鲜猪肉中A型产气荚膜梭菌污染情况调查

对贵阳市部分市场销售的鲜猪肉A型产气荚膜梭菌的污染情况进行了调查 ,从被检肉样中分离获得 3株A型产气荚膜梭菌 ,分离率为 6.2 5 % (3 /4 8)。表明贵阳市部分市场销售的鲜猪肉存在A型产气荚膜梭菌的污染 ,对消费者的健康构成潜在的威胁     

鸡产气荚膜梭菌遗传多样性的REP-PCR分析

为探讨鸡产气荚膜梭菌流行现状的调查方法,采用REP-PCR(repetitive extragenic palindromicPCR)技术对四川省10个规模化鸡场分离得到的34株A型产气荚膜梭菌进行了遗传多样性分析,并与AFLP(amplified fragment length polymorphism)方法进行了分型比较.结果显示,尽管REP-PCR分型方法只能将34株产气荚膜梭菌分为7个亚型,但是,仍然表现出对产气荚膜梭工菌菌株的较高的鉴别能力,不失为一种简便、快速、可靠的产气荚膜梭菌分型方法.经对亚型分布情况进行分析.表明产气荚膜梭菌的流行特点与地区差异相关,不同鸡场产气荚膜梭菌的亚型差异明显,而同一鸡场的亚型较单一,以一种亚型为主,交叉有少数其他亚型;优势基因型为REP-PCR基因1型、2型和3型.证实,REP-PCR技术适用于鸡产气荚膜梭菌遗传多样性分析.     

应用随机扩增多态性DNA技术对产气荚膜梭菌的基因分型

采用随机扩增多态性DNA(randomly amplied polymorphic DNA,RAPD)技术对产气荚膜梭菌进行PCR扩增.结果,产气荚膜梭菌A、B、C、D 4个型均可扩增出约430 bp的条带,B、C型还扩增出约210 bp的条带,B、D型还扩增出约1210 bp的条带,A型还扩增出约240 bp和690 bp的条带,各型之间的条带差别明显.     

牛产气荚膜梭菌病自然病例的病理学观察

牛产气荚膜梭菌病是由产气荚膜梭菌引起的条件性高度致死性传染病 ,其特征是发病急 ,病程短 ,死亡快。本病病原血清型主要是A型 ,也有C型和D型。 2 0世纪 90年代 ,该病在我国频繁发生 ,给养牛业造成较大经济损失。为探讨本病的病理变化特征和发展规律 ,给诊断该病提供科学依据 ,笔者对病原分离鉴定为产气荚膜梭菌的自然病死牛的组织病理学变化进行了观察。1　材料和方法1.1　病料采集　对经流行病学调查、临床症状观察疑似产气荚膜梭菌病的自然病死牛立即解剖 ,无菌采集肝、脾、肠系膜淋巴结以及病变小肠 15cm以上 ,系统观察各实质脏器的…     

A型产气荚膜梭菌最佳产毒时间的确定

测定了A型产气荚膜梭菌在庖肉培养基的生长曲线、培养液的pH值变化曲线以及不同培养时间提取的毒素液的蛋白质含量、溶血活性及卵磷脂酶活性。结果表明 ,A型产气荚膜梭菌在庖肉培养基培养 8h是其α 毒素的最佳产毒时间。     

犬产气荚膜梭菌的分离和PCR检测方法的建立

从 12头疑似产气荚膜梭菌感染的猝死警犬中分离获得了 18株病原菌 ,经生化试验及毒素中和试验 ,确定为A型和C型产气荚膜梭菌。参考GenBank中登录的基因序列 ,设计合成了针对产气荚膜梭菌α、β、ε、ι、CPE和 β2共 6对分型毒素基因的引物 ,对以前昆明地区分离的 1株产气荚膜梭菌进行了PCR扩增 ,结果扩增出了与预期大小相同的 6个基因片段 ,分别为 2 33、196、32 4、4 46、5 6 7和 6 6 5bp。建立的PCR方法能同时用于产气荚膜梭菌鉴定和毒素分型 ,较细菌毒素检测方法快速 ,与细菌分离鉴定的结果一致。     

