魏氏梭菌病四联浓缩灭活疫苗免疫动物血清抗体测定

魏氏梭菌病四联浓缩灭活疫苗免疫动物血清抗体测定马乐英杨爱玲吕红蒋祯罗显驿（农业部兰州生物药厂７３００４６）为检验兰州生物药厂研制的浓缩魏氏梭菌病即产气荚膜梭菌病四联灭活疫苗的免疫效果，我们抽检中试生产的若干批疫苗免疫黄牛、家兔和绵羊，用小白鼠测定了血...     

牛产气荚膜梭菌病三价浓缩灭活苗免疫效力试验及免疫持续期测定

兰州生物药厂研制的牛产气荚膜梭菌三价浓缩灭活苗 ,经免疫动物血清抗体测定及本动物试验 ,效果良好。为了解血清抗体水平与攻毒耐受力间的关系及对本动物的免疫持续期 ,特进行了本试验。1　试验材料1.1　疫苗　牛产气荚膜梭菌三价浓缩灭活苗 ,共 3批 ,即960 2、960 6和 9610批。1.2　毒素　产气荚膜梭菌Ａ、Ｃ、Ｄ型毒素 ,小白鼠静脉测定毒价分别为 5 0 0、3 3 3和 2 0 0 0ＭＬＤ/ｍＬ。1.3　试验牛　免疫效力试验用 1岁以内黄牛 ,体重 80ｋｇ左右 ,性别、毛色不限 ,购自甘肃省临洮县 ;免疫持续期试验用临洮县农户所养的乳牛。2　方法与结…     

宁夏家畜产气荚膜梭菌病病原诊断和疫苗免疫研究

１９９０年宁夏泾源县暴发了以牛急性死亡为特征的传染病，以后疫区逐年扩大，发病数与死亡数日趋增多。１９９７年底疫区扩大到１０余个县，死亡牛２０００多头，同时驴和骡也出现发病、死亡，这种病因不明的“猝死症”已给当地的畜牧业生产造成了较大损失。现已查明，引起以牛为主发生急性死亡的疫病是由产气荚膜梭菌引起的肠毒血症，经用产气荚膜梭菌抗毒素对小白鼠进行中和试验，鉴定出Ａ，Ｃ和Ｄ型肠毒素。１９９６年以后，选用产气荚膜梭菌多价疫苗和多联浓缩疫苗对发病地区的牛及马属动物进行兔疫预防，获得较好的效果。     

梅花鹿肠毒血症的细菌学鉴定

梅花鹿肠毒血症的细菌学鉴定俞乃胜，李光宗，韦剑珊，段志华，黄小华（云南农业大学昆明６５０２０１）（云南省粮油储备库鹿场）鹿产气荚膜杆菌（魏氏梭菌）肠毒血症，其病原菌有５个血清型，国外曾报道过鹿Ｃ型产气荚膜杆菌肠毒血症和梅花鹿Ａ型产气荚膜杆菌引起的坏死...     

表达CPB-ST融合蛋白工程菌株的免疫原性研究

已构建的能表达产气荚膜梭菌β毒素（ＣＰＢ）和大肠埃希氏菌ＳＴ融合蛋白（ＣＰＢＳＴ）的基因工程菌株ＢＬ２１（ＤＥ３，ｐＥＣＢＳＴ１）及其表达产物经动物试验证实没有毒性反应。用从ＩＰＴＧ诱导的工程菌株中提取的包涵体和经甲醛灭活的工程菌株全菌体制备抗原免疫小白鼠，攻毒试验结果表明，免疫小白鼠能分别抵抗１ＭＬＤ的Ｂ型产气荚膜梭菌强毒株（Ｃ５８－１）和产ＳＴ的大肠埃希氏菌工程菌株ＨＢ１０１（ｐＳＬＭ００４）的攻击。用灭活的全菌体免疫家兔后，其免疫血清能中和产气荚膜梭菌β毒素和大肠埃希氏菌ＳＴ的毒素活性。结果表明，构建的基因工程菌株ＢＬ２１（ＤＥ３，ｐＥＣＢＳＴ１）可以作为预防由产气荚膜梭菌β毒素和大肠埃希氏菌ＳＴ引起的幼畜腹泻的基因工程苗侯选菌株。     

