微量PCR反应体系在两种试剂盒中的应用

美国AB I公司的Profiler PlusTM试剂盒和Identifi-lerTM试剂盒在当前法医DNA检案中应用广泛,但价格昂贵。本实验利用5μl体系进行PCR扩增取得满意效果,降低了检验成本。1材料与方法1.1材料法医DNA检案中常规检材,血痕、精斑、烟蒂和毛发(带毛囊)各20份。Profiler PlusTM试剂盒和IdentifilerTM试剂盒(AB I,USA)。1.2方法1.2.1 DNA提取上述检材采用Chelex-100法[1]提取模板DNA。取9mm2血痕加入5%Chelex-100150μl,56℃2h;精斑经两步法视镜检精子量多少酌情加入5%Chelex-100 150~250μl,PK 10μl(2mg/m l),DTT 10μl(1mol/L…     

Chelex-100提取生物检材DNA实时PCR定量研究

目的研究Chelex-100法提取的生物检材DNA用量与复合STR分型成功率的关系。方法113份各种生物检材采用Chelex-100法提取DNA，应用Quantifiler人类DNA定量试剂盒在ABI 7500荧光定量PCR仪上进行实时PCR定量，同时用Identifiler复合扩增系统在ABI 3100遗传分析仪上对这些DNA样品进行STR分型。结果各种生物检材提取的DNA浓度分别为：37份滤纸、纱布血痕0．042～5．28ng／μl，16份口腔拭子1．15—4．21ng／μl，18份烟头0．016～1．46ng／μl，10份肋软骨0．531—14．40ng／μl，8份肌肉5．75—24．80ng／μl，7份指甲0．788—11．50ng／μl，17份精斑0．79～99．50ng／μl。在建立的8μl扩增体系中，根据上述结果，调整用于复合STR扩增的DNA模板量在0．5—3ng之间，大部分样品可获得完全的STR分型。结论Chelex-100法提取的检材DNA模板用量在0．5—3ng之间可得到有效STR扩增，浓度为0．5ng／μl以上的DNA样品，用小体积模板（1μl）比大体积（3μl）模板扩增效果好。     

尿斑的DNA检验1例

1案件简价2006年1月,南方某市一女子被杀;警方在现场勘查中提取到一件部分被液体浸泡的有色毛衣(经当地鉴定该液体为尿液)。为确定这份尿斑为何人所留,办案单位于半年后将以上检材送检,要求进行DNA鉴定。2检验方法检材为现场提取的毛衣1件。在毛衣被液体浸泡之处(有黄色斑迹)分别剪取2处1cm2大小的斑迹(编号为1、1R)各置于1.5ml空离心管中,加入500μl磁珠裂解液(Promega公司)和20μl PK(5mol/L),56℃保温1h,13000r/min离心3min,吸取上清,移入干净的离心管中,此后依照DNA IQTMsystem进行DNA提取,方法详见试剂盒说明书,最后用20μl的…     

硅珠法提取DNA在强奸案中的应用

通常情况下进行混合斑中精子DNA的提取采用酚－氯仿法及Chelex－１００法,但仍存在一些缺点。本实验室采用了一种新的方法进行精子DNA的提取,取得了较好的效果。介绍如下：１方法１．１试剂的配制犤１犦１．２操作方法（１）剪取精斑检材各约２cm×２cm,分别加入７５０μlTNE溶液、１０％SDS７．５μl及pk７．５μl（１０mg／ml）于１．５ml离心管中,置３７℃水浴１h。套管离心,１１０００r／min离心３min,弃上清液,沉淀用TNE垂悬,离心３min,重复２～３次。（２）沉淀中加入７ ０μlTNE、１０μl十二烷基肌氨酸钠及２μl…     

塑料袋包裹胎儿经福尔马林浸泡4个月后DNA检验1例

某女被强奸致孕,7个月后在医院引产一名男性胎儿。之后,该胎儿用塑料食品袋包裹后浸入福尔马林溶液,4个月后要求进行DNA检验。1 DNA检验1.1取材及其DNA提取纯化用无菌手术剪剪取黄豆粒大小的胎儿大腿深层肌肉组织,切碎后用组织匀浆器匀浆,放入1.5m l离心管内,加入纯水浸泡2h,其间换水1~2次。然后用无水乙醇洗涤2~3次,离心弃上清,室温晾干;沉淀物用去离子纯净水洗涤,加入5%CTAB裂解液500μl及PK(终浓度为400μg/m l),置65℃水浴箱中温浴3 h(其间不时振荡)后取出,100℃变性8m in,离心取上清,加入等体积的氯仿:异戊醇(24∶1)抽提上层DN…     

