用二步消化法提取指甲DNA

<正>在日常检案工作中，对腐败尸体的指甲进行DNA检验，扩增效果有时不稳定，特别是埋于泥土、弃于粪坑、污水等环境中的指甲检材，常需多次反复处理才能得到满意DNA检测结果。究其原因，可能与没有得到有效的DNA模板有关。作者采用“二步消化法”，可以去除表层降解DNA，减少PCR抑制物，从而可有效地提高了DNA模板质量，提高了指甲DNA的检验成功率。     

指甲DNA的STR分型研究

目的 研究尸体所处环境、指甲DNA提取部位及提取方法对STR分型的影响。方法 对案件中不同条件腐败尸体指甲,使用不同部位、不同体系和时间消化,酚-氯仿法提取指甲核DNA,进行PCR扩增及STR分型。结果 提取指甲甲体、甲根部位均可获得STR分型。结论 指甲是法医检案中一类具有实用价值的检材。     

1例土埋2年半尸体的指甲DNA检验

在日常检案中，DNA检验人员通常根据尸体的腐败程度来决定提取那种检材以及采取何种方法得到足够的遗传信息。据高俊薇等报道。当检验腐败尸体的心血、肌肉等组织无法得到STR分型结果时，拔取其指甲进行STR分型往往能得到满意的效果。指甲检验成功率与保存环境有关．土埋1个月以上尸体的指甲DNA经有机法提取成功率不高。本例在处理一起土埋2年半、完全白骨化的尸体时，以指甲作为检验对象，分别以有机法、硅珠法和磁珠法对经Chelex-100提取后的模板DNA进行纯化浓缩。并对其效果进行比较。     

1例土埋2年半尸体的指甲DNA检验

在日常检案中,DNA检验人员通常根据尸体的腐败程度来决定提取那种检材以及采取何种方法得到足够的遗传信息。据高俊薇等[1]报道,当检验腐败尸体的心血、肌肉等组织无法得到STR分型结果时,拔取其指甲进行STR分型往往能得到满意的效果。指甲检验成功率与保存环境有关,土埋1个月以上尸体的指甲DNA经有机法提取成功率不高。本例在处理一起土埋2年半、完全白骨化的尸体时,以指甲作为检验对象,分别以有机法、硅珠法和磁珠法对经Chelex-100提取后的模板DNA进行纯化浓缩,并对其效果进行比较。一、样本来源2005年7月中旬,在距本市某内陆河入海…     

DNA IQ^TM SYSTEM在疑难指甲DNA检验中的应用

目的探索DNA IQTMSYSTEM在疑难指甲DNA提取中的应用。方法 15份疑难指甲采用Chelex方法检验没有成功获得STR分型图谱,采用DNA IQTMSYSTEM提取法并纯化,采用Identifiler PLUS试剂盒进行复合扩增,产物经ABI3130XL型DNA基因分析仪检测。结果成功获得15例疑难指甲的STR基因座DNA分型。结论 DNA IQTMSYSTEM方法能快速、有效提取疑难指甲DNA进行STR分型。     

PCR-STR分型技术在尿样DNA分型中的应用

目的　对尿样的DNA分型进行研究。　方法　 10份尿样随机收集于无关个体 ,同时采集血液样本做DNA分型对照 ,用PCR -STR分型技术对尿样DNA进行FIBRA和D18S5 35基因座分型。　结果　 10份尿样 10ml、1ml及 0 .2ml体积均获得准确的分型结果 ,且与同一个体的血样DNA分型结果完全相同 ;室温储存 4天及 4℃保存 4周的尿样均分型成功。　结论PCR -STR分型技术对尿样DNA分型是一种有效的方法 ,在尿样的个人识别中具有极高的实用价值。     

洗涤法结合硅珠法提取指甲垢DNA

目的考察洗涤法结合硅珠法提取指甲垢DNA的应用价值。方法收集200枚刑事案件中受害人指甲,采用洗涤法结合硅珠法提取指甲垢DNA;用Identifiler试剂盒进行PCR扩增,3030xl遗传分析仪进行分型检测。结果应用洗涤法结合硅珠法在200枚指甲中有64枚(32%)检出异体DNA,其中52枚为混合型,12枚为单一异体DNA;另有104枚检出受害人单一DNA。结论洗涤法结合硅珠法可应用于指甲垢DNA的提取。     

