褪黑激素对犬脂肪干细胞向雪旺细胞分化过程中凋亡发生的抑制作用研究

为了探讨褪黑激素(Mel)对犬脂肪干细胞(ADSCs)向雪旺细胞(SCs)诱导分化过程中凋亡发生的影响。本实验将犬ADSCs诱导分化为SCs,并使用免疫荧光法进行鉴定。采用CCK8法选取Mel的最佳浓度。应用q RT-PCR法和Western-blot法检测无Mel组和Mel处理组中ADSCs向SCs诱导过程中细胞凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8、Bcl-2和Bax的m RNA和蛋白表达水平。结果显示,50 nmol/L Mel处理过的细胞活力最高;ADSCs向SCs诱导后S-100和GFAP呈阳性表达,并且观察到Mel的添加并不会影响到SCs的表型特征。ADSCs向SCs诱导后Bcl-2表达量明显低于对照组,Caspase-3、Caspase-8和Bax的表达量显著高于对照组,细胞凋亡较多;在加入Mel后Bcl-2表达量显著升高,Caspase-3、Caspase-8和Bax的表达量显著下降。结果说明Mel可以显著抑制犬ADSCs向SCs诱导分化过程中的凋亡发生。     

犬Mnx1基因过表达载体的构建及其对脂肪间充质干细胞向胰岛β细胞分化的影响

本研究旨在构建犬Mnx1基因腺病毒过表达载体,并探究Mnx1基因过表达对犬脂肪间充质干细胞向胰岛β细胞方向分化的影响。本试验构建了腺病毒重组表达载体pAD-Mnx1,经293A细胞包装扩增后产生具有感染性的重组腺病毒,将其按感染复数(MOI)100感染犬ADSCs后,分别在第3、6、9、12和15天观察绿色荧光蛋白的表达情况、细胞形态变化和胰岛β细胞发育相关基因的表达情况。结果显示,ADSCs在感染后24 h出现绿色荧光,形态无显著变化;Mnx1基因表达可激发胰十二指肠同源盒1(Pdx1)基因、神经元素3(Ngn3)基因、肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A(Mafa)基因、NK2同源盒2(Nkx2.2)基因、NK6同源盒1(Nkx6.1)基因、神经分化因子1(Neurod1)基因、成对合基因4(Pax4)和GATA结合蛋白4(Gata4)基因等内源性基因的表达。结果证实,腺病毒介导的过表达载体pAD-Mnx1可在犬ADSCs超表达Mnx1基因,从而诱导犬ADSCs向胰岛前体细胞分化,具有进一步诱导犬ADSCs形成胰岛β细胞的可能。     

脂肪干细胞联合褪黑激素对犬坐骨神经损伤的修复作用

为了提高脂肪干细胞(ADSCs)对犬坐骨神经损伤的修复效果,采用MTT法筛选褪黑激素(MT)促进ADSCs增殖的最佳浓度。通过比较ADSCs联合MT复合神经支架材料修复犬坐骨神经损伤的试验效果,观察受损神经的再生情况、腓肠肌形态及其功能恢复情况。采用辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪检测方法和透射电镜方法评价ADSCs联合MT的治疗效果。结果,与单独移植ADSCs组相比,50 nmol/L MT联合脂肪干细胞治疗组的犬脊髓神经节中HRP标记的阳性细胞数量、再生神经纤维数目明显增多;有髓纤维面积和密度分别显著提高了15.3%和21.0%;腓肠肌湿重恢复率提高了8.09%。上述结果表明,MT预处理ADSCs显著提高了ADSCs对犬坐骨神经损伤的修复效果,为临床上坐骨神经损伤的修复提供了新的治疗策略。     

猪前脂肪细胞分化过程中RETN基因的表达

为探讨猪前脂肪细胞分化过程中抵抗素基因(RETN)表达水平的变化规律,从1日龄仔猪皮下脂肪组织分离前脂肪细胞,于DMEM/F12培养基中培养3、5、7、10d后收获细胞。通过油红O染色法观察前脂肪细胞分化,并用实时荧光定量RT-PCR检测前脂肪细胞分化过程中RETN基因表达水平的变化。结果,在前脂肪细胞分化过程中,RETN基因表达水平显著下降(P<0.01),细胞形态亦发生相应变化,即细胞变圆,细胞内脂肪滴体积增大。结果表明,RETN基因与前脂肪细胞脂肪代谢调节有关,其表达水平下调能促进前脂肪细胞分化。     

