狂犬病 犬肠炎 犬瘟热 犬腺病毒病 犬副流感五联弱毒冻干疫苗的研究

从国外引进的犬瘟热病毒（ＣＤＶ）、犬细小病毒（ＣＰＶ）、犬腺病毒－２型（ＣＡＶ２）和犬副流感病毒（ＣＰＩＶ）四联弱毒样品中，分离筛选出增殖性良好的ＣＰＶ－ＸＮ１，ＣＡＶ２－ＸＮ３和ＣＰＩＶ－ＸＮ４株。另外还通过离体异种细胞交叉传代，获得的ＣＤＶ－ＸＮ１１２弱毒株；从狂犬病毒（ＲＶ－ＥＲＡ）株疫苗样品中筛选出ＥＲＡ８３６株。经试验证明这５株病毒在５代以内可作为制苗用种毒。采用静置和旋转培养法高滴度扩增这５株弱毒，必要时还采用低温培养和物理浓缩法进一步提高病毒滴度。５株弱毒细胞培养物与保护剂按适当比例混匀，制成犬五联弱毒疫苗，给８周龄以上的血清抗体阴性犬每只注射２ｍｌ，在１５ｄ内产生针对犬六大疫病的坚强免疫力，免疫期不低于９个月；—２０℃保存期不低于２４个月，２～８℃保存不低于９个月，室温（１８～２２℃）保存不低于６０ｄ，各种弱毒的滴度无明显降低，保护率达１００％。给５０００多只幼犬分别于２月和３月龄时各注射１个剂量（２ｍｌ）五联苗，９个月内进行追踪观测未发现不良反应。５００余只免疫犬的血清学监测证明本联苗免疫力确实。     

鸡马立克氏病单价活疫苗免疫效力比较试验

用农业部南京药械厂和三家外国动物保健品公司生产的４种火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）冻干苗、实验室制备的ＣＶＩ９８８细胞结合苗和ＨＶＴ细胞结合苗等６种鸡马立克氏病（ＭＤ）单价活疫苗免疫１日龄ＳＰＦ白来航鸡，８日龄时用鸡马立克氏病强毒（ｖＭＤＶ）ＧＡ株攻击，同时以Ｚ４＋ＦＣ１２６双价活疫苗作对照，进行免疫效力比较试验。结果表明，６种ＭＤ单价活疫苗均能使免疫鸡群获得对ｖＭＤＶ攻击的免疫保护力，免疫效力强弱顺序依次是ＣＶＩ９８８，ＨＶＴ细胞结合苗和ＨＶＴ冻干苗；国产ＨＶＴ冻干苗的免疫效力不低于三家外国公司生产的ＨＶＴ冻干苗；Ｚ４＋ＦＣ１２６双价苗的免疫效力显著高于各种ＭＤ单价苗     

热应激对鸡免疫功能影响的研究

在不同热应激处理下分别用新城疫油乳剂灭活苗和Ｎ７９弱毒苗免疫伊莎蛋用雏鸡，各试验组抗体效价和淋巴细胞转化率均有不同程度下降。高温处理２４ｈ的雏鸡，无论用油乳剂灭活苗还是用Ｎ７９弱毒苗免疫，与对照组间无明显差异；高温处理４８ｈ的油乳剂灭活苗免疫组鸡，在免疫初期（免疫后８ｄ）抗体效价和淋巴细胞转化率均下降（Ｐ＜０．０５），以后逐渐上升，与对照组间无明显差异；而Ｎ７９弱毒苗免疫鸡在整个试验期抗体效价明显低于对照组。     

