IBRS_2猪肾细胞株污染病毒的检查

IBRS_2猪肾细胞是1964年由巴西生物研究所培育而成。DeCastro(1964)及Chap-man(1972)等报告,该细胞对口蹄疫病毒敏感,可用于制苗。1966年开始,欧洲发生猪水泡病,英国首先发现这株细胞对猪水泡病毒特别敏感,经其他国家证实后,于是被广泛地用于猪水泡病的诊断检疫。     

不同保存条件对BHK-21细胞生长及其增殖口蹄疫病毒(FMDV)的影响

不同保存条件对ＢＨＫ┐２１细胞生长及其增殖口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）的影响方玉珍张永光王永录蒋守田况乾惕（中国农业科学院兰州兽医研究所７３００４６活的敏感细胞是病毒增殖的唯一场所，也是为病毒增殖提供能量和原材料的唯一载体。因此，细胞培养技术作为组织培养的...     

猪水泡病Pirbright动物病毒研究所的一份报告

今年12月11日在斯塔福郡(Staffordshire)Yarlet地方的林山农场(Wood Hill Farm)的猪群中发现的那种疾病与口蹄疫如此相似,以致根据见到的病变曾诊断为口蹄疫。只有当用送检的病理材料和病毒曾在其中生长的组织培养进行再三的补体结合试验都未能查出口蹄疫抗原时,才表明其病原可能不同于口蹄疫病毒。     

信号肽对O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在CHO中表达及分泌的影响

构建融合不同信号肽的O型口蹄疫病毒重组表位蛋白真核表达载体,筛选不同的分泌型信号肽以提高O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)中的表达并使其分泌到CHO培养基中。通过PCR方法将10种不同的分泌型信号肽与串联表位基因的5′端相连,分别构建了真核表达载体并转染哺乳动物细胞CHO,采用Western-blot检测CHO培养基中重组表位蛋白累积量,研究结果表明,O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在CHO中成功分泌表达,不同的分泌型信号肽明显改变O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在CHO培养基中的累积SCGB1D1 isoform信号肽介导的O型口蹄疫病毒重组表位蛋白表达量最高。综上所述,合适的分泌型信号肽促进O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在CHO中的分泌。     

口蹄疫病毒结构蛋白的二级结构及其B细胞抗原表位的预测

以口蹄疫病毒OLZ0 2株基因组序列为材料 ,采用Garnier Robson法、Chou Fasman法和Karplus Schulz法预测了其结构蛋白的二级结构 ,用Kyte Doolittle法分析了各结构蛋白的亲水性 ,Emini法预测了各结构蛋白的表面可能性 ,Jameson Wolf法预测了各蛋白的抗原指数 ,综合评价了口蹄疫病毒结构蛋白的B细胞抗原表位。结果表明 ,VP1蛋白含有的B细胞优势抗原表位最多 ,是研制口蹄疫基因工程疫苗的首选免疫原 ,但其他结构蛋白也含有少量的B细胞抗原表位 ,有的甚至有可能成为优势抗原表位     

动物病毒的消毒

病毒对各种消毒药的抵抗力差异很大,同属病毒之间的差异一般小于不同属病毒相互之间的差异。在兽医上有重要性的主要病毒属的毒株都被选来进行本试验。口蹄疫、猪水泡病和鸡新城疫的病毒未选用,因为它们已列入1974年颁布的(已证实有消毒药)的动物疾病条例汇编(The provisions of the Diseases of Animals(Approved Disinfectants)Order,1974 ]中,口蹄疫病毒和猪水泡病病毒对一系列消毒药具有敏感性最近已有报道(Sellers,     

犊牛甲状腺细胞的培养和应用

犊牛甲腺(CTh)初代细胞是一种对多种病毒敏感的细胞。W.A.Snowdon(1966)指出,对于口蹄疫病毒(FMDV)来说,CTh细胞对其的敏感性比犊牛肾细胞、仔猪肾细胞、幼仓鼠肾传代细胞(BHK_(21))、乳鼠高100～1000倍。所以自1963年以后,几乎所有的牛咽部一食道刮取物的病毒分离试验(FMD查毒试验)都采用CTh细胞。另外据W.Plowright和D.Ferris(1961)报道,作者用CTh细胞成功地分离到了用牛肾细胞、羊肾和睾丸细胞难以获得的牛恶性卡他热病毒。国内,对CTh细胞的培养和研究甚少,王则兴等(1983)曾报道过有关这方面的工作。为满足活畜进口检疫工作的需要,我们参考国外有关资料,成功地培养了CTh细胞,并试用于进口动物的检疫。     