PCR-STR分型技术在尿样DNA分型中的应用

目的：对尿样的DNA分型进行研究。方法：10份尿样随机收集于无关个体,同时采集血液样本做DNA分型对照,用PCR－STD分型技术对尿样DNA进行FIBRA和D18S535基因座分型。结果：10份尿样10ml、1ml及0．2ml体积均获得准确的分型结果,且与同一个体的血样DNA分型结果完全相同;室温储存4天及4℃及4周的尿样均分型成功。结论：PCR－STR分型技术对尿样DNA分型是一种有效的方法,在尿样的个人识别中具有极高的实用价值。     

指甲垢中异体DNA的检验

在人体伤害案件中,受害人与案犯有近距离的接触或搏斗时,有可能抓刮到案犯皮肤,并在指甲垢里留下肉眼看不到的皮屑组织等微量生物检材,本文对11例指甲垢中异体DNA检验做了分析,以期为同类案件的鉴定提供借鉴。1材料与方法1.1样本来自本实验室日常案件中24名死者(女性20人,男性4人)的240枚指甲,直接剪取指甲板突出皮肤的边缘部分。其中机械性窒息死亡17人,失血性休克死亡4人,颅脑损伤死亡3人;死亡时间最短1h,最长7d。1.2方法试剂5%Chelex-100,蛋白酶K,AmpFISTR(Profiler Plus试剂盒(AB I公司),AmpFLSTR ProfilerIdentifilerTM试剂…     

用磁珠法快速提取指甲DNA

<正>在日常检案过程中,一般采用Chelex-100法或苯酚/氯仿法提取指甲DNA。Chelex-100法提取的DNA模板有时存在着较多扩增抑制物,需进一步纯化。苯酚/氯仿法虽可以得到质量较好的DNA模板,但在提取过程中需要多步离心,有可能使DNA样品     

法医学难检样品的处理及检测方法研究

在法医物证检验中常常会遇到一些量微而保存条件差的检材,这类检材的成功分析对案件的调查和侦破常起着至关重要的作用,其关键在于能否正确提取和处理检材、并采用适当的分析方法进行检测.笔者结合多年的物证检验经验和研究,综述了常见的牙齿、烟头、毛发、微量血痕等检材的有效处理方法.     

受污染烟蒂的DNA检验

采用chelex-100提取DNA并加以纯化,对受泥土等物严重污染的烟蒂中唾液上皮细胞DNA进行PCR扩增分型,成功地应用于案件检验,该方法方便,实用.     

用chelex-100提取骨骼DNA的研究

建立了应用chelex-100加蛋白酶K提取骨骼DNA的方法,并对1～30年31例骨骼进行了实验.该方法操作简单、快速、重复性好,灵敏度以及阳性率高,适用于法医学鉴定.     

用PCR—测序法对人类线粒体DNA多态区的研究

用PCR方法，对线粒体DNA多态区15997至三6401区域进行扩增，产物DNA经纯化处理局直接进行自动化序列测定，得到了准确的序列结果。将得到的中国人mtDNA多态区序列与国外已报道的相应序列进行对比，证实我们所测序列与白种人相应序列之间存在碱基差异。     

DNA提取方法和PCR循环次数对STR扩增成功率的影响

目的探讨常见载体上的微量血痕DNA的提取方法、PCR循环次数对STR扩增成功率的影响。方法分别应用Chelex-100法及Chelex-100结合纯化法对8种载体上不同大小的血痕样本进行DNA提取,并采用28次、30次及34次PCR循环进行STR扩增,分别观察其扩增成功率。结果经28次、30次及34次PCR循环,Chelex-100法提取DNA后的STR扩增成功率分别为0.2917,0.3333,0.4583,Chelex-100结合纯化法的STR扩增成功率分别为0.3750,0.4583,0.8750。结论用Chelex-100结合纯化法提取DNA,用34次循环扩增可提高STR基因座的检测成功率。     

线粒体DNA分型技术

综述了线粒体DNA的遗传特性,线粒体DNA分型技术发展历程以及线粒体DNA分型技术相关质量控制、命名原则、异质型影响、结论诠释、数据统计,并展望了线粒体DNA分型技术的未来发展.     