鸡病毒性关节炎JN－1株疫苗的免疫研究

将鸡病毒性关节炎病毒（ＡＶＡＶ）Ｊ－１株经一系列培养和蚀斑克隆，筛选出一株蚀斑大小为２．７～３．１ｍｍ的克隆株（ＪＮ－１株）。该株分别以１０￣（５·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０）足掌皮下注射和１０￣（４·７２５）～１０￣（６·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０）肌肉注射１日龄肉鸡，以５×１０￣（６·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０）肌肉注射肉用种鸡，均不产生任何临床症状和病理变化；在敏感雏鸡体内传代５次和鸡胚细胞内传代１０次，无毒力返强现象。雏鸡的最低免疫剂量为１０￣（３·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０），抗体持续时间达９个月以上。用ＪＮ－１株免疫１日龄肉用雏鸡后７、１４、２１和２８天分别用强毒于足掌皮下攻击，临床保护率分别为２／１０、９／１０、１０／１０、１０／１０，病理保护率分别０／１０、７／１０、９／１０、１０／１０。抗体应答反应和特异性淋巴细胞转化试验证明，ＪＮ－１株的免疫作用是由细胞免疫和体液免疫共同完成。体外中和病毒试验显示，ＪＮ－１株抗血清能中和Ｊ－１、Ｓ＿（１１３３）、ＦＤＯ和Ｈ＿（９３０７）株。在５个有疫情的肉用种鸡场共免疫２８０００余只仔鸡和种鸡，免疫后再无ＡＶＡ疫情发生。     

传染性法氏囊病病毒Ⅰ型变异株的分离鉴定及其多价弱毒苗免疫试验

先后在江苏、浙江、四川等８省（区）从临床患传染性法氏囊病的鸡群中采集法氏囊病料，分离到３２个野毒株，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定，其中１７株病毒为传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ），应用交叉中和试验，将分离毒株分为５个亚型，用ＩＢＤＶⅠ型标准变异株高免血清作中和试验鉴定，其中５个分离毒株有较高中和价，初步定为ＩＢＤＶⅠ型变异株。将其在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）上连续传代致弱，与标准Ⅰ型弱毒株联合制成多价弱毒疫苗，免疫试验表明多价弱毒疫苗具有良好的免疫效果，免疫组攻毒１００％保护，对照组攻毒死亡率为９２％     

猪流行性腹泻弱毒疫苗的研究

用从广州地区流行性腹泻病猪分离并适应到Ｖｅｒｏ等传代细胞的猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ）Ｇ１强毒株，通过Ｖｅｒｏ、ｐＫ１５、ＳＴ细胞株的连续传代，证明第７２代毒已被致弱。用８３代毒（Ｐ８３）对吃初乳前的小猪以８～１０ｍｌ剂量口服连续传５代，每代都从接种猪小肠取样接种细胞进行培养鉴定，并于增殖后作为次代接种材料，结果５代毒均未引起小猪发病，证实该代次毒株的安全、稳定，达到了常规弱毒疫苗株要求的标准。用Ｐ８３制成弱毒疫苗，对２２头８～１０日龄小猪进行免疾效力试验，１４头口服免疫，８头颈肌注射免疫，剂量均为２ｍｌ／头。免疫后２１ｄ以最小发病量（即原毒液的１：１２稀释液）及原毒液的２倍、４倍和８倍的稀释液经口进行强毒攻击，对照组１２头也以相对剂量同时攻击。结果免疫组仅口服免疫、经大于最小强毒攻击量６倍剂量攻击组中１头（１／２）有一过性轻微腹泻，发病不到２４ｈ即恢复。对照组的１２头中有１０头典型发病，严重腹泻，并有寒颤等症状，病程长达３～６ｄ，７ｄ后腹泻症状消失，但体况明显削瘦。试验证明Ｐ８３制备的弱毒疫苗的总免疫效力达９４．６％，表明Ｐ８３已具备弱毒疫苗株的要求。     

一种新发现的雏鹅传染病研究

１９９３年以来，四川省一些地区的３～３０日龄雏鹅发生一种传染病，死亡高峰期１０～１８日龄，发病率３０％～１００％，死亡率２５％～７５％，有时可高达１００％，其临床症状和病理变化与小鹅瘟有很多相似之处。利用原代鸭胚成纤维细胞培养及蚀斑克隆技术从不同地区分离到１０株病毒，分离病毒呈球形或椭圆形，无囊膜，直径７０～９０ｎｍ，不凝集鸡、鸭、鹅、鸽、黄牛、水牛及猪的红细胞，对氯仿不敏感，５６℃作用３～５ｈ不影响病毒的致病性，病毒核酸类型为ＤＮＡ。１０株病毒的抗原性一致，但与鸭瘟病毒（ＤＰＶ）和小鹅瘟病毒（ＧＰＶ）没有中和抗原相关性。分离的病毒通过人工感染鹅可以复制出病例。根据分离病毒的部分特性，初步将其归为腺病毒，暂定病名为雏鹅新型病毒性肠炎（ＮＧＶＥ）。利用生物学技术获得１株对雏鹅不致病而具有良好免疫原性的弱毒株（ＣＮ４０），对种鹅开产前进行免疫，可使下一代获得有效的免疫保护（５～６个月）。利用分离毒制备的超免疫血清对雏鹅具有良好的预防和治疗作用。     