鸡传染性支气管炎血凝抗原不同浓缩方法的比较

鸡传染性支气管炎血凝抗原不同浓缩方法的比较刘长辉田仁位段印祥刘毅（天津市禽病诊断中心３００４０２近年来传染性支气管炎（ＩＢ）给养鸡业造成的损失呈上升趋势，各鸡场普便重视对ＩＢ的防制，开展了ＩＢ抗体监测。我们曾用Ｃ型产气荚膜梭菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ...     

鸡产气荚膜梭菌遗传多样性的REP-PCR分析

为探讨鸡产气荚膜梭菌流行现状的调查方法,采用REP-PCR(repetitive extragenic palindromicPCR)技术对四川省10个规模化鸡场分离得到的34株A型产气荚膜梭菌进行了遗传多样性分析,并与AFLP(amplified fragment length polymorphism)方法进行了分型比较.结果显示,尽管REP-PCR分型方法只能将34株产气荚膜梭菌分为7个亚型,但是,仍然表现出对产气荚膜梭工菌菌株的较高的鉴别能力,不失为一种简便、快速、可靠的产气荚膜梭菌分型方法.经对亚型分布情况进行分析.表明产气荚膜梭菌的流行特点与地区差异相关,不同鸡场产气荚膜梭菌的亚型差异明显,而同一鸡场的亚型较单一,以一种亚型为主,交叉有少数其他亚型;优势基因型为REP-PCR基因1型、2型和3型.证实,REP-PCR技术适用于鸡产气荚膜梭菌遗传多样性分析.     

A型产气荚膜梭菌引起的雏鸡急性肠炎的诊断

已知A、B、C、D、E各型产气荚膜梭菌可对牛、羊、猪及人致病。K(?)hler(1971)认为民主德国的鹌鹑病(家禽的溃疡性肠炎)的病原是一些A型产气荚膜梭菌的强毒菌株。国内因A型产气荚膜梭菌引起鸡的疾病报导罕见。1983年在新疆石河子星火公社某农家所养的30～40日龄雏鸡突然发病死亡,经作者诊断为A型产气荚膜梭菌引起的雏鸡急性肠炎。     

鲜猪肉中A型产气荚膜梭菌污染情况调查

对贵阳市部分市场销售的鲜猪肉A型产气荚膜梭菌的污染情况进行了调查 ,从被检肉样中分离获得 3株A型产气荚膜梭菌 ,分离率为 6.2 5 % (3 /4 8)。表明贵阳市部分市场销售的鲜猪肉存在A型产气荚膜梭菌的污染 ,对消费者的健康构成潜在的威胁     

犬产气荚膜梭菌的分离和PCR检测方法的建立

从 12头疑似产气荚膜梭菌感染的猝死警犬中分离获得了 18株病原菌 ,经生化试验及毒素中和试验 ,确定为A型和C型产气荚膜梭菌。参考GenBank中登录的基因序列 ,设计合成了针对产气荚膜梭菌α、β、ε、ι、CPE和 β2共 6对分型毒素基因的引物 ,对以前昆明地区分离的 1株产气荚膜梭菌进行了PCR扩增 ,结果扩增出了与预期大小相同的 6个基因片段 ,分别为 2 33、196、32 4、4 46、5 6 7和 6 6 5bp。建立的PCR方法能同时用于产气荚膜梭菌鉴定和毒素分型 ,较细菌毒素检测方法快速 ,与细菌分离鉴定的结果一致。     

