福尔马林固定石蜡包埋组织中DNA提取

由于甲醛介导的DNA损伤和石蜡对DNA提取的阻碍作用,使得常规DNA提取方法很难从福尔马林固定石蜡包埋组织(FFPET)中获取高质量的DNA。近年来,众多学者的研究表明,通过改良预处理方法,优化蛋白酶K消化作用,简化DNA提取步骤,纯化DNA提取物等,可以有效提高FFPET中提取的DNA质量,为FFPET的DNA分析奠定了基础。     

甲醛固定石蜡包埋组织STR分型检测

目的评估10%甲醛固定石蜡包埋组织STR分型结果的影响因素。方法采用QIAGEN法、IQ法、Chelex法对2具新鲜尸体在尸检时常规制备的心、脑、肝、脾、肾、肺、胃、肠石蜡包埋组织进行DNA提取,用AmpFlSTR Identifiler试剂盒进行PCR扩增,在3100-Avant上完成片段分析。另外对15个案例中室温保存1～5年的心、肝、肺、肠存档石蜡包埋组织共56份采用同样的方法进行STR分型。以STR基因座检出率评估分型有效性。结果各种组织DNA片段均随着保存时间延长而持续降解,其中心、肺组织STR基因座检出率与保存时间存在线性相关。相同保存时间时,各种组织基因座检出率差异有统计学意义。其中以肺组织在不同保存时间中基因座检出率最高。结论在甲醛固定时间一定的条件下,存放时间、组织类型、DNA提取方法和PCR模板质量浓度是影响石蜡包埋组织STR分型的重要因素。     

改良醋酸铵盐析法提取福尔马林固定石蜡包埋组织DNA

目的采用改良醋酸铵盐析法提取福尔马林固定石蜡包埋组织DNA,并评价其应用价值。方法取死后24h内人体肾组织用10%中性福尔马林溶液固定7d,石蜡包埋。采用酚/氯仿法、Chelex-100法及改良醋酸铵盐析法提取DNA。经用紫外分光光度计法、AGE及PCR-PAGE检测比较不同方法提取DNA的质量。结果改良醋酸铵盐析法、酚/氯仿法、Chelex-100法OD260/OD280比值分别为1.962±0.195、2.110±0.470、1.018±0.124,两两比较均有显著性差异(P<0.05);3种方法提取DNA含量(μg)分别为0.515±0.447、0.328±0.345、5.346±1.994;AGE电泳图谱可印证上述结果;PCR-PAGE检测显示改良醋酸铵盐析法提取DNA的谱带清晰度好于其它两种方法。结论改良醋酸铵盐析法更适合微量福尔马林固定石蜡包埋组织样本DNA的提取。     

福尔马林固定石蜡包埋组织3种DNA提取方法比较

目的探讨经福尔马林固定1d石蜡包埋组织(FFPET)提取DNA的简易有效方法。方法比较水浴加热、微波加热和二甲苯脱蜡的效果。组织脱蜡后分别采用Chelex-100+层析柱纯化法、DNA IQTM试剂盒磁珠提取法和Chelex-100+磁珠纯化法提取DNA;实时荧光定量PCR技术定量DNA;荧光标记毛细管电泳技术进行STR分型。结果二甲苯脱蜡的效果好于其他两种加热的脱蜡方法(P<0.05)。Chelex-100+层析柱纯化所获得的DNA量显著高于其他两种方法(P<0.05)。结论二甲苯脱蜡、Chelex-100+层析柱纯化法是一种简单、有效的FFPET处理方法。     

甲醛固定及石蜡包埋组织的DNA分型及其应用

目的：建立甲醛固定及石蜡包埋组织ＤＮＡ的基因分型方法并使之应用于实际检案。方法：用Ｃｈｅｌｅｘ和有机溶剂提取法提取ＤＮＡ,以ＰＣＲ与反向探针杂交技术作ＰＭ和ＨＬＡ－ＤＱＡ１位点分型。结果：２６份包埋组织块有２４份能得到理想的分型结果。结论：本法可用于法医学个人识别和亲子鉴定     

石蜡包埋人体组织DNA分型的研究

目的研究石蜡包埋人体组织的DNA提取方法对其STR分型的影响,并建立石蜡包埋组织的DNA提取方法。方法经不同预处理条件后采用Chelex-100法提取石蜡包埋人体组织中的DNA,用不同的反应体系进行STR复合扩增检验。结果经福尔马林固定、石蜡包埋的人体组织直接采用Celex-100法提取DNA与65℃水浴除蜡后采用Celex-100法提取DNA均可获得满意的DNA分型。结论该方法简便易行,实验效果好,适合检案。     

