大鼠软组织挤压伤后NO对肝组织TNF-α和IL-1β基因表达的影响

目的 探讨一氧化氮（nitric oxide,NO）在大鼠软组织挤压伤后肝组织TNF-α和IL-1β基因表达中的作用. 方法 将大鼠随机分成对照组、挤压组、挤压后氨基胍（aminoguanidine,AG）处理组、挤压后L-精氨酸（L-arginine,L-Arg）处理组,经实验处理后检测血清中ALT、AST活性和NO浓度,并利用RT-PCR技术观察肝组织中TNF-α、IL-1β基因表达情况. 结果 与对照组比较,挤压组肝组织中TNF-α、IL-1β mRNA表达明显上调（P＜0.05）,应用L-Arg后TNF-α、IL-1β mRNA表达进一步上调（P＜0.05）,而应用AG后上述指标明显下降（P＜0.05）;与对照组比较,挤压组血清ALT、AST活性以及NO浓度明显增加（P＜0.05）,应用L-Arg后血清ALT、AST活性以及NO浓度进一步明显增高（P＜0.05）,应用AG后上述指标则明显降低（P＜0.05）. 结论 大鼠软组织挤压伤诱导NO生成增多,内源性NO介导肝组织TNF-α和IL-1β基因表达上调.     

挤压家兔后肢导致急性肝损伤和抗氧化能力降低

目的本实验观察挤压家兔后肢导致肝氧化损伤,探讨氧化应激在挤压家兔后肢导致肝损伤中的作用。方法用标准重物间断压迫家兔后肢复制模型。采用生化方法检测ALT和AST活性;分析天平称重方法检测肝脏湿干重比值(W/D);比色法测定肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和总抗氧化能力(T-AOC)以及丙二醛(MDA)含量变化;并观察肝组织病理学改变。结果血清ALT和AST活性明显增高(P<0.01),肝细胞明显肿胀,肝窦轻度淤血,而肝脏湿干重比值(W/D)轻度增加(P<0.05);肝脏氧化损伤明显加重,MDA含量增高,而肝脏抗氧化能力下降,SOD、CAT、GSH-Px活性和T-AOC分别比对照组降低了17%、29%、24%和21%(P均<0.01)。结论挤压家兔后肢引起急性肝损伤及肝脏的抗氧化能力下降;肝脏局部抗氧化能力下降可能是肝损伤的重要因素。     

皮肤损伤愈合中NOS的表达及NO的作用

皮肤损伤愈合是机体保持组织完整性的一个有组织的过程,需要炎症细胞、生物化学介质之间的复杂作用。一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase,NOS)是皮肤组织损伤愈合过程中的一个重要因子,合成一氧化氮(nitricoxide),生成的一氧化氮参与损伤愈合的全过程,在炎症介导,细胞的增殖、分化和凋亡及血管形成、基质沉积和损伤后组织重构中均发挥重要作用,而且在某些皮肤疾病中,NO也具有重要作用。本文针对近年来NOS在损伤愈合过程中的研究进展,综述了在皮肤损伤愈合过程中NOS的表达和NO的作用,认为NOS是皮肤损伤愈合机制的一个重要方面,具有深入研究的必要。     

硫化氢对创伤应激引起大鼠急性肝损伤的作用

目的探讨硫化氢(H_2S)在挤压大鼠后肢致急性肝损伤过程中的作用。方法将大鼠随机分为对照组、挤压组、H_2S供体硫氢化钠(Na HS)+挤压组、H_2S生成抑制剂炔丙基甘氨酸(propargylglycine,PAG)+挤压组。用标准重物挤压大鼠后肢建立急性肝损伤模型,分别于挤压结束后30、120 min处死大鼠。比色法检测血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性,化学法检测大鼠血浆H_2S、肝组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)、蛋白质羰基、谷胱甘肽(glutathion,GSH)含量和H_2S生成酶胱硫醚γ-裂解酶(cystathionineγ-lyase,CSE)活性,RT-PCR半定量检测肝组织CSE m RNA的表达。结果挤压大鼠后肢可引起血清AST、ALT活性增高,肝组织MDA、蛋白质羰基含量增加及GSH含量降低,血浆H_2S含量减少,肝组织CSE活性降低、CSE m RNA表达下降。预先给予Na HS可显著减轻、而PAG明显加剧挤压后肢所致上述肝损伤改变。结论 H_2S生成减少参与介导创伤应激引起的大鼠急性肝损伤。     

大鼠双后肢挤压伤后肺、肝细胞的凋亡

目的研究大鼠双后肢挤压伤后肺、肝细胞的凋亡过程,探讨挤压伤损伤机制。方法建立大鼠双后肢挤压伤模型,采用TUNEL法对大鼠肺、肝细胞凋亡进行检测,免疫组织化学法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3的表达。结果与对照组相比,损伤组大鼠双后肢局部肌肉组织明显损伤,肺、肝细胞凋亡明显增多(P0.05),凋亡相关蛋白Bax上调、Bcl-2下调、caspase-3被激活(P0.05)。结论大鼠双后肢挤压伤后引起肺、肝细胞凋亡明显增多,可能是损伤释放的相关因子介导了细胞凋亡的发生。     