鹳源产气荚膜梭菌的分离及其生化特性鉴定

从病死鹳的肝和肠分离出疑似产气荚膜梭菌,纯化后进行革兰染色、生化试验、16S rDNA基因序列分析和毒素鉴定、动物试验及药敏试验。结果表明,分离的菌株为革兰阳性杆菌,能够发酵甘露糖和麦芽糖等糖类,不能发酵棉子糖和甘露醇;16S rDNA基因序列分析确定为产气荚膜梭菌序列;多重PCR结果显示,该菌仅含有α毒素基因,因而确定分离菌为A型产气荚膜梭菌。动物试验结果显示,将该产气荚膜梭菌灌服鸡48 h后,鸡肠道有较多出血点,但未表现坏死性肠炎症状。药敏试验结果显示,该菌对阿莫西林、头孢哌酮、氟苯尼考、美洛西林等药物敏感,对多黏菌素B、链霉素、卡那霉素等药物不敏感,对环丙沙星和庆大霉素中敏。     

产气荚膜梭菌β毒素和ε毒素以及腐败梭菌α毒素三联基因工程灭活疫苗的制备与免疫效力评价

为了获得高表达量的重组C型产气荚膜梭菌β毒素,鉴定其致死性和反应原性,并评价其与D型产气荚膜梭菌ε毒素和腐败梭菌α毒素共表达产物联合制成三联基因工程灭活疫苗的免疫保护效力。设计含不同酶切位点的2对引物,PCR扩增C型产气荚膜梭菌β毒素基因cpb1和cpb2,将二者克隆至pRSFDuet-1质粒,转化大肠杆菌BL21 (DE3),自诱导培养基诱导2段基因共表达。用SDS-PAGE和Western-blot以及小鼠毒性试验、抗毒素血清和中和试验对表达产物进行鉴定。将诱导收获的大肠杆菌以及D型产气荚膜梭菌ε毒素和腐败梭菌α毒素的共表达产物1∶2配比灭活制成三联灭活铝佐剂疫苗,以每只1 m L剂量皮下免疫家兔2次后,测定血清中和抗体效价,用1 MLD的C、D型产气荚膜梭菌毒素和腐败梭菌毒素分别攻击。结果显示,所构建的重组大肠杆菌BL21(pRSFDuet-cpb1-cpb2)能够表达重组β毒素,产物能够与C型产气荚膜梭菌抗毒素血清反应,且具有小鼠致死毒性,抗毒素血清可以将其毒性中和;制成联合疫苗免疫家兔,免疫血清对C型产气荚膜梭菌毒素的中和抗体效价为8 MLD/0.1 m L,对D型产气荚膜梭菌毒素的中和抗体效价为45 MLD/0.1 m L,对腐败梭菌毒素的中和抗体效价为1.5 MLD/0.1 m L;用3种毒素攻击免疫组家兔均全部保护,对照组全部死亡,达到《中华人民共和国兽药典三部(2015版)》效力检验标准。本研究为羊猝狙、肠毒血症和快疫三联疫苗的研制提供了试验基础。     

牛产气荚膜梭菌病自然病例的病理学观察

牛产气荚膜梭菌病是由产气荚膜梭菌引起的条件性高度致死性传染病 ,其特征是发病急 ,病程短 ,死亡快。本病病原血清型主要是A型 ,也有C型和D型。 2 0世纪 90年代 ,该病在我国频繁发生 ,给养牛业造成较大经济损失。为探讨本病的病理变化特征和发展规律 ,给诊断该病提供科学依据 ,笔者对病原分离鉴定为产气荚膜梭菌的自然病死牛的组织病理学变化进行了观察。1　材料和方法1.1　病料采集　对经流行病学调查、临床症状观察疑似产气荚膜梭菌病的自然病死牛立即解剖 ,无菌采集肝、脾、肠系膜淋巴结以及病变小肠 15cm以上 ,系统观察各实质脏器的…     

