应用旋毛虫GAD和GLS重组抗原建立间接ELISA方法的研究

为了建立快速检测猪旋毛虫病的血清学方法,分别用旋毛虫GAD、GLS重组蛋白作为包被抗原,建立2种检测旋毛虫血清抗体的间接ELISA方法。对抗原包被条件、血清稀释度、封闭液的选择与封闭时间、酶标二抗的稀释度与孵育时间和TM B作用时间等条件进行了优化。旋毛虫GAD包被抗原间接ELISA方法和GLS包被抗原间接ELISA方法的阴阳性临界值分别为0.848和0.963;这2种间接ELISA方法批内和批间重复试验的最大变异系数均小于10%,且用这2种方法分别对猪蛔虫阳性血清、华支睾吸虫阳性血清和弓形虫阳性血清进行了检测,均无交叉反应,表明这2种方法具有很好的稳定性和特异性。同时用这2种间接ELISA方法和旋毛虫抗体快速检测卡分别对感染旋毛虫不同数量、不同时间的小鼠血清进行检测,结果显示,这2种间接ELISA方法具有较高的敏感性。本研究中建立的这2种间接ELISA方法为旋毛虫病的早期诊断和流行病学调查提供了必要的手段。     

当事人主义诉讼体制下法官审判方法的基础 ———要件事实概说

准确、妥当、迅速地解决民事纠纷是任何民事诉讼体制的制度目的, 为达到这一目 的, 不同的诉讼体制采用了不同的审判方法。在职权探知主义的诉讼体制下, 这一方法可以简单地 概括为“三段论+证明责任理论”, 在当事人主义的诉讼体制下, 这一方法则被概括为要件事实理 论。作为要件事实理论的核心概念, “要件事实”充分体现了“诉讼结构下法学方法论”的基本特 征, 即这一概念既体现了实体法上法律事实的可评价性和法律效果单一性的特征, 又蕴涵着程序法 上主要事实的具体性、特定性以及并存性的特征。     

副猪嗜血杆菌血清5型间接血凝试验和间接ELISA抗体检测方法的建立

为建立副猪嗜血杆菌(HPS)的血清学诊断方法,通过探索HPS荚膜多糖产生的最适体外培养条件,提取了HPS血清5型菌株的荚膜多糖(CPS),并以之为抗原分别建立了间接血凝试验(IHA)和间接ELISA两种抗体检测方法,对其特异性、敏感性和符合率进行了比较研究。结果表明,两种检测方法的特异性良好,但ELISA的敏感性是IHA的5~10倍,二者的阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为79.7%、55.2%和65.3%。用这两种方法检测了320份临床送检猪血清,IHA和ELISA的阳性率分别为40%和59%。结果证实,这两种方法适用于不同实验室条件下HPS的诊断和流行病学调查。     

串联亲和纯化中应用不同标签组合的研究进展

综述了原始串联亲和纯化方法的原理及其存在的缺陷和各种最新构建的串联亲和纯化标签组合及其从哺乳动物细胞中纯化蛋白复合物时的蛋白得率。与单步纯化方法相比,串联亲和纯化方法显著地减少了非特异性背景,可分离到高纯度的蛋白复合物。这一优势极大地简化了蛋白质鉴定及其相互作用关系的验证工作。     

“拔毛法”诊断猪囊虫病准确性的探讨

《中国兽医科技》1987年第8期刊登署名赵汝仁、韩光达的《“拔毛法”诊断猪囊虫病》一文(以下简称赵文),报道了用氢氧化钠溶液和三氯化铁溶液处理拔自猪胸部的毛样,根据毛鞘的显色诊断猪囊虫病的方法。 猪囊虫病在西宁地区也较普遍,为推广应用这一诊断方法,我们事先进行了3次试验,结果完全一致,而与赵文所述检出率可达80～100％,相差甚远。现将我们的试验情况报告于后,以与原文作者共同探讨这一方法的应用价值。     

从中华诗词排行榜说起

有一本书,叫做《中华诗词排行榜》,对排行榜我很反感,这个概念是从外国学来的,是接受了西方统计学的一个观测分析方法,规定了若干个指标,符合一个指标加一分,企业、富豪、明星都可以用这个方法进行排队。这本书也是用这样的方法对诗词进行筛选打分,第一:古代的、现代的关于诗词的书籍,一首诗被各种选本选过来选过去,比如有二十八本选这     

古代印度首陀罗的性质

近二、三十年来,印度史学界出现了可称为“新史学派”的流派,这一派的史学家们虽然不是马克思主义者,但他们的研究方法与马克思主义的研究方法多有相近之处。他们着重于对社会经济形态的研究并取得了一定成绩。他们对印度古代首陀罗的解释,可供我们讨论这一问题时参考。下面我在说明一点自己的意见的同时,也介绍一些他们关于首陀罗的看法。 (一) 古代印度瓦尔那制度(一般译种姓制度)的形成经历了一个较长的时期,而首陀罗是最     

