猪红细胞免疫黏附功能与CR1-like表达水平的研究

本研究旨在探讨不同长白猪红细胞CR1-like表达量的差异性,以及CR1-like表达量与免疫黏附功能的关系,为后期研究猪红细胞CR1-like的免疫机理提供理论数据。运用流式细胞术检测长白猪红细胞免疫黏附荧光大肠杆菌的水平及红细胞CR1-like表达量,运用单因素方差分析、单样本Kolmogorov-Smirnov检验等多种统计方法分析红细胞CR1-like表达量的特点及其与免疫黏附功能之间的相关性。结果,猪红细胞免疫黏附功能在个体水平上分为低,中和高三种类型,各种类型的平均荧光值依次为33.897±3.294(34.483%)、68.076±12.145(46.552%)和129.232±8.143(18.966%);CR1-like表达量在个体水平上分为低,中和高三种类型,各种类型的平均荧光值依次为21.479±0.865(14.583%)、27.984±2.218(81.034%)和36.690±0.058(6.897%);相关性分析结果显示,红细胞免疫黏附水平与CR1-like表达水平达到显著相关程度(r=0.835,P0.01),通过回归分析,获得二者符合典型的S曲线(lny=7.817-102.911x,r2=0.729,P0.01)。上述结果表明,不同的长白猪个体的红细胞CR1-like表达量具有差异性,且该特点与猪红细胞免疫黏附水平具有相关性。     

猪带绦虫Ddi1-like蛋白的真核表达及其抗血清的制备

为了对DNA损伤诱导蛋白1(Ddi1-like)基因功能进行研究,本研究参考GeneDB中猪带绦虫基因组注释信息,通过设计5′和3′端特异性引物,利用cDNA末端快速扩增法(RACE)获得全长cDNA,并在毕赤酵母GS115中进行诱导表达;将纯化后的Ddi1-like重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗血清。结果,成功利用RACE获得Ddi1-like基因的全长cDNA序列;在真核表达系统中,绦虫上的Ddi1-like重组蛋白获得表达;SDS-PAGE和Western-blot分析表明,获得重组蛋白即为Ddi1-like蛋白;免疫后获得抗血清,其效价达到1∶12 800。上述结果为后续研究Ddi1-like蛋白的酶切活性研究提供了基础。     

猪红细胞类补体受体Ⅰ型膜结合蛋白的筛选

本研究旨在鉴定猪红细胞类补体受体Ⅰ型(complement receptor 1-like,CR1-like)的膜结合蛋白,以期为探讨CR1-like在膜上分布的分子基础提供理论数据。采用免疫磁珠沉淀的方法纯化猪红细胞CR1-like,利用还原性SDS-PAGE电泳及Western-blot试验,得出猪红细胞CR1-like的分子大小;利用质谱技术对纯化的CR1-like免疫沉淀复合物进行鉴定,并对质谱数据进行相关分析。CR1-like免疫沉淀复合物的还原性SDS-PAGE和Western-blot的鉴定结果显示,CR1-like分子大小约为50 ku;CR1-like免疫沉淀复合物的质谱鉴定筛选出117个候选蛋白,根据肽段数、特异肽段数、序列覆盖率、分值等及对候选蛋白的生物信息学分析筛选出FERMdomain-containing protein作为候选蛋白进行下一步试验。上述结果表明,本研究成功建立了免疫磁珠沉淀CR1-like方法,并筛选出CR1-like的膜结合候选蛋白。     

弓形虫NT株回猪和在猪体内包囊分布的初步观察

1977年在我国高热病猪中发现了爆发性弓形虫病。1979年又在我国高热病猪中发现了弓形虫包囊弱毒株,接种猪只不引起死亡;接种小白鼠不产生症状,但在脑内可形成包囊。由于这株虫株是在江苏南通县的病猪中分离的,故定名为弓形虫南通包囊弱毒株,简称NT株。为了证实NT株在猪体内,是否与在小白鼠体内一样可形成包囊,因此将猪源小白鼠传代的NT株作了回猪试验。     