产气荚膜梭菌β2蛋白的高效可溶性表达与基因工程亚单位疫苗的制备

β2毒素是一种新近报道的产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)毒素,A、B、C、D、E等5个型的梭菌均可产生,该毒素也是制备基因工程亚单位疫苗的主要研究对象。本研究通过优化β2蛋白的密码子、去除蛋白信号肽,选择亲水性与抗原性较好的序列,同时优化表达条件等方法的探索,在大肠杆菌表达系统中获得了高效表达的可溶性重组β2蛋白,用该蛋白免疫小鼠可使动物产生较高的血清抗体水平,针对A型、B型、C型和D型产气荚膜梭菌的保护率分别为90%、100%、80%和90%,小鼠三免后第7~14天抗体效价达到峰值。本研究表达的β2蛋白具有较好的免疫原性,可进一步用于研制预防产气荚膜梭菌的基因工程亚单位疫苗。     

产气荚膜梭菌β毒素和ε毒素以及腐败梭菌α毒素三联基因工程灭活疫苗的制备与免疫效力评价

为了获得高表达量的重组C型产气荚膜梭菌β毒素,鉴定其致死性和反应原性,并评价其与D型产气荚膜梭菌ε毒素和腐败梭菌α毒素共表达产物联合制成三联基因工程灭活疫苗的免疫保护效力。设计含不同酶切位点的2对引物,PCR扩增C型产气荚膜梭菌β毒素基因cpb1和cpb2,将二者克隆至pRSFDuet-1质粒,转化大肠杆菌BL21 (DE3),自诱导培养基诱导2段基因共表达。用SDS-PAGE和Western-blot以及小鼠毒性试验、抗毒素血清和中和试验对表达产物进行鉴定。将诱导收获的大肠杆菌以及D型产气荚膜梭菌ε毒素和腐败梭菌α毒素的共表达产物1∶2配比灭活制成三联灭活铝佐剂疫苗,以每只1 m L剂量皮下免疫家兔2次后,测定血清中和抗体效价,用1 MLD的C、D型产气荚膜梭菌毒素和腐败梭菌毒素分别攻击。结果显示,所构建的重组大肠杆菌BL21(pRSFDuet-cpb1-cpb2)能够表达重组β毒素,产物能够与C型产气荚膜梭菌抗毒素血清反应,且具有小鼠致死毒性,抗毒素血清可以将其毒性中和;制成联合疫苗免疫家兔,免疫血清对C型产气荚膜梭菌毒素的中和抗体效价为8 MLD/0.1 m L,对D型产气荚膜梭菌毒素的中和抗体效价为45 MLD/0.1 m L,对腐败梭菌毒素的中和抗体效价为1.5 MLD/0.1 m L;用3种毒素攻击免疫组家兔均全部保护,对照组全部死亡,达到《中华人民共和国兽药典三部(2015版)》效力检验标准。本研究为羊猝狙、肠毒血症和快疫三联疫苗的研制提供了试验基础。     

A型产气荚膜梭菌重组α毒素对小鼠的致病性研究

为了研究A型产气荚膜梭菌α毒素(PLC)的致病性,采用PCR扩增编码产气荚膜梭菌α毒素去除信号肽的plc基因片段,构建重组质粒pGEX-plc,经IPTG诱导表达获得重组蛋白PLC。对纯化鉴定后的PLC蛋白进行细胞毒性试验,结果显示,感染后第4小时Hela细胞开始出现病变,并随时间延长而逐渐严重,说明α毒素对Hela细胞有毒性作用。进一步建立小鼠病理模型,重组PLC蛋白接种组与阳性细菌感染组的病理变化显示,小鼠发病迅速,腹部膨大,肠道臌气明显;组织学观察结果显示,被感染小鼠内脏器官出现不同程度的病理变化,以小肠各段尤为明显,表现为肠黏膜损伤、绒毛脱落等。上述结果为A型产气荚膜梭菌致病机制的研究奠定了基础。     

