单克隆抗体在法血清学上的应用及其制备方法的进展（综述）

血制和酶型等遗传标记在法医学个人识别与亲权鉴定中有着广泛的应用,目前,一般用免疫学方法和电泳技术对其进行测定,前者需用抗血清,其来源有二:1)天然抗体的分离,如抗-A 抗体可从螺丝和B 型血清中提取.抗-B 抗体可从霉菌和 A 型血清中提取,抗-H 抗体可以从鳝鱼血和荆豆种子浸出液中提取,抗-P 抗体可从山羊、猪等动物的血清中分离得     

单克隆抗M、抗N抗体的研制及初步应用

用人血型糖蛋白 A 和人红细胞分别免疫 BALB/C 小鼠。用被免疫的 BALB/C 小鼠脾细胞与 SP2/0骨髓瘤细胞融合,在37℃、5%二氧化碳培养箱中孵育10～15天,然后用 OM 和 ON 型指示红细胞分别检测培养上清液的凝集情况,筛选出能分泌高特异性和高效价抗 M 和抗 N 抗体的细胞株,并建立了 GM_4H3、GM_4H_4、N_2A_3和 N_2D_(10)细胞株。这些细胞株可持续分泌免疫球蛋白 G 类抗 M、抗 N 抗体。应用这些抗体,通过血凝法、解离法和 ELISA 斑点法,可进行血及血痕的 MN 分型。在血型检验中,优于多克隆抗 M、抗N 血清。     

抗Le~a和抗Le~b血清的研制

利用进口抗Le~a、Le~b血清筛选OLe(a+b-)和OLe(a-b+)型人,测定其唾液中Le~a和Le~b型物质含量,择其型物质含量高者唾液,用家兔和山羊免疫,合格后采全血,分离血清,用O、A、B型红细胞吸收、除去种属及α和β等凝集素。再用O型Le非相应型红细胞吸收,精制出含不完全抗体的抗Le~a和抗Le~b血清。该血清对Le相应型红细胞均产生明显凝集反应,而不发生非特异的交叉凝集反应。经过盲测鉴定,17份红细胞的Lewis型测定完全准确。制备的抗Le~a和抗Le~b血清在效价和特异性方面达到了引进的同种血清水平,填补了我国抗Le~a、抗Le~b血清制造的空白。     

制备抗人精液特异蛋白P30血清的研究

作者以精浆特异蛋白P30为抗原免疫新西兰白兔、豚鼠和鸡三种实验动物,制备了抗P30血清。用双向琼脂扩散法检测兔和豚鼠的抗 P30血清,其特异性和敏感性均达到目前国外同类产品的水平。抗 P30血清与阴道分泌物,血清、唾液、尿液、初乳以及羊精液、鸡精液均不出现交叉反应。用抗 P30血清检测混合的人精浆,其抗原效价为1:160;P30含量可测到12.5ug/ml。在三种动物的抗血清中,豚鼠抗 P30血清的抗体效价最高。以不同浓度的 P30测豚鼠、兔和鸡抗 P30血清抗体效价豚鼠平均滴度可达52.50,兔次之,鸡的抗 P30血清最差。经作者制备的抗 P30血清可用来确证精液。     

各种抗血清制品的购置与保存

法医物证检验中的血清制品是由全血、细胞、血清及各种试剂经过一定技术处理制作而产生的,常用的有:抗人精血清、抗人Hb血清、抗动物血清以及各种单克隆抗体等,这些血清不仅适用于各大中城市的法医技术部门,也适用于区县局条件设备较差的法医技术部门.在历年来的检验案件过程中都发挥了重要的作用,实际工作中各种血清制品的购置与保存关系到抗体的有效使用,直接影响物证检验的结果,近年来,公安部物证鉴     

抗人N单克隆抗体的制备及其特性的研究

用ON型人红细胞免疫BALB/c小鼠脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,获得分泌IgM类抗人N单克隆抗体杂交瘤细胞株(ON_1D_3)。其培养上清液抗体效价为128～256,诱生小鼠腹水的抗体效价为8192;与Panel A红细胞反应呈抗N特异性;检测273名成人红细胞,只特异性凝集N(?)MN型人红细胞,不凝集M型红细胞。与猴等9种动物红细胞无交叉反应;酶修饰试验结果表明,ON_1D_3识别的抗原决定簇是唾液酸依赖性的。     