猪附红细胞体a1基因的克隆及序列分析

为研究猪附红细胞体DnaK样蛋白HspA1编码基因a1的遗传变异规律,根据GenBank上登录的猪附红细胞体a1基因核苷酸序列(登录号AM265536)设计合成1对引物,从上海市3个屠宰场采集自然感染猪附红细胞体的猪血液,提取基因组DNA作为模板,进行a1基因部分序列的PCR扩增、克隆、序列测定及生物信息学分析。结果显示,共获得了41条猪附红细胞体a1基因片段序列,序列长度均为1 657bp;同源性分析显示,它们与GenBank中登录的猪附红细胞体a1基因核苷酸序列的相似性在97.7%~99.9%之间,氨基酸序列的相似性在99.1%~99.8%之间。系统进化分析表明,多数上海市猪附红细胞体分离株的a1基因与GenBank中登录的德国54/96分离株a1基因序列在同一个聚簇上。     

创制猪水泡病疫苗的初步研究

本文报告了猪水泡病病毒的生产、灭能以及用它作成的疫苗对猪的免疫原性。病毒在IB-RS-2系细胞的单层和悬浮培养中都能培养。在两种系统中于大约24小时内都能获得每毫升10~(8.5)至10~(9.0)产斑单位的病毒滴度。目前可用单层细胞系统来大规模生产病毒。 用AEI在26℃和37℃使病毒灭能都表现是按照一级反应进行的。在大量样品的试验证实用这种药品灭能的病毒悬浮液是安全的。用BPL灭能时,即令是用高到0.25％的浓度,也未能生产不含感染性病毒的产品。 用氢氧化铝和皂角甙或者油作为佐剂并含组织培养液1.0毫升的抗原作成的疫苗能对强烈的攻击提供高度的保护力。注射氢氧化铝—皂角甙疫苗和油质疫苗的试验猪的病损评分分别为0.7和0.4分,与此相比,一个未免疫的对照组的病损评分则为14.3分。免疫后形成的免疫球蛋白遵循在其他小核糖核酸病毒所见的IgM和IgG图案。     

猪附红细胞体HspA1与DnaJ相互作用的双分子荧光互补的研究

为研究猪附红细胞体DnaK样蛋白HspA1与DnaJ是否存在相互作用,采用双分子荧光互补技术进行检测。利用生物信息学软件预测HspA1的B细胞抗原表位和功能结构域,选取具有功能结构域且抗原表位富集的第388~609位区域为HspA1表位区。分别对HspA1编码基因a1、HspA1表位区编码基因a1-epi进行扩增,并克隆到pBiFC-VC155载体中,同时将DnaJ编码基因dnaj克隆到pBiFC-VN155中,分别与上述重组质粒共转染293T细胞。结果显示,成功地构建了含HspA1编码基因a1、HspA1表位区编码基因a1-epi、DnaJ编码基因dnaj的真核重组表达质粒pBiFC-VC155-a1、pBiFC-VC155-a1-epi和pBiFC-VN155-dnaj,共转染的293T细胞在荧光显微镜下均能观察到绿色荧光,表明HspA1和HspA1表位区均与DnaJ存在相互作用。本研究为进一步探讨HspA1的生物学功能和作用机制提供了新的思路。     

英国猪水疱病流行的初步研究

1972年12月11日,斯塔福郡(Staffordshire)报告了猪的水疱病的一次流行。根据临床症状诊断为口蹄疫,但未能为起初的血清学试验所证实。遂曾进行研究来确定其病原的性质。 以前也曾两次在猪流行过临床上与口蹄疫无法区别的疾病,但从其中分离出与口蹄疫不同的病原。Nardelli氏等于1966年在意大利描述过这样一种综合病征,指出其病原为一种猪     