产气荚膜梭菌贵州分离株α-毒素基因的克隆与鉴定

提取了A型产气荚膜梭菌贵州分离株的染色体DNA,经聚合酶链反应(PCR)扩增并回收获得了1条242bp的特异性片段,将该基因片段克隆到质粒载体pUC19中,并转化至大肠埃希氏菌JM109中;经氨苄青霉素(Amp)抗药性和显色反应筛选及重组质粒酶切分析、PCR鉴定和Southern blotting检测,表明该重组质粒是产气荚膜梭菌α 毒素基因的克隆。     

梅花鹿肠毒血症的细菌学鉴定

梅花鹿肠毒血症的细菌学鉴定俞乃胜，李光宗，韦剑珊，段志华，黄小华（云南农业大学昆明６５０２０１）（云南省粮油储备库鹿场）鹿产气荚膜杆菌（魏氏梭菌）肠毒血症，其病原菌有５个血清型，国外曾报道过鹿Ｃ型产气荚膜杆菌肠毒血症和梅花鹿Ａ型产气荚膜杆菌引起的坏死...     

岩羊病原性大肠埃希氏菌及A型产气荚膜梭菌的分离与鉴定

从1只突然死亡的1月龄雄性岩羊体内分离到1株病原性大肠埃希氏菌和1株A型产气荚膜梭菌,经毒力试验测得大肠埃希氏菌LD50为4.4×108CFU,A型产气荚膜梭菌LD50为6.1×109CFU,同时进行了药敏试验,为今后预防和诊疗提供理论基础.     

鹳源产气荚膜梭菌的分离及其生化特性鉴定

从病死鹳的肝和肠分离出疑似产气荚膜梭菌,纯化后进行革兰染色、生化试验、16S rDNA基因序列分析和毒素鉴定、动物试验及药敏试验。结果表明,分离的菌株为革兰阳性杆菌,能够发酵甘露糖和麦芽糖等糖类,不能发酵棉子糖和甘露醇;16S rDNA基因序列分析确定为产气荚膜梭菌序列;多重PCR结果显示,该菌仅含有α毒素基因,因而确定分离菌为A型产气荚膜梭菌。动物试验结果显示,将该产气荚膜梭菌灌服鸡48 h后,鸡肠道有较多出血点,但未表现坏死性肠炎症状。药敏试验结果显示,该菌对阿莫西林、头孢哌酮、氟苯尼考、美洛西林等药物敏感,对多黏菌素B、链霉素、卡那霉素等药物不敏感,对环丙沙星和庆大霉素中敏。     

产气荚膜梭菌多联浓缩苗对牛的田间免疫试验

产气荚膜梭菌多联浓缩苗对牛的田间免疫试验杜莲洪马乐英蒋祯吕红杨爱玲（农业部兰州生物药厂７３００４６）产气荚膜梭菌（即魏氏梭菌）多联浓缩苗是兰州生物药厂近年研制的预防牛、羊等动物产气荚膜梭菌病的生物制品，制苗菌株包括Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ四个型，浓缩比例为５１...     

云南省曲靖市家畜猝死症的病原分离与鉴定

对云南省曲靖市近年流行的家畜猝死症进行了流行病学调查、临床症状观察、病理剖检 ,并对先后采自 7个县 (市 )区的 2 4份病料进行了病原分离、动物接种试验、生化鉴定、肠毒素定型及药敏试验。共分离到细菌 2 4株 ,其中产单核细胞李氏杆菌 2 0株 ,A型产气荚膜梭菌 2株 ,C型产气荚膜梭菌 2株。采取相应的综合防治措施后 ,2 0 0 3年冬到 2 0 0 4年春夏再未发生新的疫情。     

产气荚膜梭菌α-毒素的提取与鉴定

通过饱和硫酸铵盐析与SephadexG 2 0 0层析纯化 ,从A型产气荚膜梭菌分离菌株的培养物中获得了较纯的α毒素 ,对毒素的生物学特性鉴定结果表明 :该毒素对小白鼠的致死活性为 6 2 40 0 2MLD ,分子质量为 432 45 0 2u ,等电点为5 .3和 5 .5 ,可溶解绵羊红细胞 ,水解卵黄卵磷脂 ,且这种溶血活性与卵磷脂酶活性能被A型产气荚膜梭菌定型血清特异地抑制。     