荧光染料掺入PCR检测STR基因座多态性的研究

目的研究荧光染料掺入PCR检测STR基因座多态性。方法 利用荧光染料掺人PCR扩增技术,测定FABP、CYP19、FOLP23、MBP、DYS19五个基因座的梯阶片段长度,将带有荧光标记物的dCTP通过PCR反应加入到目的片段PCR产物中,通过PE 377 DNA测序仪分离和基因扫描软件分析。结果 获得了清晰、准确的图谱,计算出各基因座中核心序列的重复次数,并按照ISFH标准对各基因座命名。结论 该方法具有灵敏度高、结果客观准确、操作简便、产物定量等优点,在新基因座开发和法医鉴定实践中具有较理想的应用价值和发展前景。     

A stochastic model of the processes in PCR based amplification of STR DNA in forensic applications

In forensic DNA profiling use is made of the well-known technique of PCR. When the amount of DNA is high, generally unambiguous profiles can be obtained, but for low copy number DNA stochastic effects can play a major role. In order to shed light on these stochastic effects, we present a simple model for the amplification process. According to the model, three possible things can happen to an individual single DNA strand in each complete cycle: successful amplification, no amplification, or amplification with the introduction of stutter. The model is developed in mathematical terms using a recursive approach: given the numbers of chains at a given cycle, the numbers in the next can be described using a multinomial probability distribution. A full set of recursive relations is derived for the expectations and (co)variances of the number of amplicon chains with no, 1 or 2 stutters. The exact mathematical solutions of this set are given, revealing the development of the expectations and (co)variances as function of the cycle number. The equations reveal that the expected number of amplicon chains without stutter grows exponentially with the cycle number, but for the chains with stutter the relation is more complex. The relative standard deviation on the numbers of chains (coefficient of variation) is inversely proportional to the square root of the expected number of DNA strands entering the amplification. As such, for high copy number DNA the stochastic effects can be ignored, but they play an important role at low concentrations. For the allelic peak, the coefficient of variation rapidly stabilizes after a few cycles, but for the chains with stutter the decrease is more slowly. Further, the ratio of the expected intensity of the stutter peak over that of the allelic peak increases linearly with the number of cycles. Stochastic models, like the one developed in the current paper, can be important in further developing interpretation rules in a Bayesian context.     

鼠抗人转铁蛋白单链抗体基因序列测定及分析

从携带人转铁蛋白单链抗体基因载体转化的大肠杆菌菌株中提取质粒,经电泳分析及筛选、纯化出线状质粒DNA,定量后以载体上人转铁蛋白单链抗体基因插入子两边的已知DNA序列经合成后作为引物进行测序扩增凝胶电泳,将得到的人转铁蛋白单链杭体基因序列重轻链可变区部分同基因库中鼠抗体重轻链进行同源比对,证明人转铁蛋白单链抗体基因确由鼠抗体重轻链可变区基因构成,在此基础上,进一步对基因核苷酸序列的可变区结构特征作推断分析,并推导出其对应的氨基酸序列.     

A multiplexed system for quantification of human DNA and human male DNA and detection of PCR inhibitors in biological samples

Forensic analysts routinely encounter samples containing DNA mixtures from male and female contributors. To obtain interpretable Short Tandem Repeat (STR) profiles and select the appropriate STR analysis methodology, it is desirable to determine relative quantities of male and female DNA, and detect PCR inhibitors. We describe a multiplex assay for simultaneous quantification of human and human male DNA using the ribonuclease P RNA component H1 (RPPH1) human target and the sex determining region Y (SRY) male-specific target. A synthetic oligonucleotide sequence was co-amplified as an internal PCR control. Standard curves were generated using human male genomic DNA. The SRY and RPPH1 assays demonstrated human specificity with minimal cross-reactivity to DNA from other species. Reproducible DNA concentrations were obtained within a range of 0.023-50 ng/μl. The assay was highly sensitive, detecting as little as 25 pg/μl of human male DNA in the presence of a thousand-fold excess of human female DNA. The ability of the assay to predict PCR inhibition was demonstrated by shifted IPC Ct values in the presence of increasing quantities of hematin and humic acid. We also demonstrate the correlation between the multiplex assay quantification results and the strength of STR profiles generated using the AmpF?STR^®PCR Amplification kits.