细菌分型的分子生物学技术研究进展

回顾了传统细菌分型方法的重要作用,并重点介绍了近年发展得比较成熟的脉冲凝胶电泳(PF-GE)、低频限制性切割位点聚合酶链式反应(IRS-PCR)、随意扩增多态性DNA(RAPD)、扩增片段长度多态性(AFLP)、多位点酶电泳(MLEE)和多位点测序分型(MLST)等6种用于细菌分型的分子生物学技术的原理、特点以及应用情况,指出了其他细菌分型技术,如ARDRA、SSCP、DGGE、TGGEI、S等的不足,对基因芯片技术和实时PCR在细菌分型上的应用潜力进行了展望。     

应用随机扩增多态性DNA技术对产气荚膜梭菌的基因分型

采用随机扩增多态性DNA(randomly amplied polymorphic DNA,RAPD)技术对产气荚膜梭菌进行PCR扩增.结果,产气荚膜梭菌A、B、C、D 4个型均可扩增出约430 bp的条带,B、C型还扩增出约210 bp的条带,B、D型还扩增出约1210 bp的条带,A型还扩增出约240 bp和690 bp的条带,各型之间的条带差别明显.     

鸡鲍氏志贺菌与痢疾志贺菌鸡白痢沙门菌及肠致病性大肠杆菌RAPD鉴别方法的建立

利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对鸡鲍氏志贺菌、鸡白痢沙门菌、肠致病性大肠杆菌和痢疾志贺菌的基因组DNA进行了研究,在此基础上分析了鸡鲍氏志贺菌与其他6个菌株的亲缘关系.结果显示,有4条随机引物的扩增多态性良好,共扩增出了64个DNA片段,其中4种菌共有的谱带有3条,而显示多态性的片段有61条,占95.3%.引物P2的扩增图谱不能将志贺菌和大肠杆菌鉴别开,但可将这2种菌与沙门菌鉴别出来;引物P6的扩增图谱清晰且3种菌间有明显差异,可用于上述3种细菌的鉴别.不同细菌间的遗传距离为0.128～0.790,根据遗传距离可将鸡鲍氏志贺菌等7个菌株分为3个聚类群,鸡鲍氏志贺菌分离株位于人痢疾志贺菌类群中,可能是人志贺菌的一个新的亚种.     

利用RAPD标记分析近交系小鼠的遗传多态性

采用随机扩增多态性DNA(RAPD)标记 ,分析了BALB/c、C5 7BL/6、DBA/2、C3H/He近交系小鼠的遗传多态性。结果表明 ,上述小鼠表现出了各自不同的多态性RAPD标记 ;RAPD可作为近交系小鼠的分子标记 ,在DNA水平区别4种近交系小鼠     

鸭疫里氏杆菌鸭源致病性大肠埃希氏菌和鸭沙门菌的RAPD研究

以 4株不同血清型的鸭疫里氏杆菌、5株不同血清型的鸭源致病性大肠埃希氏菌和 5株同一血清型的鸭沙门菌为研究对象 ,分别提取基因组DNA ,利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对其基因组DNA进行了分析。结果 ,从 2 0条随机引物中筛选出了 38条能在这 3种菌中有较好多态性的随机引物 ,8个有效引物共扩增出了 10 2个DNA片段 ,其中 14个菌株共有的谱带仅有 1条 ,显示多态性的片段有 10 1个 ,占 99.0 % ;对RA的 4个菌株扩增出的谱带数为 5 1条 ,共同片段有 12条 ,多态性片段 39条 ,占 76 .5 % ;对沙门菌的 5个菌株扩增出的条带数为 4 6条 ,共同片段为13条 ,多态性片段 33条 ,占 71.7% ;对大肠埃希氏菌的 5个菌株扩增出的条带数为 4 8条 ,共同片段 4条 ,多态性片段 4 4条 ,占 91.7%。在 8条引物中进一步筛选出 1条引物G12 ,其图谱中 5 35bp的条带为鸭疫里氏杆菌所特有 ,330bp的条带为沙门菌所特有 ,12 2 7bp的条带为大肠埃希氏菌所特有 ,表明G12可作为分子标记用来鉴别这 3种细菌。     

