后血样随干燥保存时间的延长,样本DNA含量呈逐渐降低的趋势。保存时间相同时,不同DNA提取方法间,样本DNA含量差异也有统计学意义。90.56%样本均可获得16个STR基因座明确分型。结论氨基比林血痕预试验对血痕样本DNA有损伤,24 h内多可获有效STR分型。磁珠法提取样本DNA进行STR分型,效果最好。     

运用酚-氯仿法结合磁珠法提取蝇蛆体内人类DNA

目的建立运用酚-氯仿法结合磁珠法从蝇蛆嗉囊内提取人类DNA的方法,从而提高STR分型检验的灵敏度。方法采用酚-氯仿法对蝇蛆嗉囊内容物中的人类DNA进行提取,提取产物经磁珠法纯化浓缩后用QuantifilerTM人类DNA定量试剂盒在7500型实时荧光定量PCR仪上进行PCR定量,再用AmpF■STR IndentifilerTM试剂盒在3130XL-Avant遗传分析仪上对这些DNA样本进行STR分型。结果本研究建立的方法可增加模板DNA浓度约为单独使用酚-氯仿法的2倍。用此方法提取到的DNA浓度[（0.218±0.041）ng/μL]可获得全部16个STR分型结果。结论酚-氯仿法结合磁珠法可以有效地提高提取到的人类DNA样本STR分型检验的灵敏度,对于从事法医昆虫学方面研究的工作者有较好的实用价值。     

应用磁珠法提取陈旧骨骼DNA

目的探讨采用磁珠法提取陈旧骨骼DNA的可行性。方法取经土埋或室外暴露下存放1~5年不等的10根长骨,经水洗、刮净,钻取骨密质骨粉3g,应用EQ1000磁珠试剂盒提取DNA,经复合扩增,ABI 3130XL基因分析仪电泳分离,进行STR分型检测。结果 10根长骨均获得完整的STR分型,电泳图谱基线干净,除个别大片段基因座外,等位基因荧光信号分布均衡性较好。结论采用磁珠法提取陈旧骨骼的DNA,能满足分型要求,可在实际检案中选用。     

磁珠法回收纯化DNA样本

DNA回收纯化技术是法医DNA检验的关键技术之一。目前,国际上采用的方法主要有基于吸附解离原理的磁珠法[1,2]、硅珠法[3~6]和基于分子量差异的柱法[7]、滤膜法[8]。相比之下,磁珠法由于将磁场作用引入生物分离过程,简化了手工操作步骤,节省了时间,对DNA样本的回收和纯化具有特殊的优势。本文采用吉林大学化学学院赠送的磁珠,在DNA回收纯化方面进行了一些探索。1材料与方法1.1样本DNA标准品9947A购自Promega公司;其他样本取自本实验室的案件检材。1.2主要仪器设备及试剂3100型基因分析仪(AB I公司);9700型PCR扩增仪(AB I公司);Pow…     

存放19年精斑DNA检验成功1例

1案例 在一起性侵犯案件中．公安机关勘验现场后提取到受害人当时所穿军绿色短裤一条．后因证据不足释放嫌疑人。19年后,本实验室重新受理了此案件,对案发当时提取的短裤进行DNA检验。     

细胞裂解法和磁珠法在法医DNA检验中的对比

目的 比较细胞裂解法和磁珠法在法医DNA检验中的效果,探讨两种方法在法医学检验中的运用。方法 使用细胞裂解法和磁珠法获取不同数量的THP-1细胞的基因组DNA并使用实时定量PCR检测DNA含量。使用细胞裂解法和磁珠法对不同稀释倍数的人血进行STR分型检测。结果 当THP-1细胞数量为100、400和800个时,使用细胞裂解法提取的DNA含量分别为(1.219±0.334)、(5.081±0.335)、(9.332±0.318) ng;使用磁珠法提取的DNA含量分别为(1.020±0.281)、(3.634±0.482)、(7.896±0.759) ng,在THP-1细胞数量为400和800个时,细胞裂解法提取的DNA含量高于磁珠法(P<0.05)。使用细胞裂解法和磁珠法检测不同稀释倍数人血的STR分型时灵敏度相近,在血样稀释100、300和500倍时均能获取完整的STR分型,血样稀释700倍时,均无法检出完整STR分型。使用细胞裂解法无法检出未稀释人血的STR分型。结论 细胞裂解法操作方便,能最大程度保留模板DNA,有望适用于微量血痕检验。