兔瘟巴氏杆菌魏氏梭菌三联灭活苗的研制与应用

用人工感染兔瘟病兔的肝、脾、肾及从患急性巴氏杆菌病和魏氏梭菌性肠炎病兔分离的细菌制成氢氧化铝甲醛灭活苗（兔三联苗）。试验兔于免疫后７、５０、１００和１８０天时均能抵抗致死量兔瘟强毒的攻击；在免疫后２０天时全部能抵抗１０个最小致死量的兔巴氏杆菌培养物的攻击，经７５天保护率也为１００％；免疫后４５天用魏氏梭菌培养物攻击，其保护率为１００％；免疫后１２０天分别用兔巴氏杆菌与魏氏枝苗培养物攻击，其保护率均为７５％。该疾苗有效保存期为４～６℃１０个月，１０～１５℃６个月，１８～２５℃３个月。在流行兔瘟、已氏杆菌病、魏氏梭菌病的兔场试用该疫苗免疫家兔，在免疫后７天至８个月内能有效地预防这几种传染病。     

应用聚合酶链反应鉴别诊断马立克氏病病毒及免疫效果监测

应用３对引物建立了３套聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测体系。用该技术分别检测马立克氏病病毒（ＭＤＶ）１型、３型毒株，并能鉴别１型致癌性强毒株和非致癌性弱毒株；可从强毒感染发病鸡病变脏器和弱毒免疫的ＳＰＦ雏鸡不同时期采集的羽髓中检测到ＭＤＶ１型病毒的ＤＮＡ；可鉴别强毒发病鸡羽髓和弱毒免疫鸡羽髓。以羽髓为检测材料，应用上述ＰＣＲ技术可对ＭＤＶ１型弱毒疫苗免疫鸡群进行免疫效果监测。     

猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞苗保护剂的研究

自1988年我厂对冻干疫苗保护剂和冻干产品生产工艺进行了研究。以猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞苗为主进行了保护剂的筛选试验,找出一种保护剂配制方法、冻干曲线和时间及营养血清的配制等新工艺。用这种方法生产的猪瘟细胞的毒冻干苗在37℃环境中可保存10天,在22～25℃条件下可保存35天,0～4℃条件下可保护22个月,达到了国外同类苗的水平。     

鸡减蛋综合征蜂胶佐剂灭活苗免疫期的试验研究

用三批减蛋综合征（ＥＤＳ）蜂胶佐剂灭活苗（９４０９１２、９４１０２４、９４１１２１）分别免疫成年产蛋母鸡，定期采血，连续检测ＨＩ抗体动态变化，这三批苗６个月的平均ＨＩ抗体滴度分别为７．７、８和７．７（Ｌｏｇ＿２）；用鸭胚做ＥＤＳＶ血清中和试验，其保护率均为１００％（５／５，５／５，５／５）；用ＥＤＳ２０６油苗和ＥＤＳ白油苗同时分别免疫蛋鸡，做平行对比ＨＩ抗体检测，其６个月的平均ＨＩ抗体效价分别为７．７和７（Ｌｏｇ＿２）。说明ＥＤＳ蜂胶苗的免疫期不短于ＥＤＳ油苗的。     

貂病毒性肠炎牛睾丸细胞弱毒疫苗株的安全性和免疫原性研究

用从患貂病毒性肠炎（ＭＶＥ）死亡水貂分离的强毒株，经牛睾丸细胞（ＣＴ）和猫肾传代细胞（ＣＲＦＫ）混合培养，强迫传代、克隆培育的ＭＶＥ弱毒株扩增制苗，给不同品系水貂注射或口服１～５ｍｌ．未发生临床反应。注苗后１２、６０、７０天和６个月攻毒，１００％保护；对照水貂全部发病，５０％死亡。通过对６５１只（次）水貂的安全性、免疫原性、遗传稳定性试验和中和抗体测定及同居感染试验，证明该弱毒株具有良好的安全性、免疫原性和遗传稳定性。     