室外毛巾上腐败血痕STR分析1例报道

1材料与方法1.1案例2006年某日,深圳市某山顶发现一具高度腐败女尸,现场提取一块方形小毛巾(有灰黑色可疑血痕),送检做DNA检测。1.2方法1.2.1提取DNA方法一:常规Chelex-100法[1]提取方形小毛巾上可疑血痕。方法二:应用德国QIAGEN公司生产的BioRo-bot EZ1全自动核酸纯化仪[2](以下简称BioRobotEZ1)提取方形小毛巾上可疑血痕。(1)剪取适量检材,置0.5 ml Eppendorf管中,加入EZ1试剂盒(EZ1 DNA Tissue Kit(48)(Cat.No.953034))中试剂BufferG2 190μl,PK 10μl,56℃裂解30 min,去载体将裂解液转移置2.0 ml样本管中。(2)在BioRobo…     

大体积液体检材过滤装置研发及提取技术

目的研究一种新型的"液体检材过滤提取仪",用于过滤、富集大体积液体检材中的脱落细胞。方法在液体检材过滤提取仪中分别安装8种不同孔径的滤膜(0.45μm、10μm、20μm、30μm、60μm、80μm、120μm的尼龙膜、无纺布),依次过滤、富集64份200 mL洗手水样本;采用M48磁珠法提取滤膜上富集的细胞DNA;再分别对提取到的DNA用7500荧光定量PCR仪进行定量;根据定量结果进行DNA-STR检验。结果 10μm和20μm孔径的尼龙网格膜成为该过滤提取仪首选,无纺布次之。结论 "液体检材过滤提取仪"可用于法庭科学实际案例中大体积液体检材中脱落细胞的过滤、富集。     

瓜子壳上人体脱落细胞DNA检验

<正>1案例资料1.1简要案情2012年12月13日,某镇一村民家被盗,经调查和现场勘验确认遗留在现场的大板瓜子壳为嫌疑人所留,提取该检材要求进行DNA检验。1.2 DNA检验送检瓜子壳多呈两瓣前端张开状态,分析应为进食者以手卡住大板瓜子用门牙所嗑。挑选状态基本一致的瓜子壳数个,剪取尖端,加入5%Chelex-100 120μL及蛋白酶K(20mg/m L)10μL;振荡后56℃孵育1h,     

VNTR-P~(33.6)基因座特殊变异1例

在近期受理的1例亲子鉴定案中,发现P33.6基因座的Amp－FI,P变异,现报道如下,供法医同仁们在实际办案中借鉴。l卖＊摘要1999年3月,某男（56岁,医生）和某女（52岁）协同“女儿”张某（女,33岁,干部）来本室做亲子鉴定。2DNA检验2．l检材可疑父亲某男（l号检材）、可疑女儿张某（2号检材）、可疑母亲某女（3号检材）各3mlEDTA抗凝静脉血。2．2DNA提取用酚、氯仿草取法分别从3份静脉血中提取DNATE溶解备检。2．3DNA检验2．3．IVNTR．PCR取l、2‘3号检材DNA样品,分别扩增pMCT“’、P3’‘、apoB三位点,扩增产物用5％T…     

浙江汉族人群15个STR基因座遗传多态性

本文应用PowerPlex 16荧光标记复合扩增系统,对浙江汉族510名无关个体15个STR基因座进行遗传学调查,现报道如下:1材料与方法1.1样本510名浙江汉族无关个体的血样来自浙江全省各地,系本实验室日常检案积累。1.2实验方法所有血样均采用硅珠法提取DNA[1]。参照文献[2]采用10μl扩增反应体系,其中包括:Gold STR 10×Buffer 1μl,Taq Gold DNA聚合酶0.3μl,10×Primer PairM ix 1μl,模板DNA 1μl(DNA量控制在0.5~1ng),用无菌去离子水补足体系,混匀,稍加离心后置AB I 9700型扩增仪中进行扩增。热循环参数为:95℃11m in,96℃1m in,然…     