PrepFilerTM提取甲醛固定石蜡包埋组织检测STR分型1例

1案例1.1简要案情2004年7月某日下午,张某(女,25岁,小区内业主)与杨某(男,57岁,小区公用车棚门卫)因故吵架,杨某倒地后死亡。法医病理检验显示,杨某系冠状动脉粥样硬化性心脏病而死亡。死者家属不服死因结论,多次上访,8年后有关部门将死者心肾器官的石蜡包埋病理组织送至DNA实验室要求检验鉴定。1.2检验过程及结果取石蜡包埋组织适量,放入1.5 m L的离心管中,     

甲醛固定石蜡包埋组织DNA提取方法比较

目的比较甲醛固定石蜡包埋尸检组织中三种提取DNA的方法对DNA质量的影响,寻找一种操作简便、污染较少、经济实用的石蜡包埋组织中提取DNA的方法。方法选取经甲醛固定石蜡包埋的心肌组织20例,分别以二甲苯脱蜡-酚氯仿法、改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法、试剂盒法提取DNA,进行电泳分析、紫外分光光度计测定A260/A280值及PCR扩增。结果改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法抽提DNA法、二甲苯脱蜡-酚氯仿法分别与试剂盒法所提取DNA的A260/A280值相比较,均有显著性意义（P〈0.01）。二甲苯脱蜡-酚氯仿法、改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法所提取DNA的A260/A280值相比较,无显著性意义（P〉0.05）。以改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法所得DNA为模板,扩增的目的条带亮度与阳性对照相当。结论结果证实改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法简便有效,所用试剂价格低廉,是一种经济实用的石蜡包埋组织DNA提取方法。     

石蜡包埋人体组织STR检验的探讨

目的 探讨普通甲醛对人体组织DNA的影响及提高STR检出率的手段。方法 取少量石蜡包埋组织。65℃水浴脱蜡。Chelex-100法提取DNA，PCR扩增，循环次数分别为28次和28＋6次，扩增产物经310型测序检测。结果 普通甲醛固定5d以内的组织基本上可检出Amel及15个STR基因座，固定时间延长，检出率下降；PCR循环次数增加，灵敏度增加，但有错误分型的情况。结论 普通甲醛固定时间长短直接影响PCR—STR的检验，减少模板量有利于PCR反应成功，PCR次数为28＋6时，灵敏度增加。但应谨慎判读结果，以免错误分型。     

石蜡包埋人体组织STR检验的探讨

目的探讨普通甲醛对人体组织DNA的影响及提高STR检出率的手段。方法取少量石蜡包埋组织,65℃水浴脱蜡,Chelex-100法提取DNA,PCR扩增,循环次数分别为28次和28 6次,扩增产物经310型测序检测。结果普通甲醛固定5d以内的组织基本上可检出Amel及15个STR基因座,固定时间延长,检出率下降;PCR循环次数增加,灵敏度增加,但有错误分型的情况。结论普通甲醛固定时间长短直接影响PCR-STR的检验,减少模板量有利于PCR反应成功,PCR次数为28 6时,灵敏度增加,但应谨慎判读结果,以免错误分型。     

福尔马林固定组织血型检验1例

目前，国内外有关福尔马林固定或石蜡包埋组织ABO血型及酶型检验方法的报道不多，尚无成熟的经验，笔者在办案工作中遇到这样一个案例，经检验获得了理想的结果，并以此结果为依据一举破案，现报道如下。1案情与检验情况某女，14岁（残疾人）被奸致孕，同年引产一胎儿，其上、下肢组织用福尔马林固定一周后被检。最初分别用清水冲洗福尔马林固定的组织24h、36h、48h，匀浆，取上清经粘片法检测ABO血型。A侧端曾出现程度不同的弱凝集，B侧端一直为较明显的凝集，该结果不太稳定。为排除因福尔马林引起的假阳性干扰，又对匀浆后的检材进行…     

PCR-STR分型在刑事案件中的应用

应用PCR技术对多态DNA位点分型,使犯罪现场生物物证的个人识别鉴定取得了长足的进展,检测灵敏度明显提高,检验结论从否定到肯定.以往报告多为PCR-VNTR.PCR-ASO技术的应用.近几年PCR-STR分型成为法医学应用研究的热点.本文收集实际鉴定案件,着重对PCR-STR技术在刑事案件中的应用范围、热点及前景进行了讨论,现报告如下:1.材料我室自1995年4月至1997年12月受理的PCR检验案件中的7例典型案例,检材为血液(痕).混合斑、组织块等.     