兔脂肪间质干细胞的分离培养与鉴定

取兔腹股沟皮下脂肪组织,用Ⅰ型胶原酶消化,分离培养脂肪间质干细胞(MSCs),并用免疫组化和体外诱导分化方法对其表面分子标志和多向分化潜能进行鉴定。结果显示,兔脂肪组织中能够分离培养出脂肪MSCs,该类细胞表达CD29、CD44和CD105,不表达CD34、CD45及HLA-DR表面分子标志,并具有可分化为脂肪细胞、神经细胞和成骨细胞的多向分化潜能,证实兔脂肪组织中存在具有多向分化潜能的MSCs。     

大鼠脂肪细胞分化过程中脂代谢相关基因转录表达时序的研究

对大鼠附睾和肾周脂肪组织分离的前体脂肪细胞原代培养,采用RT-PCR法分析脂代谢重要酶和转录因子基因在不同分化阶段转录表达的时序变化。结果显示,在前体脂肪细胞阶段,固醇调控元件结合蛋白(SREBP)-1c、碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)以及脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶α(ACC1)、硬酯酰辅酶A去饱和酶(SCD)和激素敏感脂酶(HSL)基因均不转录表达;HSL mRNA在分化初期表达,中期表达水平最高,分化末期降低;SCD mRNA在分化中期表达,末期表达水平显著提高;分化初期FAS mRNA水平明显高于中期和末期;ACC1mRNA仅在末期表达;分化初期SREBP-1c mRNA水平较高,中期和末期显著下降;ChREBP mR-NA表达水平在分化末期稍高于中期,但差异不显著。表明,SREBP-1c mRNA的表达与脂肪细胞早期分化调控有关,分化成熟脂肪细胞的ChREBP mRNA表达可能与生脂基因的转录激活有关。     

丙酸睾酮对神经支架桥接修复犬坐骨神经缺损的作用

为研究丙酸睾酮对神经脱细胞支架桥接修复犬坐骨神经缺损的作用,选杂种犬6只,手术制备坐骨神经3 cm缺损模型,并用同种异体神经脱细胞支架桥接修复,将修复犬随机均分为试验组和对照组。试验组在犬修复肢小腿外侧注射丙酸睾酮;对照组在犬相应部位注射等量生理盐水。术后4个月,行肌电图检测、腓肠肌湿重比率、腓肠肌和修复神经的组织形态学观察。结果显示,试验组和对照组腓肠肌湿重比率分别是(77.73±2.72)%、(64.59±3.98)%,神经传导速度分别是(21.23±2.23)m/s、(15.7±1.02)m/s,波幅分别是(1.64±0.89)mv、(1.28±0.82)mv。两组间湿重比率、传导速度、波幅均差异显著(P0.05)。试验组中的再生神经纤维数量多于对照组,板层结构清晰完整且优于对照组。结果表明,丙酸睾酮对同种异体神经脱细胞支架桥接修复犬坐骨神经缺损和生理功能恢复均具有促进作用。     

比格犬神经垂体肥大细胞的电镜观察

肥大细胞是一种重要的免疫细胞。近年来 ,关于免疫系统与神经系统的功能联系 ,已引起广泛关注。已有证据表明 ,免疫细胞 (包括肥大细胞、巨噬细胞和淋巴细胞等 )可以存在于或进入中枢神经系统内 ,并发挥重要的作用。目前研究表明 ,在大鼠、绵羊和刺猬等少数几种动物的中枢神经系统内已发现有肥大细胞关于犬的中枢神经系统以及与其密切相关的神经垂体内是否存在肥大细胞 ,以往未见报道。本研究应用透射电镜在实验动物比格犬 (Ｂｅａｇｌｅ)神经垂体实质中发现有少量的肥大细胞 ,并对其超微结构进行了观察。1　材料与方法3～ 6月龄健康比格犬 …     

犬瞬膜腺肥大的手术疗法

犬瞬膜腺位于内眦瞬膜下,由于瞬膜血管分布丰富,腺体分泌过剩可使腺体肥大,或因瞬膜腺管管口被炎性产物或异物阻塞使腺体增大,超过瞬膜游离缘而突出于内眼角所致肿块称瞬膜腺肥大,俗称樱桃肉或息肉.常见于小型犬及未成年犬,无性别差异.笔者总结出简易手术疗法,效果良好.     