英国猪水泡病流行的初步研究

1972年12月11日,斯塔福郡(Staffordshire)报告了猪的水泡病的一次流行。根据临床症状诊断为口蹄疫,但未能为起初的血清学试验所证实。遂曾进行研究来确定其病原的性质。 以前也曾两次在猪流行过临床上与口蹄疫无法区性的疾病,但从其中分离出与口蹄疫不同的病原。Nardelli氏等于1966年在意大利描述过这样一种综合病征,指出其病原为一种猪     

猪肺炎霉形体膜制备方法对膜活性影响的研究

以猪肺炎霉形体为材料 ,分别采用反复冻融、低渗裂解、超声破碎等方法进行破膜试验。从膜蛋白收获率、标志酶活性、膜毒性等方面加以分析 ,以探索获取膜制剂的最佳条件。结果表明 ,采用低渗冻融超声相结合的膜制备方法使膜蛋白的收获率达 3 0 %左右 ;ATPase活力及膜毒性良好     

猪附红细胞体的发现与诊断

附红细胞体(Eperythrozoon)是寄生于动物细胞表面和血浆中的一种多型性单细胞和边虫相似的红细胞孢子虫病。其临床主要的特点是高热、贫血和黄疸。本文作者在1981年9月至1983年8月,先后在广州、顺德、台山、番禺、清远等地的41头病猪血液中发现附红细胞体,现报道如下: (一)临床症状 体温40～41.5℃,精神萎顿,食欲减少或废绝,结膜苍白,转圈呆滞,四肢抽搐。个别猪后肢麻痹,不能站立,前肢有轻度水肿。乳猪不会吃奶,脐部、四肢下部有大小不等的出血点。病猪濒     

猪败血性链球菌病病原鉴定的初步研究

能引起猪病的链球菌种类繁多,由于菌种致病力的差异及侵害组织的不同,引致的猪只疾病也甚复杂。常见的有链球菌性淋巴结炎、关节炎、脑膜炎及心内膜炎等。自六十年代初在华南部分省(区)爆发一种以急性经过、传播迅猛的猪败血性链球菌病,目前已蔓延到中南及西南等省(区),引起严重损失。对猪败血性链球菌病的病原进行正确的分群鉴定无论在理论及实践防治工作中及公共卫生上都有重大意义。 Collier(1951)首先对由猪体分离的β溶血性链球菌按Lancefield法进行分群鉴定,继后     

疑似猪痢疾的初步观察

1973年5月在我场一个猪场里,发生一种独特的肠道疾病。其症状为拉血便,成年母猪、150市斤以上的肥猪也能感染,并引起死亡。本病初发时没有进行有效的封锁措施,将发病猪场的猪调到其他养猪单位,也引起了相同症状的肠道疾病,群众称为“血痢病”。     

猪和兔附红细胞体的体外培养

用RPMI1640和小牛血清按不同比例混合作为体外培养猪和兔附红细胞体的基础培养基,同时以去掉红细胞上自然感染的附红细胞体后的红细胞泥作为培养附红细胞体的寄生载体,进行猪和兔附红细胞体的体外培养。培养结果表明,以 RPMI1640 与小牛血清按 6∶4 比例混合,同时选用兔红细胞泥作为载体的培养效果最佳,接种感染了附红细胞体的猪、兔阳性红细胞后 24 h生长达到高峰,感染率分别为40.2%和31.0%,而采用猪红细胞泥作为培养载体时红细胞感染率无明显升高。     

猪附红细胞体PCR-ELISA检测方法的建立

根据猪附红细胞体OxaA膜蛋白基因设计了1对分别标记生物素和地高辛的引物,将PCR扩增产物固定至链霉亲和素包被的酶标板中进行酶联显色检测,并优化PCR扩增及ELISA检测步骤,建立了猪附红细胞体PCR-ELISA。结果显示,该方法较传统的PCR-ELISA节约近2h,最低能检出0.36pg的猪附红细胞体DNA,敏感性比常规PCR高10倍,且与猪链球菌、猪肺炎霉形体、大肠杆菌等无交叉反应。用该方法对64份猪血液中提取的DNA样品进行检测,结果阳性检出率为35.9%,明显高于常规PCR的28.1%。结果表明,建立的猪附红细胞体PCR-ELISA具有敏感、特异、安全和快速的特点。     