建国初期的中国国际问题研究（1949-1956年）

新中国成立之初,为建立新中国的国际政治学理论,中国高层领导人有意识地建立了 一些研究和教学机构,创办了一些国际问题研究期刊,这为今天中国的国际问题研究工作奠定了较 好的基础。这一时期国际问题研究工作的首要出发点是配合当时中国的对外斗争,因此体现出了受 苏联模式的影响较深、政治性突出、研究方法相对单一等特点。     

猪瘟的分子生物学诊断

采用RT PCR方法 ,从经临床和血清学初步诊断为猪瘟的病料中扩增了猪瘟病毒 (CSFV)的E2基因某一片段 ;对扩增片段进行序列测定 ,通过DNAsis软件构建了系统发生树 ,确定了这一流行株 (IPI株 )在系统发生树中的位置。结果表明 ,从IPI株和石门株 (Shimen)中均扩增出 2 71bp目标片段 ,这一流行株与我国 2 0世纪 90年代以来流行的绝大多数CSFV毒株同属于基因 2群中的 2 .1基因亚群 ,与YN1、YN2、GX4、GZ1的关系较近 ,而与Shimen株、兔化弱毒株 (HCLV)等我国传统的标准毒株相距较远。这一结果为猪瘟的诊断和检疫提供了一种特异、可靠的方法     

猪四种呼吸道病原菌四重PCR检测方法的建立与应用

为建立可同时快速检测猪支气管败血波氏杆菌(Bb)、副猪嗜血杆菌(Hps)、胸膜肺炎放线杆菌(App)和多杀性巴氏杆菌(Pm)的四重PCR方法,根据Bb的fla基因、Hps的16S rRNA基因、App的apxⅣ基因和Pm的特异性基因KMT1设计4对特异性引物,基于TaKaRa公司的Premix Taq PCR预混酶,对四重PCR的引物浓度和退火温度进行优化,确定该四重PCR的反应体系和反应条件,通过对特异性及同一种病原菌不同血清型检测的通用性、敏感性和重复性评价,建立快速检测猪这4种呼吸道病原菌的四重PCR方法,同时应用该方法对81份临床样本进行检测,检测结果与这4种病原菌单项PCR检测以及4种病原菌的分离鉴定结果进行比较。结果表明,该方法能同时对这4种病原菌进行检测,特异性和通用性好、重复性好,对这4种病原菌DNA的最低检测质量浓度为20 pg/L,对这4种细菌的最低检出量分别为1×10~3CFU/mL的Pm,1×10~2CFU/mL的Hps、Bb和App,敏感性高。81份临床样本的四重PCR检测结果和单项PCR检测结果一致,PCR检出率明显高于细菌分离鉴定结果。本研究成功建立了可同时检出猪支气管败血波氏杆菌、副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌和多杀性巴氏杆菌的四重PCR方法,该方法可用于临床样本的快速检测以及这4种病原菌的鉴别检测。     

家兔器官的X线造影术

家畜解剖学对于动脉和管状器官的研究,当前在国内一般采用注射色素和管腔铸型两种方法。但这两种方法对小动物和大家畜器官内细小管腔效果一般不理想。为此我们采用X线造影技术对家兔心血管系统和支气管进行了试验,获得满意效果。     

一种防疫注射新技术——自动喷射注射机

由于大规模和紧急防疫工作的需要,人们对疫苗、菌苗等生物制品的应用途径和方法进行了大量研究工作,也创造出了一些新型生物制品及其相应的有效使用方法。我国人民,解放后在党和毛主席的英明领导下,在这方面也取得了卓越成果。例如,在人医方面研制出了脊髓灰质炎(即小儿麻痹症)糖丸疫苗等;在兽医方面,创造了猪肺疫口服苗、布氏杆菌病     

浅谈基因治疗概况

基因治疗是近几年发展起来的新技术,它利用基因重组的方法对染色体异常性疾病进行基因水平治疗。目前人们在这一领域进行了大量的工作,其进展引起了包括医学界在内的广泛注意。本文主要就基因治疗的主要内容概括如下。     