鸭沙门菌的随机扩增多态性DNA分析

以5株同一血清型的鸭沙门菌为研究对象,分别提取基因组DNA后,用20条随机引物对其进行RAPD分析。结果,20条随机引物中不能扩出任何条带的引物有2条,能扩出条带但扩增图谱中没有特异性条带出现的引物有10条,能扩出条带且扩增图谱具有多态性的引物有8条。对筛选到的具有多态性的8条引物进行分析,共扩增出46个DNA片段,片段大小为0.2～3.2kb,其中5个菌株共有的片段有13条,显示多态性的片段有33条。     

PCR技术及其在生物医学中的应用

聚合酶链式反应(Polymeras chain reaction,PCR)是1985年创立的一种用于基因放大的分子生物技术。目前它已经成为分子生物学医学研究的重要手段之一。本文就PCR技术的应用和前景概述如下。(一)原理与历史 PCR技术又称体外DNA放大技术,是用DNA聚合酶在体外系统中引发一对引物间的DNA双链合成过程。原理如下页图所示,AB为欲放大的某基因组的一段DNA片段。首先合成与AB片段两端互补的寡核苷酸引物(约20个核     

旋毛虫LAMP检测方法的建立与应用

为建立一种快速、准确的动物肉品中旋毛虫检测方法,根据旋毛虫ITS-Ⅱ基因序列,设计环介导等温扩增技术(loop-m ediated isothermal amplification,LAMP)引物,进行LAMP扩增。将旋毛虫DNA进行梯度稀释,以其为模板分别进行LAMP和常规PCR扩增,分析LAMP检测技术的敏感性。分别以旋毛虫、弓形虫、捻转血矛线虫、柔嫩艾美耳球虫、猪囊尾蚴、大肠杆菌等病原的基因组DNA为模板,进行LAMP检测,分析该检测方法的特异性。用该LAMP检测方法,分别对模拟样品和市售猪舌、鸭舌、鸡舌、羊舌和牛舌等110份样品进行旋毛虫感染情况检测。LAMP扩增产物的电泳结果和可视化SYBR G reen I荧光染料颜色的变化均表明该LAMP检测方法建立成功。当模板DNA稀释到10~(12)时亦可以检测,其敏感性是常规PCR的1 000倍。特异性研究发现,只有以旋毛虫基因组DNA为模板所进行的LAMP检测才出现阶梯形的电泳条带并且其SYBR Green I荧光染料呈现绿色荧光。在2 g肌肉中添加1条旋毛虫肌幼虫时亦能被该LAMP方法检测出来。但110份舌肌样品中均未检测到旋毛虫,LAMP检测结果与常规PCR结果一致。结果表明,本研究建立了基于旋毛虫ITS-Ⅱ基因的LAMP检测技术,该技术具有较好的敏感性和特异性,在样品检测中具有简便快捷的优点。     

猪链球菌分型方法的比较

采用传统的血清学分型方法和随机扩增多态性DNA分析 (RAPD)方法对长春地区分离的猪链球菌进行分型。结果表明 ,RAPD法比传统血清学分型方法更能反映菌株间的亲缘关系 ,并从分子水平上揭示了不同菌株的遗传距离 ;RAPD法具有快速、简便、分型性高等优点     

应用RAPD技术分析禽多杀性巴氏杆菌广西分离株的DNA多态性

应用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术 ,以随机引物单条或成对组合的方式对 9株禽巴氏杆菌 (PM )广西分离株和 3个参考株的DNA进行了多态性分析。结果显示 ,在选用的 2 0个引物中 ,有 4对引物 (4条引物成对组合 )扩增的条带为 1～ 16条 ,其长度在 90～ 2 6 0 0bp。相似指数分析显示 ,PM广西分离株GX2与GX4的相似指数最高 ,为 0 .97;GX7与B2 6T12 0 0的相似指数最低 ,为 0 .2 1,C4 8 1标准强毒株与PM广西分离株间的相似指数为 0 .33～ 0 .6 4。表明广西当地的流行株呈现多样性 ,与PM标准强毒株存在差异。     

Trying to Sell Apartheid to 1950s Australia

This article deals with an aspect of white South Africa’s efforts to promote itself as its international situation started deteriorating in the 1950s. The instrument on this occasion was an articulate 76-year-old English-born immigrant who had done well in South African politics, was grateful for the opportunities the country had given him, and ostensibly wanted to give something back. The article also provides a practical example of longtime Australian Prime Minister Robert Menzies’s affection for white South Africans and their country despite the bad odor in which the latter’s government was held by much of the Australian media and public even though Australia was itself a racist society at the time.     