血痕载体对ABO血型检验的影响

在一些刑事案件中,由于受到案发现场与当时环境所限,有时还缺乏对血痕规范化提取的认识和把握,从而致使现场提取的血痕所用载体种类各异,不仅给检验过程带来了诸多不必要的麻烦,而且对检验结果的判定也会造成不同程度的影响。本文就检案过程中经常遇到的检材载体作一初步对比分析。1　检　材随机抽取既往办案过程中保留存放下来的检材138份:其中医用纱布为载体的检材77份;化纤类为载体的检材2 7份;脱脂棉为载体的检材16份;卫生纸为载体的检材18份。2　试剂及方法血清采用公安部物证鉴定中心制备的标准抗A、抗B、抗H血清。指示红细胞采用新…     

应用血膜热解离法检测体液斑ABO血型

血膜热解离法检验体液斑中的ABO型物质，具有操作简单、检验时间短、灵敏、特异性高等优点，而且与中和法相比具有节省检材的特点，在实际检验中取得了较好的效果。材料和方法一、实验材料1.已知血型的人唾液斑、精斑、阴道分泌物斑纱布各1（）份（从医院提取）；2抗A、抗B血清（淮北市公安局血清室提供）；3‘）型血痕纱布（采耳血涂在白绷带纱布上，室温保存，最长为1年）。二、实验方法（一）血膜热解离法检测体液斑ABt）血型l取ZCC长唾液斑、精斑、阴道分泌物斑纱线加入本理盐水3滴浸泡半小时或充分搅拌，取二满分别满于载被片两侧…     

Lewis血型与ABH血型物质

<正> 1946年Mourant发现能凝集约22％白种人红细胞的一种新抗体,称之为抗Le~a抗体。1948年Andresen发现与抗Le~a显示对立关系的另一种新抗体,称之为抗Le~b抗体。根据人的红细胞与这两种抗体有无发生凝集可以     

利用人唾液做基础吸收精制抗N血清

本文介绍先采用人唾液对粗制抗N血清做基础吸收后,再通过红细胞抗原进行精制的一种新方法。精制的抗N血清具有效价高、特异性好的特点,且减少了因用人红细胞重复吸收而引起的溶血反应。     

用荧光抗体法作血痕的种属鉴定

血痕的种属鉴定,最早是应用抗人血清作环状沉淀试验,后来使用特异性更好的抗人血红蛋白沉淀素血清替代抗人血清作各种沉淀试验.此外,还有应用抗人球蛋白消耗试验、间接血凝试验法、胶乳载体试验法.近来,随着免疫学实验技术的发展,应用酶联免疫技术等检测人血液中各种特异组分作血痕的种属鉴识.本文使用荧光标记抗体检测人血痕中的IgG组分,作人血和动物血的鉴别,取得较好结果,现将实验报告如下:     

动物血及腐败细菌对人血ABO型检验的干扰

在侦破凶杀、伤害、抢劫等案件的有关血痕ABO型检验中，常遇到动物血或腐败细菌污染检材的情况。由于动物血中的AB型物质或细菌中类人血型物质的干扰，影响了人血痕ABO分型检验的准确性。笔者经过大量的实验，证明了利用单克隆抗体代替多克隆抗体进行ABO血型检验，可以有效地防止上述干扰，使检验结果准确可靠。现报道如下。材料与方法1．抗体（1）人执地执B血清，效价128倍。（2）单克隆抗A、抗B血清，效价128倍。2·样品制备（1败集马、驴、骡、牛、猪、狗、山羊、兔、鸡、鸭、鹅、鼠、鳝鱼、草鱼、鲤鱼、罗非鱼等16种动物血，制成…     

关于兔抗人血清常规制备方法的改进

目前在法医物证检验中,应用动物的抗人血清做沉淀试验来鉴别人血与兽血仍是一种常用的方法。以往,我们免疫抗人血清常用的是较大剂量凝固血清免疫的方法或用新鲜人血清免疫的方法,所获得的抗体血清效价一般为10000～20000倍,并且非特异性较强,免疫过程中,易出现过敏死亡现象。我们经过反复试验,改进了免疫程、抗原量以及免疫动物的选择,制备出了     