产气荚膜梭菌α毒素和ε毒素的共表达及其免疫原性的研究

利用PCR技术从D型产气荚膜梭菌标准株C60-2基因组中扩增出α毒素基因CPA和ε毒素基因ETX。然后将CPA、ETX分别插到双表达载体pETDuet-1上,成功构建重组质粒pETDuet-1-CPAETX。将重组质粒pETDuet-1-CPA-ETX转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,菌体蛋白样品经SDS-PAGE分析,可见43ku和34ku两条特异性条带,表明插入基因得到了表达。Western-blot结果显示,共表达的α毒素和ε毒素蛋白均能与抗毒素抗体发生反应,具有很好的反应原性。用共表达的α、ε毒素蛋白免疫小鼠,可使其血清中产生较高浓度的中和抗体,且能抵抗D型产气荚膜梭菌培养液上清的攻击,免疫保护效果明显优于ε毒素蛋白单独免疫的保护效果。以上结果表明,本研究构建的产气荚膜梭菌α、ε毒素蛋白共表达体系可以用于D型产气荚膜梭菌毒素疫苗的制备,为预防多血清型病原的多价疫苗的研制提供了思路。     

新疆部分地区羊源性产气荚膜梭菌的分离及其主要毒力基因的检测

为了解新疆部分地区羊源性产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的毒型分布,对疑似病例所采病料进行了菌株分离,用多重PCR方法对菌株进行了毒素分型,用PCR方法对β2毒素基因(cpb2)和肠毒素基因(cpe)进行了检测。结果,在分离的39株菌中,毒素A型占66.67%(26/39),毒素B型占2.56%(1/39),毒素D型占30.77%(12/39);66.67%(26/39)的菌cpb2基因阳性,A、D型菌cpb2基因阳性率分别为42.31%(11/26)和100%(12/12);cpe阳性率为51.28%(20/39),其中A型菌cpe阳性率为50.00%(13/26),D型菌cpe阳性率为58.33%(7/12);cpb2和cpe双阳性菌株占38.46%(15/39)。上述结果为防治新疆羊源性产气荚膜梭菌感染提供了基础资料。     

暴发两起马属动物产气荚膜梭菌病

产气荚膜梭菌 (魏氏梭菌 )病是家畜的一种急性传染病 ,病原为Ｄ型或Ｃ型产气荚膜梭菌 ,特点是发病急、传染快、病程短、死亡率高 ,常发生于绵羊 ,山羊也可发病 ,该病暴发于马属动物尚属罕见。笔者在兽医诊疗工作中 ,曾遇到两起小区域暴发于马属动物的产气荚膜梭菌病。病例 1　 1995年 12月 2 9日 ,民和县东沟乡麻地沟村范某饲养的 10岁黑骡 ,晚间无任何病症进圈而早晨死于圈内 ,因死因不明而未做尸体剖检即将死尸深埋。 1996年 1月 1～ 8日 ,该村和相邻的张家庄村连续发病、死亡 18匹马属动物 (骡 15匹、驴 2匹、马 1匹 ) ,疫情上报后 ,立即…     

甲硝哒唑对家兔A型魏氏梭菌实验性感染的疗效

甲硝哒唑(Metronidazole,商品名Flagyl),又名灭滴灵,是治疗人的滴虫病、贾第虫病和各种类型的阿米巴病的特效药物,近年研究证明该药对各种专性厌氧菌有较强的杀灭作用,能有效地预防和治疗厌氧菌感染。家兔A型魏氏梭菌病是由专性厌氧菌A型魏氏梭菌(Clostridium welchii)亦称产气荚膜梭菌A型引起的一种以发生急性水样下痢为特征的爆发性疾病,该病发病率高,死亡快,目前尚无特效药物治疗。本试验用甲硝哒唑对A型魏氏梭菌实验性感染兔进行治疗试验,以检查该药对魏氏梭菌病的疗效。(一)材料和方法1.药物:甲硝哒唑,由天津河北制药厂提供,粉剂,批号:88093。试验前,按编组后规定的每只兔每天1次性投药剂量分别装入胶囊备用。