犯罪现场尿液DNA检验1例

本文作者对1例犯罪现场案犯遗留的尿液成功进行了DNA检验,现报导如下。1案例资料2005年8月至10月,杭州某区发生系列性盗窃案,多家公司财务室被盗。其中1起盗窃案犯罪现场的光滑磁砖地面上遗留有案犯尿液,勘察人员用医用一次性针筒抽取尿液送检。2005年12月抓获两名犯罪嫌疑人。DNA提取现场尿液混匀后吸取4m l分装于1.5m l Eppendorf管中,高速离心5m in后弃上清,加DDW涡旋震荡洗涤,高速离心5m in后弃上清,重复洗涤1次。将所有沉渣收集于一管内,取2μl涂片染色显微镜镜检检见少量脱落细胞。采用Chelex-100法(加入10%Chelex-100溶液500μl…     

特殊载体上人体细胞DNA检验2例

1案例资料案例1侯某(女,中学生),2002年12月15日晚5时,在放学回家途中遭1名男子强奸。侯某未及时报案,也未保存相关物证检材,给该案侦破带来一定难度。侦查人员在勘查时提取了现场遗留牙刷1把,经侯某回忆犯罪分子当时曾用牙刷捅其下身。检验人员用1根约3~4cm的干净纱线蘸取生理盐水,反复擦拭牙刷柄,并用另1根纱线再反复擦拭1次,将2根纱线一并放入1.5m l离心管中,加200μl生理盐水浸泡、振荡洗涤,12 000 r/m in离心,取上清液进行人血种属试验,结果呈阳性;再向管中加1m l无菌纯水,振荡洗涤,再次离心后去上清,5%Chelex-10050μl和PK 10mg/m l…     

海南黎族群体14个STR基因座遗传多态性

STR基因座是建立DNA数据库首选遗传标记,建库需要针对目标人群做了大量的基因频率调查,本文作者应用公安部物证鉴定中心研发的DNATyperTM15试剂盒,对345个海南黎族无关个体14个基因座进行了调查。1材料与方法样本345份无关个体血样取自看守所内在押海南黎族人,采指尖末梢静脉血滴于滤纸上,阴干保存。DNA提取全部345份检材均选用Chelex-100法提取DNA[1]。复合扩增应用公安部物证鉴定中心研发的DNATyperTM15试剂盒,对14基因座进行复合PCR扩增。扩增体系为B ffer 2.0μl,10×primer 1.0μl,Taq酶0.2μl,灭菌水5.8μl,模板DNA 1.0…     

水中浸泡50余小时口罩上DNA检验1例

1案件简介2005年2月4日凌晨,我省某县发生一起特大入室抢劫杀人案,案发后50多个小时,在距离案发地1km处一农用大口井内打捞出一个沾有大量淤泥的白色口罩及其他相关犯罪物品。我们重点对口罩进行了DNA检验。2检验与结果(1)取适量检材,常规150μl5%的Chelex-100提取DNA。(2)取(1)中DNA50μl以Microcon-100浓缩柱浓缩至10μl,分别以模板DNA1、2μl进行Plus试剂盒扩增(28个循环,10μl体系),结果1μl模板DNA扩增出4 1个位点(见图2-A)。图2 Microcon-100浓缩柱提取的口罩DNA,Plus试剂盒扩增(28个循环,10μl体系)图谱A:模板1μl(3)取(1)…     

大便STR分型检验1例

1案例资料1.1简要案情2012年5月8日,蒋某报案称其住处1台笔记本电脑、1部手机及3 000元人民币被盗。现场勘查在该住宅楼顶天台发现新鲜大便,怀疑为嫌疑人所留。1.2 DNA提取及检验检材提取取消毒无菌棉签2个,沿同一方向轻轻转动擦拭粪便表面,提取后阴干、4℃保存待检。DNA提取使用德国QIAGEN公司EZ1DNA Investigator试剂盒。剪取棉签表面约1/3大小,加入     