类山羊传染性胸膜肺炎诊断和防治的研究——免疫试验

本研究在确证了华池“类山羊传染性胸膜肺炎”是由绵羊肺炎支原体(M.Ovipneu-monia)所致的基础上,又以地方分离株试制浓缩灭活苗3批。通过豚鼠、家兔和山羊、绵羊检验均安全,并免疫山羊12只,攻毒结果,免疫组11/12保护(保护率为91.7％)对照组9/9发病;又以8911批苗免疫绵羊4只,攻毒结果,免疫组4/4保护(保护率为100％),对照组3/3发病。田间小区免疫试验;共免疫绵羊、山羊3672只,另设对照羊1451只,经半年免疫试验观察和抽样攻毒效检,免疫羊保护率为93.9％,其发病率和死亡率比对照群分别降低74.9％和72.6％,以上结果证明了试制三批苗对山羊和绵羊均具有良好的免疫效力。免疫持续期试验,以8810批苗在现地免疫羊865只,对照羊651只,经6、12及18个月的攻毒试验,结果免疫群的保护率分别为96.5％,97.5％,92.8％,免疫群比对照群发病率/死亡率分别降低78.3％/83.0％,86.7％/89.0％,7.06/72.2％,结果证明疫苗的有效免疫持续期为18个月以上。同时以本苗与“古典山传苗”作了6、12个月对比免疫试验,结果“古典山传苗”免疫群比8810批苗免疫群的发病率/死亡率分别高83.4％/93.4％和90.0％/91.1％。并证实两种疫苗间缺乏交叉免疫力。将3批苗保存在4～6℃条件下12个月,在室温(25±5℃)中6个月,其免疫效力不减低。     

小鹅瘟鸭胚化弱毒疫苗对雏鹅的免疫研究

本试验用自己分离的广东石楼强毒株,经鸭胚培育成一株对雏鹅无致病性,毒力稳定,免疫性良好的小鹅瘟鸭胚化弱毒株。2日龄雏鹅,疫苗使用剂量为100倍释稀,0.5ml/只(50个免疫剂量)肌肉注射,3日龄的雏鹅,疫苗10倍稀释,0.5ml/只(500个免疫剂量)肌肉注射,则分别于注射后6天和3天,均可抵抗50个LD_(50)的小鹅瘟强毒攻击。免疫期暂测到50天。制成的湿苗(鸭胚胚液)可在-15℃冻结保存6个月,4℃保存1个月,室温(28℃)保存3.5天。疫苗连续通过雏鹅5代,毒力未见返强。疫苗在我省12个市县的疫区共注射197860只雏鹅,注射后均无不良反应。亦未发生小鹅瘟。先后三批从不同地区田间注射了疫苗的雏鹅,注射后9～12天抽样回实验室进行强毒攻击,均获得保护。     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ、病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭｃＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ_（２ａ），后２株属于ＩｇＧ_１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均能稳定分泌特异性ＭｃＡｂ。     

斑点免疫金染色检测雏鹅新型病毒性肠炎抗体研究

应用提纯的雏鹅病毒性肠炎病毒（ＮＧＶＥＶ）抗原制备抗原诊断膜，建立了ＩｇＧ的金颗粒标记、抗原抗体反应同步试验的斑点免疫金染色（ＤｏｔＩＧＳ）检测雏鹅新型病毒性肠炎（ＮＧＶＥ，暂定）抗体的方法，只需３０～４０ｍｉｎ即可判断结果；与本动物抗ＧＰＶ，ＤＰＶ，ＮＤＶ，ＩＢＶ，ＩＬＴＶ，ＭＤＶ，ＩＢＤＶ，ＥＤＳＶ及多杀性巴氏杆菌血清不发生交叉反应；对兔抗ＮＧＶＥＶ的ＩｇＧ的最低检出量为１．０×１０－１０ｇ／ｍＬ。雏鹅感染ＮＧＶＥＶ强毒后第３ｄ、成年鹅接种ＮＧＶＥＶＣＮ４０弱毒疫苗后第３ｄ即可检测到相应抗体。对重庆市和四川省１０个县（市）的６１７份成年鹅血清进行检测，结果ＮＧＶＥ的血清阳性率为３０．４４％～３６．８４％。该法适用于雏鹅感染的早期诊断、成年鹅的血清流行病学调查和疫苗免疫效果评价等。     