猪水泡病病毒的结构蛋白

文中比较了口蹄疫和猪水泡病病毒的物理化学特性,认为这两种病毒在结构上是不同的。将提纯的猪水泡病(SVD)和口蹄疫(FMD)病毒裂解并在聚丙烯酰胺凝胶中进行分析,发现在SVD病毒体以及空壳体中有分子量分别约为38000和3000道尔顿的两种多肽链存在。与FMD病毒相反,(在SVD病毒中)未发现可见量的空壳体解离的蛋白存在,(在FMD病毒中)这种蛋白能产生可测出量的缩短的多肽,它可能与病毒的RNA相关联。     

口蹄疫病毒VP1蛋白诱导犊牛甲状腺初代细胞凋亡的鉴定

为了制备和培养犊牛甲状腺初代细胞(CTY),并检测口蹄疫病毒VP1蛋白对其诱导的凋亡情况,采用原代细胞培养方法,取初生犊牛甲状腺制备初代细胞并培养。采用RT-PCR方法扩增口蹄疫病毒VP1基因,再用限制性内切酶EcoRⅠ+XhoⅠ酶切后定向克隆到表达载体pCAGGS中,构建重组质粒pCAGGS-VP1,转染CTY,用Western-blot检测口蹄疫病毒VP1蛋白在犊牛甲状腺初代细胞中的表达情况;通过显微镜观察转染的CTY细胞状态、经AV-PI双染色、检测线粒体膜电位变化和Hoechst-33258荧光染色来检测细胞凋亡。结果显示,成功制备了犊牛甲状腺初代细胞,构建的重组质粒可以在犊牛甲状腺初代细胞中表达,通过几种方法均证明口蹄疫病毒VP1蛋白能够诱导犊牛甲状腺初代细胞的凋亡,细胞凋亡率比空载体对照组高约2倍。结果表明,口蹄疫病毒VP1蛋白能够诱导CTY的凋亡,这一结果为深入研究口蹄疫病毒VP1蛋白凋亡功能域和VP1诱导的凋亡途径奠定了基础。     

同一份组培细胞繁殖(复制)两种病毒的研究

用同一份仔猪肾组培细胞先繁殖猪瘟病毒(中国猪瘟兔化弱毒),再繁殖口蹄疫O型病毒,猪瘟组培细胞毒兔检可达5 ×10~4ID/1毫升。O型口蹄疫细胞毒鼠测毒价可高达≥10~(8·5)“MLD_50/0.1毫升。 被猪瘟病毒感染后的细胞不发生细胞病变(cpe),大量繁殖猪瘟病毒后的细胞(即3～5次收毒后的细胞),再感染口蹄疫O型病毒,细胞病变率几乎达100％。从而说明猪瘟病毒与口蹄疫O型病毒是可以先后在同一份细胞内复制的。     

2．9分辨力下口蹄疫病毒的结构及生物学意义

２．９分辨力下口蹄疫病毒的结构及生物学意义最近维尔康（Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）生物技术公司和牛津大学的一些科学家用Ｘ射线科衍射分析方法，在分子水平上分辨了口蹄疫病毒的结构。口蹄疫病毒属细小核糖核酸病毒，该群病毒的其他成员包括普通感冒病毒和天花病毒等。病毒...     

口蹄疫病毒亚单位与宿主细胞凋亡的研究进展

通过对口蹄疫病毒和其他小RNA病毒的蛋白质功能研究进行总结,分析了口蹄疫病毒蛋白参与调控宿主细胞凋亡平衡的作用,并对口蹄疫病毒持续感染形成的机制进行了探讨.     

口蹄疫病毒感染动物组织及其产品传播口蹄疫的风险和控制

对影响口蹄疫病毒存活的因素、传播途径和最小感染量,口蹄疫感染动物不同组织、体液中口蹄疫病毒的带毒量和病毒存活能力,口蹄疫病毒在各类畜产品中的存活能力等相关研究进展进行了综述;对各类畜产品传播口蹄疫的风险进行了分析评估,并提出了风险控制措施和建议.     