保存16年10％甲醛固定石蜡包埋组织的DNA检验1例

1案例 涉及一要案的嫌疑人失踪,由于其为孤儿,无家属血样可供检验比对．根据侦查获悉其于16年前曾在上海某医院进行过胃大部切除术。经与该医院联系,获得嫌疑人的10％甲醛固定石蜡包埋胃组织。切取石蜡包埋胃组织少许,置于1．5mL离心管中,二甲苯和无水乙醇脱蜡脱水后按MagneSil固定组织基因组DNA纯化系统（以下简称MagneSil纯化系统）说明书（美国Promega公司）进行后续操作,     

PCR-STR分型技术在尿样DNA分型中的应用

目的：对尿样的DNA分型进行研究。方法：10份尿样随机收集于无关个体,同时采集血液样本做DNA分型对照,用PCR－STD分型技术对尿样DNA进行FIBRA和D18S535基因座分型。结果：10份尿样10ml、1ml及0．2ml体积均获得准确的分型结果,且与同一个体的血样DNA分型结果完全相同;室温储存4天及4℃及4周的尿样均分型成功。结论：PCR－STR分型技术对尿样DNA分型是一种有效的方法,在尿样的个人识别中具有极高的实用价值。     

Triton X-100快速提取甲醛固定、石蜡包埋组织内DNA的方法

目的建立一种快速提取甲醛固定、石蜡包埋组织内DNA的方法。方法利用TritonX-100一步提取甲醛固定、石蜡包埋组织内DNA,并具体研究了不同浓度TritonX-100对提取后DNA-STR分型效果的影响。结果成功地一步提取出甲醛固定、石蜡包埋组织内DNA,浓度为1%的TritonX-100提取效果较好。结论利用TritonX-100提取甲醛固定、石蜡包埋组织内的DNA,为快速提取DNA提供了有效的途径,是法科学领域中一种值得推荐的方法。     

PCR-STR分型技术在尿样DNA分型中的应用

目的　对尿样的DNA分型进行研究。　方法　 10份尿样随机收集于无关个体 ,同时采集血液样本做DNA分型对照 ,用PCR -STR分型技术对尿样DNA进行FIBRA和D18S5 35基因座分型。　结果　 10份尿样 10ml、1ml及 0 .2ml体积均获得准确的分型结果 ,且与同一个体的血样DNA分型结果完全相同 ;室温储存 4天及 4℃保存 4周的尿样均分型成功。　结论PCR -STR分型技术对尿样DNA分型是一种有效的方法 ,在尿样的个人识别中具有极高的实用价值。     

福尔马林固定组织SNP与STR检测的比较

目的检测经长期福尔马林固定的组织降解情况,并比较组织中SNP与STR的检出率。方法本文对24例经福尔马林固定、-20℃保存5年的组织样本,采用Quantifiler?Trio DNA定量试剂盒检测样本DNA的降解系数及浓度,运用55-SNPs SNa Pshot复合分型体系和Power Plex?21试剂盒分别进行SNP与STR检测。结果大部分样本降解系数在1~8,发生不同程度的降解。与未降解样本相比,SNP分型完全一致,检出率为100%;其中8例样本STR分型存在33个等位基因丢失,降解系数均大于2.6,且75.8%的等位基因片段长度大于300bp。当样本检测出16个STR基因座时,似然率与54个SNP相当。当样本检出大于17个STR时,似然率大于54个SNP。STR基因座片段长度与等位基因检出率之间呈负相关。除2例样本降解系数较小却发生等位基因丢失外,其余样本降解系数与等位基因检出率之间呈负相关。结论经福尔马林长期固定的组织DNA易降解,检测SNP明显优于STR,但需要更多的SNP以提高个体识别能力。     

两组引物对无毛囊毛根的PCR-STR分型

目的了解无毛囊毛根的短扩增子引物和通用引物PCR-STR分型在法医实践中应用的可行性。方法应用5对Bulter设计的短扩增子引物D8S1179、D21S11、THO1、D16S539和VWA与其对应的STR通用引物,利用非变性PAGE,对无毛囊毛根进行PCR-STR分型的对比研究。结果短扩增子引物与通用引物对无毛囊毛根分型的正确率:D8S1179为11.4%和17.1%、D21S11为3.7%和5.9%、vWA为22.2%和33.3%、THO1为9.3%和5.6%、D16S539为0和9.2%。毛根的短扩增子引物和通用引物部分STR分型出现了干扰结果的Ladder-like背景条带。结论在对无毛囊毛根检材进行通用引物和短扩增子引物PCR-STR分型时,五个STR位点分型检测的成功率有限,还需注意Ladder-like条带的干扰。     

利用PrepFiler Express~(TM)提取石蜡包埋组织DNA 1例

正1材料及方法1.1样本组织蜡块一份,来自实验室检案。1.2 DNA提取用刀片切开蜡块,从中间取约两份大小为0.2cm×0.2cm的组织,分别采用Chelex-100法和Prep Filer Express BTATM法(Prep Filer Express BTA DNA提取试剂盒,Applied Biosystems,简称BTA法)提取样本DNA。     

福尔马林固定肝肾的亚硝酸盐含量测定

亚硝酸盐中毒尸体血中含量测定,经我们检案及动物实验证明:福尔马林固定血比未固定血中检出时限明显延长.但在得不到固定血的情况下,福尔马林固定脏器中能否检出亚硝酸盐?其检出时限与未固定脏器有无差异?我们对亚硝酸钠中毒死亡动物的肝脏及肾脏进行了亚硝酸含量测定.