磁珠法自动化纯化现场检材DNA方法研究

目的利用TE-MAGS在TECAN工作站上结合磁珠试剂盒,建立自动化工作站批量纯化现场检材DNA的方法,并探讨其在法医物证检案中的应用。方法灵敏度测试:标准品使用0.1ng/μL 9947A,用200μL TES稀释制备DNA总量0.1ng~1ng共10种的标准样品,采用本文方法提取纯化,使用IdentifilerTM试剂盒扩增,用3130XL型测序仪检测,Gene Mapper ID-X分析,分析STR图谱质量;纯化能力测试:在1ng总量的标准样品中加入腐殖酸、血红素,采用本文方法提取纯化、扩增检测,分析STR图谱质量;实际案件应用对比:收集304份现场检材,分别采用本方法和硅珠法进行提取纯化,经扩增检测,统计对比两种提取纯化方法 STR分型成功率。结果灵敏度测试:0.1ng~0.2ng总量标准样品提取的DNA模板,扩增后可检测到部分基因座STR图谱,0.3ng~1ng总量标准样品提取的DNA模板,扩增后可以得到完整的STR图谱;纯化能力测试:对混合有一定浓度的腐殖酸、血红素的标准样品的提取产物检测图谱未见明显抑制;实际案件应用对比测试:304份现场检材工作站磁珠法检出成功率(50%)高于硅珠法(40.8%)。结论本文所建立的方法缓冲范围较大,回收率高,纯化能力强,提取产物STR分型成功率高,适合现场检材批量化DNA检验。     

3种DNA提取法在污染严重混合斑分型中的应用比较

目的比较Chelex-100法、酚/氯仿法和二氧化硅膜法3种DNA提取法在污染严重混合斑分型中的应用效果。方法从日常案例中收集污染严重的混合斑25份,差异消化法分离精子后同时用Chelex-100法、酚/氯仿法和二氧化硅膜技术3种方法提取DNA,采用PCR-STR技术对D19S253、FGA和CSF1PO 3个基因座进行分型,Gel-Pro软件处理电泳图谱,SPSS软件分析比较不同方法之间的差异。结果采用Chelex-100法提取DNA,25份检材分型结果均未成功;采用酚/氯仿法,25份检材中10份分型成功,3份检材FGA和CSF1PO基因座可分型,4份检材CSF1PO基因座可分型;采二氧化硅膜纯化法,25份检材均成功分型;酚/氯仿法和二氧化硅膜法两种方法比较,结果存在显著性差异(P<0.05)。结论二氧化硅膜纯化技术可以有效去除PCR抑制物,提取的DNA扩增效果明显优于Chelex-100法和酚/氯仿法,具有较高的应用价值。     

DNA检验技术在一例强奸案件中的应用

受害人王某报案称某日晚23时30分许喝了很多酒到海洋浴室洗澡,后在包厢休息朦胧中被人强奸。经辨认该浴室保安倪某有重大作案嫌疑,但倪某拒不供认。技术人员提取受害人王某阴道擦试物、案发时受害人王某所穿短裤、受害人王某的血样、犯罪嫌疑人倪某的生殖器(龟头)拭子及其血样要求做DNA检验。现场提取检材(上述5份)依次编为1、2、3、4、5号。经初步筛检:1、2号检材PSA (-),精子未检见。其余3份检材检验结构见表1。表1案例检材检验结果检材D3S1358 vWA FGA Amel D8S11793号16/1614/1524/24 X/X 13/154号16/1614/1524/24 X/X 13/155号…     

电工胶带上人体接触性DNA检验

<正>1案例检验1.1检材实际案例中提取的电工胶带3份,其中1号检材为某敲诈案犯罪现场(办公室)内针孔摄像头上缠绕的电工胶带;2号检材为某持枪抢劫案现场提取的碎裂枪头碎片上缠绕的电工胶带;3号检材为某爆炸案现场提取散落的电线末端上缠绕的电工胶带。1.2检验方法样本提取分别将上述3份电工胶带与缠绕物体剥离,各剪取0.5cm×1cm大小,置于1.5m L离心     

人体接触检材前处理方式对磁珠法提取DNA效果的影响

目的比较3种常见的接触检材前处理方式对磁珠法提取DNA效果的影响。方法收集烟蒂、牙刷、纱线手套各10份;分别采用95℃、70℃直接裂解和TNE、SDS、PK预消化方式进行前处理,再用磁珠法提取纯化DNA,并进行DNA定量,统计提取的接触DNA量和IPC CT值;同时用Sinofiler复合扩增系统进行STR分型检测。结果 3种方法前处理后用磁珠提取的DNA纯度均较高I,PC CT值在26.63～27.19之间。用预消化法获得的DNA量高于裂解法,而95℃裂解与70℃裂解方法提取的DNA量无显著性差异。STR扩增检测结果亦表明,采用预消化法处理的样品STR分型成功率高于裂解法9,5℃与70℃裂解方法处理的样品STR分型成功率无显著性差异。结论人体接触检材采用预消化磁珠法提取DNA,有助于提高STR检验成功率。