牛源B型产气荚膜梭菌的分离鉴定与毒力基因检测

为探究内蒙古通辽市某牛场牛猝死的原因,本研究采集病死牛肠道内容物,分别进行革兰染色镜检、全自动微生物分析系统检测、16S rRNA基因扩增、毒力基因检测及系统进化树分析、动物致病性试验、半数致死量试验。结果显示,分离菌形态、生化特性符合产气荚膜梭菌的特性;16S rRNA基因序列与GenBank中已登录的产气荚膜梭菌的同源性为99%,系统进化树分析该分离菌与B型产气荚膜梭菌的亲缘性最近;3种毒力基因在该致病菌中均被检测到;分离菌对小鼠有致死性;该菌对小鼠半数致死的浓度为2.27×10~7CFU/mL;药敏结果显示,分离菌株对多黏菌素、庆大霉素等药物敏感,对卡那霉素等药物中度敏感,对头孢他啶、阿莫西林等药物耐药。该致病菌经鉴定,确定为B型产气荚膜梭菌,毒力基因分别为α、β_2和ε毒素。     

猪A型产气荚膜梭菌病的诊治

猪Ａ型产气荚膜梭菌病的诊治刘金章翟国东郑忠志（河南省西华县黄泛区牧业总公司４６６６３２）张清海朱光明邱永敏（黄泛区兽医化验室）某牧业公司下属的４个万头猪场，自１９９６年８月开始，先在其中１个商品猪场发生零星猝死和顽固性腹泻为主要症状的疾病，之后在另外...     

A型产气荚膜梭菌最佳产毒时间的确定

测定了A型产气荚膜梭菌在庖肉培养基的生长曲线、培养液的pH值变化曲线以及不同培养时间提取的毒素液的蛋白质含量、溶血活性及卵磷脂酶活性。结果表明 ,A型产气荚膜梭菌在庖肉培养基培养 8h是其α 毒素的最佳产毒时间。     

产气荚膜梭菌α毒素和ε毒素的共表达及其免疫原性的研究

利用PCR技术从D型产气荚膜梭菌标准株C60-2基因组中扩增出α毒素基因CPA和ε毒素基因ETX。然后将CPA、ETX分别插到双表达载体pETDuet-1上,成功构建重组质粒pETDuet-1-CPAETX。将重组质粒pETDuet-1-CPA-ETX转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,菌体蛋白样品经SDS-PAGE分析,可见43ku和34ku两条特异性条带,表明插入基因得到了表达。Western-blot结果显示,共表达的α毒素和ε毒素蛋白均能与抗毒素抗体发生反应,具有很好的反应原性。用共表达的α、ε毒素蛋白免疫小鼠,可使其血清中产生较高浓度的中和抗体,且能抵抗D型产气荚膜梭菌培养液上清的攻击,免疫保护效果明显优于ε毒素蛋白单独免疫的保护效果。以上结果表明,本研究构建的产气荚膜梭菌α、ε毒素蛋白共表达体系可以用于D型产气荚膜梭菌毒素疫苗的制备,为预防多血清型病原的多价疫苗的研制提供了思路。     

家畜产气荚膜梭菌病免疫预防试验

家畜产气荚膜梭菌病免疫预防试验陈洪科侯安祖李玉兰靳冬（河南省兽医防治站郑州４５０００２）１９８５年，在河南省周口、商丘等地的黄牛零星发生以发病急、死亡快、致死率高、实质器官严重出血为特征的猝死症，仅见于犊牛，其他家畜没有发病死亡。１９９２年以后，该病...     

岩羊病原性大肠埃希氏菌及A型产气荚膜梭菌的分离与鉴定

从1只突然死亡的1月龄雄性岩羊体内分离到1株病原性大肠埃希氏菌和1株A型产气荚膜梭菌,经毒力试验测得大肠埃希氏菌LD50为4.4×108CFU,A型产气荚膜梭菌LD50为6.1×109CFU,同时进行了药敏试验,为今后预防和诊疗提供理论基础.     

应用随机扩增多态性DNA技术对产气荚膜梭菌的基因分型

采用随机扩增多态性DNA(randomly amplied polymorphic DNA,RAPD)技术对产气荚膜梭菌进行PCR扩增.结果,产气荚膜梭菌A、B、C、D 4个型均可扩增出约430 bp的条带,B、C型还扩增出约210 bp的条带,B、D型还扩增出约1210 bp的条带,A型还扩增出约240 bp和690 bp的条带,各型之间的条带差别明显.