中药免疫增强剂提高鸡免疫功能的研究

以鸡传染性腔上囊病（ＩＢＤ）和新城疫（ＮＤ）为模型研究自拟中药免疫增强剂（简称补益方１、补益方２）对ＩＢＤ弱毒苗和油乳剂灭活苗、ＮＤ油乳剂灭活苗的免疫增强效果；用间接ＥＬＩＳＡ法测定鸡血清ＩＢＤＶ抗体效价，以微量血细胞凝集抑制试验测定血清ＮＤ血细胞凝集抑制（ＨＩ）抗体效价。结果表明，补益方１与ＩＢＤ弱毒苗和油乳剂灭活苗配合使用，血清ＩＢＤＶ抗体Ｐ／Ｎ值在测定期内（４～３９ｄ）都高于免疫对照组；补益方１和补益方２对ＮＤ油乳剂灭活苗均有一定的免疫增强效果，其中补益方２的免疫增强效果（平均为１．０２０）明显优于补益方１（平均为０．４１０），从而认为补益方２与ＩＢＤ疫苗、ＮＤ疫苗配合使用具有免疫增强作用，可以提高机体体液免疫水平。     

用绵羊测定副结核病弱毒菌苗免疫效力的研究

80只来自副结核病清净区的羔绵羊,随机地分为试验与对照两组,试验组接种副结核病弱毒菌苗,3个月后试验羊用4株初代分离培养的副结核菌口服攻毒,每周攻毒1次,连续攻毒10次,每次每只羊攻毒活菌6亿。攻毒结束后3、6、9、12个月分期剖杀试验羊,采取小肠、肠系膜淋巴结等病料进行细菌学和病理组织学检查,以判断副结核病弱毒菌苗的免疫效力。攻毒后3～6个月剖杀的试验羊,试验组与对照组的细菌学和病理组织学检查,差异不显著(P>0.05);攻毒后9～12个月剖杀的试验羊,试验组与对照组的细菌学和病理组织学检查,具有明显的差异(P<0.05)。试验结果表明,副结核病弱毒菌苗具有提高机体对副结核病免疫力的作用。     

应用间接酶联免疫吸附试验检测鸡传染性支气管炎抗体的研究

建立了辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记兔抗鸡ＩｇＧ检测鸡传染性支气管炎（ＩＢ）抗体的间接ＥＬＩＳＡ法，其抗原包被浓度为４ｍｇ／Ｌ，待检血清与酶结合物的最佳稀释度各为１８０，酶结合物、抗原抗体的作用时间分别为６０ｍｉｎ，３０ｍｉｎ，封闭液的浓度和作用时间分别为１％和６０ｍｉｎ，ＯＤ值大于０．２８７的判为阳性。用此法检测经ＩＢＶ灭活苗免疫鸡所产蛋孵出的雏鸡的母源抗体，ＯＤ值的Ｐ／Ｎ值为６．０，１５ｄ后降至２．０以下。检测１１日龄经ＩＢＶＨ１２０弱毒苗免疫雏鸡的抗体，其Ｐ／Ｎ值于免疫后第１８ｄ达峰值（３．７）。调查的５４群发病鸡，其抗体阳性率为１００％，Ｐ／Ｎ值为４．０～７．５     

兔瘟巴氏杆菌波氏杆菌三联苗的研制

介绍了兔瘟（ＲＨＤ）、巴氏杆菌（Ｐｍ）、波氏杆菌（Ｂｂ）三联苗的生产工艺和免疫效果。试验兔用该苗１ｍＬ免疫后，在５，７，１２０，１９５ｄ均能抵抗致死量兔瘟强毒的攻击，保护率为１００％；对巴氏杆菌和波氏杆菌，免疫后１０ｄ能产生较强的免疫力，近期保护率分别为８３．３％和８７．９％，免疫后１９５ｄ保护率分别为７２．７％和７６．９％。该苗有效保存期在宁夏银川的室温阴凉处（６～２２℃）为１８０ｄ，在０～８℃冰箱为３６５ｄ。经野外免疫３０００多只家兔表明，该苗安全可靠，在免疫后７～１８０ｄ内能有效控制这３种传染病。