欧盟对中亚援助概况

经过2004年与2007年两度东扩,欧盟与中亚五国在地理上越来越近。2007年6月22日,欧盟通过了第一份系统全面的中亚战略文件——《欧盟与中亚:新伙伴关系战略》,显著提升了对中亚的战略关注。新战略出台以来,欧盟与中亚关系取得了长足进展,标志着欧盟已成为中亚地区新的"战略玩家"。对中亚实施援助是欧盟与中亚关系的主线,本文拟将欧盟对中亚援助的总体情况及具体援助计划和工具等作一简介。     

日本民主党对华政策走向探析

日本民主党主政后为实现长期执政的目标,在强化对华关系的同时,也会赋予对华外交更多战略性的色彩.然民主党既和自民党同为保守政党,也坚持把对华关系定位为以日美同盟为基轴的对外关系整体的一个局部,加上日本国内外诸要素和自身条件的制约,其对华政策的转换不仅空间有限,且也存在着不确定性.     

Trying to Sell Apartheid to 1950s Australia

This article deals with an aspect of white South Africa's efforts to promote itself as its international situation started deteriorating in the 1950s. The instrument on this occasion was an articulate 76-year-old English-born immigrant who had done well in South African politics, was grateful for the opportunities the country had given him, and ostensibly wanted to give something back. The article also provides a practical example of longtime Australian Prime Minister Robert Menzies's affection for white South Africans and their country despite the bad odor in which the latter's government was held by much of the Australian media and public even though Australia was itself a racist society at the time.     

踏访拜林会农谢

难忘的拜林战场最近 ,柬埔寨政府与联合国工作小组就审判红色高棉的经费和场地等具体问题达成协议。如果顺利 ,审判将在2005年年中前后开始。在审判红色高棉的风声越来越紧的情况下 ,前红色高棉领导人的情况如何 ,他们将如何应对可能的审判 ?为了回答这些问题 ,笔者专程前往拜林 ,并在那里见到了前柬埔寨共产党(柬共)中央副书记农谢 ,听他讲述投诚后的生活和对审判红色高棉的看法。拜林市是个只有3.6万人口的群山环抱的小城镇 ,地处柬埔寨西北部 ,离泰国边界只有20公里 ,曾经是红色高棉的重要基地。1996年柬共3号人物英萨利率部脱离红色高棉…     

从福田辞职到麻生上台

福田的突然辞职再次引起日本政坛的动荡。麻生太郎接任首相，其内阁班子组成除政治世袭和寻求派系平衡外，更体现与麻生个人关系的亲疏，日本政局如何发展还要拭目以待。近些年日本政坛之所不断动荡，除国内经济、社会问题难以解决导致首相支持率下降外，政治制度的缺失导致政治运营的变幻不定也是极其重要的原因。结构性社会难题将使日本政坛继续处于多事之秋。     

伊拉克油气田首度对外开放的背景

今年6月30日,伊拉克公开对外拍卖8个大型油气田的开采权,在为数众多的国际石油巨头中,英国石油公司(BP)和中国石油天然气集团公司(CNPC,简称中石油)的企业联合体赢得一项位于伊南部鲁迈拉(Rumaila)油田的竞标.这是伊拉克自1972年实施石油资源国有化政策30余年来首次对外开放能源开发,引起国际社会广泛关注.鉴于伊拉克尚未出台相关石油法律,近来美军从伊城镇撤出后,伊恐怖暴力活动增多,政局面临诸多不稳定因素,未来油气开发等经济重建形势不容乐观.