大鼠皮肤创伤后EⅢA-FNmRNA表达与损伤时间推断研究

目的研究皮肤创伤后不同时间纤连蛋白剪接方式变化及EⅢA剪接异型体的表达。方法提取伤区组织总RNA,RT-PCR方法扩增目的条带。结果大鼠皮肤损伤后表达出正常组织中没有的EⅢA+(526bp)片段,其中伤后1h该条带肉眼可辨认,在伤后24h内,随损伤时间延长其条带亮度相应升高。结论EⅢA-FN剪接异型体表达变化可为法医学损伤时间推断较理想指标。     

大鼠皮肤损伤后纤维连接蛋白剪接异型体的表达

运用地高辛标记纤维连接蛋白 (FN)特殊位点的探针 ,通过原位杂交方法检测不同损伤时间大鼠皮肤各型FN剪接异型体的表达情况 ,结果发现 :伤后大鼠皮肤各型FN的表达随时间呈增高趋势 ;伤后 30～ 6 0min表达出正常皮肤中没有的EⅢA、EⅢB片段。FN的这一特性为法医学诊断生前、死后伤和伤后存活时间推断提供了新指标。     

Fn—EⅢA金标单克隆抗体试纸条的试制和初步应用

目的开发可用于法医病理学损伤时间推断临案的金标Fn-EⅢA单克隆抗体试纸条.方法选取两种敏感、特异的片段特异性Fn-EⅢA单克隆抗体,ELISA方法进行效价观察,标记胶体金后分别采用渗滤法及层析法检测其效果,抽提阳性对照中目标蛋白进行初步测评,并以大鼠皮肤损伤模型进行验证.结果两种单克隆抗体均可用于Fn-EⅢA肽段的金标法检测,以IST9搭配Fn多抗效果最佳;正常皮肤组织样本中试纸条检测线不显色,损伤3h后显色,随损伤时间延长,染色逐渐加深.结论该试纸条可靠性、可重复性以及可操作性均佳,可望在法医学损伤时间推断有广阔的应用.     

FN-EIIIA肽段表达与皮肤损伤时间推断研究

目的 在mRNA研究的基础上,研究大鼠皮肤挫伤后含EIIIA□段的Fn蛋白水平表达与损伤时间关系。方法片段特异性单克隆抗体免疫组织化学染色。结果伤后6h表皮细胞、毛囊上皮细胞等出现棕黄色阳性染色颗粒,并随损伤时间延长染色加深。结论Fn-EIIIA片段检测可用于法医学生前伤确认和损伤时间推断。     

纤维连接蛋白额外结构域异型体的法医学应用

纤维连接蛋白额外结构域原为胚胎时期高表达的同源结构域,多数组织随发育至成年后在基因转录后加工过程中已逐渐剪去该区域,然而近年来发现,在机体损伤、疾病、肿瘤等状态下此“幼稚型”片段重新高表达,其功能的特殊性已引起广泛关注。在法医学损伤时间研究中应用此特性,使研究指标从量变型转为质变型,具有极强的实用意义。     

纤维连接蛋白mRNA可变剪接及其影响因素

纤维连接蛋白（fibronectin,FN）是一种广泛存在于细胞外基质、血浆及其他体液中的高分子糖蛋白,自1948年Motrison首次发现以来,对FN蛋白水平的研究方兴未艾,并于七、八十年代达到高潮。国内外法医界已将FN蛋白水平的变化应用于生前死后伤及创伤时间推断。1983年Knornblihtt等通过人Hs578T细胞RNA的提取获得了FNCDNA[1],拉开了FN基因研究的序幕;此后,先后发现了FNmRNA前体（pre－mRNA）可在两个不同位点上剪接而形成多种异型体[2-4];1987年Schwarzbauer与Zardi又先后在大鼠和人FN基因中发现第三个剪接位点[5,6],FN…     

纤维连接蛋白EDA片段的剪接表达及其功能研究进展

纤维连接蛋白是广泛存在于细胞外基质、血浆及其它体液中一种糖蛋白,其基因在三个区域进行可变剪接,分别为EDA、EDB和IIICS。EDA片段对增强纤维连接蛋白促进细胞粘附、迁移、分化及增殖等功能具有重要的作用。本文就纤维连接蛋白EDA片段的剪接调节、生物学活性及其应用展望做一探讨。     

EIIIA＋纤维连接蛋白在大鼠皮肤切创的表达

目的：探讨大鼠皮肤切创纤维连接蛋白EIIIA片段的表达与损伤时间的关系。方法取48只成年SD大鼠并切割大鼠背部皮肤致伤。于伤后即刻、0.5h、1h、2h、3h、4h、6h、8h共8个时间段分别处死大鼠,取其创伤周围皮肤,利用免疫组织化学方法和Western印迹法检测EIIIA＋纤维连接蛋白,观察其表达水平与损伤时间的关系。结果伤后即刻未出现EIIIA＋纤维连接蛋白的表达,伤后0.5 h,皮肤基底细胞开始出现阳性表达,随损伤时间的延长,阳性着色持续增强。 Western印迹法检测发现,所测得的相对光密度值随损伤时间的延长而逐渐增高。结论 EIIIA片段表达变化可以作为法医学早期损伤时间的推断指标。     

Fn-EⅢA金标试纸条进行损伤时间推断的效果评价

目的评价Fn-EⅢA金标单克隆抗体试纸条在人体皮肤组织损伤时间推断中的有效性和灵敏度.方法提取不同损伤时间人体皮肤组织,匀浆,用Fn-EⅢA金标单克隆抗体试纸条检测其Fn-EⅢA的表达,对其结果进行评价;同时,将大鼠挫伤皮肤组织置于自然环境中,分别提取不同自溶时间段的皮肤样本进行检测,对自溶变化对检测结果的影响进行观察.结果正常皮肤组织样本中试纸条检测线不显色,损伤1h后即显色,随损伤时间延长,试纸条检测线有显色逐渐加深的趋势;在观察时间段内,组织自溶对检测结果无显著影响.结论Fn-EⅢA金标单克隆抗体试纸条可作为法医学损伤时间推断敏感、稳定的检测手段.     