口蹄疫病毒温度敏感突变种物理特性和代谢特性的进一步研究

三株口蹄疫病毒温度敏感(ts)突变种,在非允许温度(38.5℃)下,配偶混合感染,根据病毒产量和结合的H~3-尿嘧啶核苷,被分类为RNA~-,并属于同一个互补组。只有突变种ts-22能在38.5℃产斑,它比亲本野毒或其他突变种病毒对酸更敏感。在38.5℃下,葡聚糖不能提高突变种病毒的产斑力。这几株病毒在允许温度(33℃)和非允许温度下,都能抑制宿主细胞蛋白质的合成。     

口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法的建立

为建立快速定量检测羊血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的方法,本研究通过优化抗原表达条件等步骤,在大肠杆菌原核表达系统中获得了可溶性的3A-3B1-3B2融合蛋白,基于纯化的可溶性融合蛋白建立了口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒。该方法能够检测羊血清中的口蹄疫病毒非结构蛋白抗体,敏感性高,特异性强,对其他相关的羊类病原无交叉反应,其组内与组间变异系数分别低于10%和15%,具有良好的重复性。对300份临床血清样品进行检测,同Procheck公司的口蹄疫非结构蛋白抗体试剂盒进行比较,阳性样品符合率为98%,阴性样品符合率为92%,总符合率为95%。重复性试验组内与组间变异系数均小于10%。口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法同传统的ELISA方法相比,特异性相当、敏感性更高,操作简单、快速,具有较高的应用推广价值。     

口蹄疫病毒组织培养的研究——仔猪肾上皮细胞分离培养口蹄疫O型及ZB型病毒

口蹄疫病毒曾是最早能在组织上培养的病毒之一。 近年来很多国外学者Bachrach氏,Sellers氏,Dinter氏,CeprNeeB氏,MuTeB氏等人都先后成功的在犊牛、仔猪、羔羊肾细胞组织培养上培养了口蹄疫病毒,并描述了病毒生长及引起致细胞病变情况。 国外都先后应用犊牛、仔猪肾细胞组织培养制造口蹄疫病毒疫苗,并已广泛应用于生产实践。     

几种动物病毒的基因芯片检测技术

分别用水疱性口炎病毒、蓝舌病病毒、口蹄疫病毒、猪瘟病毒、牛病毒性腹泻病毒、鹿流行性出血热病毒和赤羽病病毒各一段高度保守的基因片段构建质粒 ,在此基础上制备了芯片探针。提取样品中的核酸 ,经反转录和荧光标记后滴加到芯片上进行特异性杂交 ,对杂交结果扫描检测 ,可同时对上述 7种动物传染病进行快速、准确的诊断 ,此方法敏感性高 ,特异性强 ,适合于大批动物高通量检疫。     

A_5型口蹄疫病毒培养试验

获得大量抗元是口蹄疫免疫问题之一。10至15年来,一些国家利用小牛肾及猪肾作单层细胞培养。由于这种方法比较麻烦,使得许多人寻找其它的抗原来源。1960年,帕蒂(Patty)等人首次在悬浮的小牛肾细胞中培养口蹄疫病毒获得成功。意大利也采用这种方法培养病毒,并有所改进。 保加利亚兽医免疫学研究所口蹄疫防治实验室用此种方法在实验室中进行了实验。情况如下。     

反复接种甲醛或乙酰乙撑亚胺(AEI)灭活口蹄疫疫苗的牛对病毒感染相关(VIA)抗原的免疫反应

Cowan和Gravee(1966)曾描述过被口蹄疫病毒感染的组织中出现一种群特异性抗原。这种抗原可能是在感染过程中产生的,不是病毒的结构成份,故称之为VIA抗原。然而,Rowlands等学者(1966)报告说VIA抗原可能是病毒结构成份。     

RGD基序邻近氨基酸突变对口蹄疫病毒O/JC/2010株毒力的影响

为了研究RGD基序邻近氨基酸位点对口蹄疫病毒毒力的影响,利用O/JC/2010株病毒的基因组全长cDNA分子克隆,置换O/HN/93株病毒的VP1基因,拯救获得了1株嵌合病毒(pBlue-HJ);除此之外,在O/JC/2010VP1的3个氨基酸位点进行突变P142T、A152D、Q153P,分为4组,拯救出4株突变病毒:pBlue-HJ(142)、pBlue-HJ(142+152)、pBlue-HJ(152+153)、pBlue-HJ(142+152+153)。比较这5株病毒的LD50和TCID50特性,发现P142T、A152D可以增强口蹄疫病毒对BHK-21细胞和乳鼠的致病力,而Q153P则相反。该试验证明RGD基序附近的非保守氨基酸位点对口蹄疫病毒的毒力存在影响,为进一步阐明口蹄疫病毒的分子致病机制奠定了基础。