山羊皮下脓肿病原菌三重PCR检测方法的建立与应用

为同时检测伪结核棒状杆菌、金黄色葡萄球菌和化脓隐秘杆菌3种引起山羊皮下脓肿的主要病原菌,选择针对这3种病原的特异性引物,经条件优化后建立一种可同时检测以上3种病原菌的三重PCR方法,评价了该方法的特异性和敏感性,并检测了临床样品。结果显示,所建立的三重PCR方法仅对伪结核棒状杆菌、金黄色葡萄球菌及化脓隐秘杆菌这3种目的病原菌DNA产生阳性扩增,对大肠杆菌等其他9种微生物的DNA扩增结果均为阴性,具有较强的特异性。该方法同时显示较高的敏感性,对伪结核棒状杆菌、金黄色葡萄球菌和化脓隐秘杆菌基因组DNA的检测下限分别为1.0×103、1.1×103和6.7×102copies;对3种病原菌菌液的检测下限分别为8.7×102、1.1×102和5.1×102CFU/mL。该方法能从临床样品中检测到相应病原,其结果与单一PCR方法一致。本研究中建立了同时检测山羊皮下脓肿主要病原菌的特异和灵敏的三重PCR方法,为该病的快速诊断提供了有用的技术手段。     

中西结合治疗马骡四肢骨折107例的初步总结

在生产中,因意外损伤所造成的马、骡四肢骨折较为多见,如不及时给予合理的治疗,便会导致残废,丧失使役能力。为了解决生产中存在的这一实际问题,我们从1964年开始进行了马、骡四肢骨折的治疗研究。在毛主席的哲学思想指导下,中西兽医结合,采用以小夹板固定为主,并适当结合内服和外敷中药的方法,几年来共治疗不同部位、不同类型的马、骡四肢骨折107例(见表1),获得了较满意的效果,并初步摸索出一套较好的治疗方法。 “不同质的矛盾,只有用不同质的方法才能解决。”遵照毛主席的这一教导,我们采取     

用酶联免疫吸附和双向免疫扩散方法诊断牛嗜皮菌病的研究

目前已知我国某些地区有嗜皮菌病流行。为适应大群检疫和流行病学调查之需,亟应研究出一种敏感性高、特异性强、简单易行的血清学诊断方法。但由于嗜皮菌病产生较少的循环抗体,所以给该病的血清学诊断带来一定困难,致使国内外长期以来均依靠细菌学方法确诊,这给普查和防治造成极大的不便。近几年来,国外对于嗜皮菌病血清学诊断已有较多的研究,国内还未见这方面的报道。我们参照有关资料对酶联免疫吸附试验(简称ELISA)和双向免疫扩散试验(简称DID)方法用于诊断牛嗜皮菌病进行了研究。     

近五年来印度《专利法》的修改对其制药业的影响

印度1970年的《专利法》,确认了程序专利(给予某一用以制造合成药物的程序以专利),但并未确认产品专利,即对于食品、药品的物质不授予专利,仅对制造方法授予专利。这鼓励了印度制药企业大量仿制药品替代进口,制药业成为印度最具优势的产业之一。1995年印度加入WTO之后,三次修改1970年的《专利法》,以便使其专利制度与国际标准接轨,这对印度的制药业产生了重大的影响。     

马科斯统治时期的土地改革与农村动态——总统第27号法令的方向对吗?

自二十世纪二十年代以来,土地改革一直被列入菲律宾的政治议程。但是,该国土地结构变革的进展却极其缓慢。几乎历届总统都强调实施一项新的土改法令,这就使得土改变得越来越复杂化。讨论农村动乱的原因、土改立法,执行土改的局限性,以及法令与现实严重脱节的文献可谓卷帙浩繁。不过,大部分的论文还停留在对全国,或至多是对地区的整体研究。从这个角度说,它们在获得资源分配问题上反映的是行政的研究方法,而不是社会学的研究方法,从而也反映出一种自上面下了的解社会变革的推理方法。这就排除了     

关于猪病综合性治疗方面的体会

为了落实毛主席“以养猪为中心,全面发展畜牧业”、“牲畜的最大敌人是病多与草缺,不解决这两个问题,发展是不可能的”的伟大教导,我们采取了土洋结合、针药结合、中西兽医结合的综合性治疗方法,防治猪病,收到了满意的效果。实践证明要促进养猪事业的大发展,解决猪的常见病、多发病的问题十分重要。在这方面我们的做法是:     

猪PD-1分子及其配体的实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

根据猪程序性死亡因子PD-I及其配体PD-LI和PD-L2的基因序列,分别设计了特异性引物和TaqMan探针,以10倍系列稀释的重组质粒pMD-PD-1、pMD-PD-L1和pMD-PD-L2为标准品,对实时荧光定量PCR的条件进行优化,以建立定量检测这3个基因的方法.结果表明,建立的方法在1×10~2～1×10~8copies/μL模板范围内具有良好的线性关系(r~2>0.99),扩增效率均高于96%,可检测至少100 copies的阳性标准品.利用该方法对猪外周血单核细胞中这3个基因的表达情况进行了检测,结果也表明该方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可应用于临床样品的检测.