保定宁对犬心血管系统的影响

为了进一步了解保定宁对动物心血管系统的效应,为临床安全用药提供依据,我们进行了本试验。 (一)材料 实验仪器:RM-6000型多导记录仪(日本产)。实验动物:健康成年杂种犬11只,雌雄均有,体重8～19kg。实验药品:氯醛糖(a-Chloralose),英国进口,批号15288,用时配成0.5％溶液;保定宁注射液,解放军兽医大学军事兽医研究所制,批号850306。     

犬转移因子等对淋巴细胞转化的影响

细胞免疫学研究发现，转移因子（TF）具有增加淋巴细胞转化作用，可提高受体的免疫功能（Hambinetal1976），但其作用有浓度的依赖性（Rebullaetal1991）。在临床化学疗法中，多数药物都能抑制受体的免疫功能，TF能否拮抗化疗药物的免疫抑制作用尚未见有报道。为了在兽医临床应用和生产TF提供实验依据，我们进行了TF、丝裂霉素（MMC）、5──氟脲嘧啶（5──FU）和TF与MMC或5──FU合用时对淋巴细胞转化影响的比较试验。（一）材料与方法1.主要药物与试剂：①PHA：广州医药工业研究所生产；②MMC：日本KyowaHakka出品；③5──…     

大鼠神经干细胞的分离培养和分化

分离大鼠大脑皮质及皮质下组织 ,经消化及机械吹打后 ,用悬浮培养法、有限稀释法获得来源于同一细胞的亚细胞系克隆 ;用免疫细胞化学法鉴定神经干细胞 (NSCs)。结果 ,从大鼠大脑皮质及皮质下分离的组织 ,经原代和传代培养均可形成细胞克隆 ,并具有增殖能力 ;原代和传代细胞抗原与抗巢蛋白 (nestin)单克隆抗体反应呈阳性 ;单细胞克隆能分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结果表明 ,用此方法分离的细胞具有自我更新和分化潜能 ,有很强的增殖能力 ,是属于中枢神经系统的干细胞。     

利用CRISPR-dCas9系统促进脂肪干细胞的成骨诱导分化

为了建立一种快速促进脂肪间充质干细胞成骨诱导分化的方法,本研究利用CRISPR-dCas9系统快速激活成骨前体基因的表达,通过对细胞内前体基因转录的检测和诱导分化后茜素红染色来确定成骨诱导分化的效率。结果可见,通过CRISPR-dCas9系统可以快速地启动RUNX2和OSX基因的转录;经成骨诱导分化后茜素红染色显示,基因编辑过的细胞成骨诱导更快。本研究结果表明,通过CRISPR-On系统可以有效地促进成骨前体细胞相关基因RUNX2和OSX的表达,从而使得骨前体细胞相关基因可以被快速地内源性激活,使得脂肪间充质干细胞快速进入成骨诱导分化状态,促进成骨分化的潜能。     

猪肺炎霉形体膜制备方法对膜活性影响的研究

以猪肺炎霉形体为材料 ,分别采用反复冻融、低渗裂解、超声破碎等方法进行破膜试验。从膜蛋白收获率、标志酶活性、膜毒性等方面加以分析 ,以探索获取膜制剂的最佳条件。结果表明 ,采用低渗冻融超声相结合的膜制备方法使膜蛋白的收获率达 3 0 %左右 ;ATPase活力及膜毒性良好     

胰岛素对原代培养大鼠前体脂肪细胞增殖分化的影响

对分离自20日龄雄性SD大鼠附睾和肾周白色脂肪组织的前体脂肪细胞进行原代培养,并采用MTT比色法、油红O染色提取法分析了100~400 nmol/L胰岛素对其增殖、分化的影响,同时利用半定量RT-PCR分析了该浓度胰岛素对分化标志基因———脂肪酸合酶(FAS)、乙酰CoA羧化酶α(ACC1)基因mRNA表达的影响。结果显示,胰岛素能有效地促进前体脂肪细胞的增殖和分化(P<0.05),在400 nmol/L以下具有剂量依赖性;胰岛素处理72 h能显著提高脂肪细胞FAS和ACC1基因mRNA的表达水平(P<0.05)。证实胰岛素对原代培养大鼠前体脂肪细胞增殖分化有明显促进作用。     