保存不同期限抗M和抗N抗血清的检测

笔者观察了从1976年以来本研究室保存的抗M、抗N抗血清效价及特异性变化情况,以液体及冻干两种保存方式进行比较并检测,发现虽然有的效价、特异性发生了变化,但在同一条件下有些抗血清并不因保存年限的长短和保存方式的不同而有显著变化.甚至有的抗血清经20年保存其效价、特异性不变,实验方法及过程如下.材料和方法1.材料1976年以来冰箱冷藏保存、不同年份研制的抗M、抗N抗血清;人新鲜1%OM1、ON红血球指示细胞;凹玻板.     

人类A、B抗原单克隆抗体的研制和初步应用

作者用人类A、B型红细胞及A、B型分泌型唾液免疫8周龄的BALB/C小鼠,用经免疫的脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,用血凝法筛选出分泌抗A抗体和抗B抗体的细胞株各3株。经一年多的传代,仍然能稳定地分泌抗A、抗B抗体,抗体特异性专一,培养上清液效价能达到2048倍,并初步应用于血液及体液(斑)的检验。     

鼠抗人转铁蛋白单链抗体基因的构建

目的为了得到可经载体连接表达、并只由抗体可变区构成的单链抗体基因而进行本实验.方法经扩增得到的鼠抗人转铁蛋白抗体轻、重链可变区基因经凝胶电泳分离、离心柱纯化及定量,同能柔性折叠的一段短连接肽基因一起进行扩增拼接反应,而后在含限切酶位点的引物指导下扩增引入限切酶SfiI和NotI的酶切位点识别序列,产物以电泳鉴定、纯化和定量,再分别用SfiI和NotI酶切消化,最后再柱纯化.结果得到了携带可与载体连接的粘性末端的鼠抗人转铁蛋白单链抗体基因.结论两个不同的基因通过两端含互补序列的第三个基因片断可只经过扩增而无需DNA连接酶的作用而连接起来.对于抗体基因可由此而产生新的轻重链基因的组合,有可能产生性能更优异的抗体.     

蝮蛇蛇毒的检验

以免疫对流电泳方法,利用抗蝮蛇蛇毒血清检测蝮蛇咬伤中毒死亡者的血清,在电场作用下,能形成抗原与抗体反应的特异沉淀线,完成快速的检测。     

胶乳凝集试验及其在精斑检验中的应用

<正> 精斑检验在鉴定法医学性犯罪案件中有很重要的作用,精斑确证试验的方法主要有:形态学方法、化学方法、生物化学方法及免疫学方法。这些方法各有其优点和一定的局限性,目前仍较多地采用精子检出法和抗人精液血清琼脂双扩,而输精管结扎术者及精子缺乏症者其精斑中无精子,抗人精液血清特异性不够好便难以检出。近几年来用特异性抗-P30血清作     

改良酶免疫技术检测精斑ORM_1型

血清类粘蛋白（orosomucoid，ORM），属人类血清a1球蛋白，分子量41kd。Tokita等（1963）[1]首次发现ORM遗传学多态性后，Yuasa等[2]应用等电聚焦成功检测ORM；和ORM；两座位产物[2]。Harada（1989）．、苟清（1993）等分别于1989年和1993年应用等电聚焦技术检测了精斑ORM；的表型[4,5]，在此基础上，本文作者对苟清等[4]的精斑ORM；型检测方法作了改进，采用类似Sonthern转移方法提高酶谱带转移效率，显色中用一抗和酶标二抗处理过程中增加震荡步骤，以提高抗体结合速率，缩短检测时间，提高检测灵敏度，获得满意效果，现报告如下…     

ELISA检测精浆特异蛋白P_(30)鉴定人精斑

<正> 1978年美国Sensabaugh分离出精浆特异蛋白P30,并成功的制备出相应的抗P30血清。1987年我国也研制出抗人精浆特异蛋白P30血清,并应用该种抗血清建立了几种琼脂扩散和电泳方法鉴定人精斑。由于人精液中P30含量不高,平均为1.52±0.676mg/ml,鉴定微量精斑存在困难。为了更有效的提高方法的灵敏度。我们建立了鉴定微量人精斑的ELISA固相P30抗体法,现报告如下。