人皮肤成纤维细胞早期损伤后EDA-FN表达与损伤时间的关系

目的探讨培养的人体皮肤成纤维细胞损伤后纤维连接蛋白EDA片段的表达情况与损伤时间的关系。方法培养人体皮肤成纤维细胞,利用单克隆抗体进行免疫组织化学染色及Western检测。结果培养中的人体成纤维细胞可以微量表达EDA,随损伤时间延长而表达量增加。结论EDA片段表达变化可以作为法医学早期损伤时间推断的比较理想的指标。     

纤维连接蛋白Ⅲ CS片段的剪接、表达以及与创伤修复的关系

纤维连接蛋白在创伤愈合中具有重要的作用 , 其基因在三个区域进行可变剪接 , 分别命名为 EⅢ A,EⅢ B和Ⅲ CS. 它们的功能仍有待于研究 . 本文就纤维连接蛋白的可变剪接片段Ⅲ cs的生物学活性及其在法医学中的应用展望做一粗浅的探讨 .     

人体皮肤切创纤维连接蛋白EDA、EDB的表达与损伤时间关系的研究

目的研究纤维连接蛋白(fibronectin,FN)可变剪接片段EDA、EDB在人体皮肤切创的表达情况,并摸索EDA、EDBmRNA在离体皮肤上最长检出时限,以期为早期损伤时间的推断提供实用的参考指标。方法采用DIG标记的反意RNA探针,原位杂交检测人体皮肤在损伤早期(从30min开始)FNEDA、EDBmRNA表达的变化。结果正常人体皮肤无EDA、EDBmRNA表达;在损伤早期(≤3h)FNEDA、EDB的表达随时间的延长而呈现一种不断上升的趋势;EDA、EDBmRNA主要出现在表皮基底层细胞;EDA、EDBmRNA在标本离体后4h就不能检测到。结论FNEDA、EDB可作为早期损伤时间推断的较理想的参考指标,但原位杂交的检测方法不适用于实际应用。     

The expression of splicing fibronectin variants of cutaneous injuries in rats

In situ hybridization with Digoxingenin labeled probes were used to build the relationship between incised cutaneous wounding intervals and the expression of splicing fibronectin variants (total, E III A and E III B Variants) in rats. The results showed that all forms of FN variants increased notably with the wounding time going on. E III A and E III B Variants were expressed abundantly 30 and 60 minutes after injury, while few in normal skin.     

大鼠脑挫伤后FN表达与损伤时程关系的研究

为寻找推断脑损伤经历时间的可靠指标,采用自制自由落体撞击法致大鼠右顶叶局灶性脑挫伤模型,于不同时间段处死大鼠后,进行纤维连接蛋白的免疫组织化学及原位杂交法研究,结果发现纤维连接蛋白及其 mRNA表达水平与伤后经历时间有一定相关性,并能较好地鉴别死前脑挫伤和死后脑挫伤,可作为推断脑挫伤经历时间的参考指标之一。     

Fn-EIIIA金标试纸条进行损伤时间推断的效果评价

目的评价Fn-EIIIA金标单克隆抗体试纸条在人体皮肤组织损伤时间推断中的有效性和灵敏度。方法提取不同损伤时间人体皮肤组织,匀浆,用Fn-EIIIA金标单克隆抗体试纸条检测其Fn-EIIIA的表达,对其结果进行评价;同时,将大鼠挫伤皮肤组织置于自然环境中,分别提取不同自溶时间段的皮肤样本进行检测,对自溶变化对检测结果的影响进行观察。结果正常皮肤组织样本中试纸条检测线不显色,损伤1h后即显色,随损伤时间延长,试纸条检测线有显色逐渐加深的趋势;在观察时间段内,组织自溶对检测结果无显著影响。结论Fn-EIIIA金标单克隆抗体试纸条可作为法医学损伤时间推断敏感、稳定的检测手段。     

大鼠弥漫性轴索损伤后NGF表达

目的研究大鼠弥漫性轴索损伤后神经生长因子（NGF）表达的时间变化规律及意义。方法采用SD雄性大鼠复制弥漫性轴索损伤（DAI）模型,分别于伤后1、3、6、12、24、48h和3、7d取脑组织,应用免疫组织化学法对DAI后不同时间段大脑皮层、丘脑、小脑和海马部位NGF的表达变化进行观察并与正常组、假手术组对照。结果正常及假手术组大鼠大脑皮层、丘脑、小脑、海马均有少量NGF的表达。打击后1hNGF表达增强,12h达高峰,3d开始下降,7d降至正常。结论NGF参与弥漫性轴索损伤后的修复：NGF的时序性变化有望成为法医学脑损伤时间推断的客观指标。