猪附红细胞体PPA-ELISA检测方法的建立

用物理方法纯化猪附红细胞体抗原,用纯化抗原免疫兔制备超免疫血清,以辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白作为二抗,建立了辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白的酶联免疫吸附试验(PPA ELISA)检测方法。结果显示,用PPA ELISA方法检测猪血液中的附红细胞体,具有很高的敏感性和特异性,重复性良好,完全适用于猪附红细胞体病的实验室诊断。     

屠宰猪胃溃疡病的初步调查

胃溃疡是猪的一种较为常见的胃部疾患。通常包括胃粘膜上皮的溃疡、糜烂及角化等一系列的病理变化。大多数病例在临床上无明显症候,呈一种隐性的病理过程。故临床发病率的统计很难反映真实的发病情况。但在屠宰或死后剖检则往往可以较多地发现这一疾病。世界各地均有本病发生,且随着集约养猪业的发展及浓厚饲料快速育肥的推广,本病的发生有     

驱除猪细颈囊尾蚴的初步试验

选4头生长缓慢的小猪,沿腹下中线切开,直接观察腹腔内细颈囊尾蚴的数量、大小,寄生部位,并作好记录。然后用注射器将预先准备好的敌百虫溶液(用量按猪每公斤体重0.1克计算)用蒸馏水配成5％浓度,直接喷射在细颈囊尾蚴的表面,分层缝合腹壁。连续3天,每日2次测温,观察精神、食欲,未发现异常。过1星期再切开2头小猪的腹壁观察,发现虫体已萎缩,其包囊壁出现皱纹,内含液体变为混浊。另2     

猪肾的动脉分支与分布

猪肾动脉分支多为二支型 ,偶见三支型。在二支型中多数是前后干型 ,少数是背腹干型。在前后干型中 ,一般由前干发出前背侧肾段动脉和前腹侧肾段动脉 ,后干发出后背侧肾段动脉和后腹侧肾段动脉。在背腹干型中 ,一般由背干发出背前侧肾段动脉和背后侧肾段动脉 ,由腹干发出腹前侧肾段动脉和腹后侧肾段动脉。三支型又可分为背腹三支型和前后三支型两种 ,前者肾动脉分支为背前干、背后干和腹干 ,后者分为前干、后干和中间腹侧干。在肾的各动脉分支中未见与肾表面明显平行的动脉     

抗菌肽HJH-1对猪胸膜肺炎放线杆菌形成生物被膜的影响

细菌的生物被膜是病原微生物产生耐药性、免疫逃逸和造成持续感染的重要因素之一。为了解抗菌肽HJH-1对猪胸膜肺炎放线杆菌形成生物被膜的影响,本研究采用微量测定法结合扫描电子显微镜技术来评价HJH-1对APP生物被膜的作用。结果显示,与对照组相比,添加浓度为100 g/m L的抗菌肽HJH-1后,在培养APP至第48小时形成的生物被膜的数量显著减少,说明HJH-1能显著抑制APP的生长(P0.05);扫描电子显微镜的检测结果也显示,HJH-1在50 g/m L时APP形成的生物被膜变薄,细菌的间隙增大,HJH-1在100 g/m L时可明显抑制APP形成生物被膜;小鼠肺炎模型研究结果也发现,皮下注射HJH-1(20 mg/kg)可以有效减轻APP所引起的肺部炎症性反应。本研究结果为猪胸膜肺炎放线杆菌的治疗提供新的思路,也为抗菌肽HJH-1的临床应用提供了理论基础。