吉氏巴贝斯虫人工感染对犬免疫功能的影响

通过静脉接种试验犬建立人工感染吉氏巴贝斯虫试验模型,利用MTT法检测外周血淋巴细胞(PMBC)的增殖能力,利用流式细胞术分析外周血中CD3~+、CD4~+、CD8~+T淋巴细胞亚群的分布,利用Real-time PCR检测外周血中IL-6、IL-17、TNF-α、IFN-γmRNA的转录水平。结果显示,与对照组相比,感染吉氏巴贝斯虫后犬PMBC的增殖能力显著下降(P0.05),外周血中CD3~+、CD4~+T淋巴细胞占比降低显著(P0.05),CD8~+T淋巴细胞占比下降不显著(P0.05)。与对照组犬相比,IL-6、TNF-α、IFN-γmRNA转录水平显著下调(P0.05)。结果表明,吉氏巴贝斯虫感染对犬免疫机能具有明显的抑制作用。     

犬细小病毒免疫球蛋白对犬细小病毒中和活性的研究报告

犬细小病毒免疫球蛋白是治疗该病的主要药物。本研究针对静脉注射用犬细小病毒免疫球蛋白、多克隆抗体进行了血凝抑制试验比较,并在细胞上对其进行了蛋白毒性试验和中和活性试验等对比研究。结果发现,免疫球蛋白和高免血清多克隆抗体的血凝抑制价分别为1×211和1×210,它们稀释16倍以后对细胞无毒性作用,其中静脉注射用犬细小病毒免疫球蛋白的中和抗体效价为1∶873,明显优于多克隆抗体的中和效价(1∶426)。以上研究结果为静脉注射用犬细小病毒免疫球蛋白对犬细小病毒病的治疗提供了细胞学上的依据。     

犬腺病毒1型对犬北极狐和银狐的致病性比较

为比较本实验室保存的狐源犬腺病毒1型(CAdV-1)对犬、北极狐和银狐的致病性,以犬、北极狐和银狐为实验动物,建立3组CAdV-1 F1301株的感染模型。攻毒后监测各组动物的临床症状,并计算CAdV-1对这3种动物的半数致死量(LD_(50)),收集感染致死动物的脏器组织,采用病理组织观察、免疫组织化学试验和实时荧光定量PCR等方法比较CAdV-1对犬、北极狐和银狐的致病性。结果显示,3组实验动物均出现神经症状,CAdV-1对犬、北极狐和银狐的LD50分别为106.5T CID50、105.5TCID50和103.0TCID50。病理组织观察和免疫组织化学试验结果显示,3组动物的肝均出现较严重的病理损伤,且均呈CAdV-1强阳性,银狐的脾、北极狐的肺和脾均呈CAdV-1阳性。荧光定量PCR结果显示,3组动物肝中均检测到高拷贝数的病毒DNA,其中银狐肝中的病毒DNA载量高达10~(8.83)copies/g,显著高于北极狐(P0.05)和犬(P0.01),银狐脑组织中的病毒DNA载量也显著高于北极狐(P0.01)和犬(P0.01)。结果表明针对CAdV-1,银狐的易感性大于北极狐,北极狐的易感性大于犬;CAdV-1对3组动物的主要靶器官为肝,银狐的脾和脑以及北极狐的脾和肺也为CAdV-1感染的重要靶器官。本研究为CAdV-1的病理学诊断和综合防控提供了参考。     

全球金融危机对印度外向直接投资的影响

2008年金融危机以来,作为曾推动世界经济增长强劲动力的国际对外直接投资急剧下降。新兴经济体印度的外向直接投资也受到了严重的冲击。危机对印度外向直接投资主要形式的褐地投资在投资量、投资行业和投资区位等方面都产生了一系列的影响。导致印度对外直接投资下降的主要原因在于全球金融危机的连锁反应,而投资的恢复则依赖于国际国内经济形势的好转及市场条件的改善。     

铜对肉鸡肝细胞线粒体膜通透性及呼吸的影响

为进一步了解铜对生物体的生物学效应,选用硫酸铜作为铜源,向即时分离的肉鸡肝细胞线粒体培养液内加入终浓度分别为5、10、20μmol/L的铜(以铜计),孵育10 min后,观察肝细胞线粒体膜通透性及呼吸的变化。结果显示,铜对线粒体膜通透性转换孔有较显著的影响,造成线粒体不同程度的肿胀,表现为线粒体悬液在540 nm处的吸光值下降,且铜浓度越高,吸光值下降越明显,在孵育6 min后3种浓度的吸光值下降百分比差异显著(P<0.05)。随着铜浓度的升高,线粒体呼吸逐渐减弱,RCR、P/O、OPR均显著降低(P<0.05),这些变化可能是微量元素铜对生物机体产生毒害作用的本质原因之一。