HMGB1在创伤引起大鼠肺组织内质网应激中的作用

目的探讨高迁移率族B1(high mobility group B1,HMGB1)蛋白在创伤引起大鼠肺组织内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)变化中的作用。方法用标准重物挤压大鼠双后肢建立创伤应激致大鼠急性肺损伤模型。第一部分实验将大鼠随机分为体位对照组和挤压后6 h、18 h和30 h组,第二部分实验分为体位对照组、挤压后18 h组、HMGB1抑制剂正丁酸钠组和挤压后18 h+抑制剂组。用蛋白质印迹法检测肺组织HMGB1以及ERS相关蛋白(GRP78、caspase-12、CHOP和IRE1α)的表达变化。同时,常规HE染色观察肺组织病理学改变。结果与体位对照组比较,挤压大鼠后肢可引起肺组织中ERS相关蛋白(GRP78、caspase-12、CHOP和IRE1α)以及HMGB1蛋白表达明显增高,挤压后30 h时上述蛋白表达降低但仍高于体位对照组,同时大鼠出现明显肺损伤病理变化。与挤压后18 h组比较,挤压后18 h+抑制剂组大鼠肺组织中上述ERS相关蛋白及HMGB1蛋白表达降低,大鼠肺损伤病理变化减轻。结论创伤应激能启动HMGB1-ERS通路导致大鼠急性肺损伤。     

软组织挤压伤对大鼠胸主动脉反应性张力的影响

目的 观察大鼠软组织挤压伤后胸主动脉反应性张力的变化,探讨一氧化氮(nitric oxide,NO)在血管反应性张力变化中的作用.方法 成年SD大鼠30只,随机分为对照组、挤压后8 h组、挤压后16 h组.制备内皮完整和去内皮离体胸主动脉血管环,首先用离体血管张力检测技术测定内皮完整血管环对苯肾上腺素(phenylep...     

挤压伤大鼠早期心脏损伤的细胞机制

目的观察挤压伤大鼠血清对培养的新生大鼠心肌细胞的某些作用,拟阐明挤压伤早期心肌细胞损伤的细胞机制。方法培养1～3d龄SD大鼠心肌细胞,观察挤压伤大鼠血清对心肌细胞搏动频率、表面积、蛋白质含量、3H-亮氨酸掺入、胞内钙浓度和Fos蛋白表达的影响。结果与正常大鼠血清组比较,挤压伤大鼠血清培养的心肌细胞搏动频率(次/min)由88.3±20.6降为26.4±16.7,心肌细胞表面积、蛋白质含量、3H-Leu掺入、胞内游离钙浓度(nmol/L)和Fos蛋白表达阳性指数增加。结论挤压伤大鼠血清通过抑制细胞搏动,增加胞内钙浓度诱导Fos蛋白的表达,引起心肌细胞肥大,介导挤压伤早期的心脏损伤。     

大鼠急性脑干损伤致死后脑干组织细胞色素C含量的测定

目的探讨细胞色素C含量测定在脑干损伤死后诊断中的意义。方法采用重物自由落体造成的大鼠急性脑干损伤模型,通过酶联免疫(ELISA)的方法,检测脑干损伤致死大鼠与非脑干损伤致死大鼠脑干组织细胞胞浆细胞色素C含量。结果急性脑干损伤组神经元细胞胞浆细胞色素C的含量(8.276±0.425)较非脑干损伤组(2.002±0.514)为高,其差异具有显著性意义(P<0.05)。结论脑干组织细胞色素C含量测定对急性脑干损伤的死后诊断具有参考价值。     

兔悬挂双前肢致死组织中PKC、AchE、HSP70的活性变化

目的观察兔悬挂双前肢致死不同组织中PKC、AchE、HSP70的活性变化,探讨其在死亡机制中的作用。方法家兔双前肢悬挂致死亡,取膈肌、肋间肌、心肌、腓肠肌、大脑、脑干、肝、肾、肺等组织,以勒颈、颅脑损伤和疾病死亡相应组织为对照。采用SP法对上述组织中蛋白激酶C(PKC)、乙酰胆碱酯酶(AchE)和热休克蛋白70(HSP70)进行免疫组化染色,观察其活性,并采用多组独立样本的Kruskal-Wallis秩和检验方法,对结果进行统计学分析。结果膈肌、肋间肌和大脑组织细胞质中PKC免疫组化阳性染色,悬挂组较其它组增强(P0.05);膈肌、肋间肌、心肌、大脑和肝细胞质及肌组织神经束中AchE免疫组化阳性染色,悬挂组较其它组增强(P0.05);大脑、心、肺中HSP70免疫组化阳性染色,悬挂组较其它组增强(P0.05)。结论PKC、AChE、HSP70通过不同机制,在悬挂双上肢体位性窒息死亡中起到一定作用,本文结果可为相关研究及鉴定提供实验依据。     

Negative Modulation of NO for Diaphragmatic Contractile Reduction Induced by Sepsis and Restraint Position

In practice of forensic medicine, potential disease can be associated with fatal asphyxia in restraint position. Research has demonstrated that nitric oxide （NO） and nitric oxide synthase （NOS） are plentifully distributed in skeletal muscle, contributing to the regulation of contractile and relaxation. In the current study, respiratory functions, indices of diaphragmatic biomechanical functions ex vivo, as well as NO levels in serum, the expressions of diaphragmatic inducible NOS （iNOS） mRNA, and the effects of LNNA on contractility of the diaphragm were observed in sepsis induced by cecal ligation and puncture （CLP） under the condition of restraint position. The results showed that in the CLP1218 h rats, respiratory dysfunctions; indices of diaphragmatic biomechanical functions （Pt, ＋dT/dtmax, dT/dtmax, CT, Po, force over the full range of the forcefrequency relationship and fatigue resistance ） declined progressively; the NO level in serum, and iNOS mRNA expression in the diaphragm increased progressively; force increased significantly at all stimulation frequencies after LNNA preincubation. Restraint position 1 h in CLP12 h rats resulted in severe respiratory dysfunctions after relative stable respiratory functions, almost all the indices of diaphragmatic biomechanical functions declined further, whereas little change took place in NO level in serum and diaphragmatic iNOS mRNA expression; and the effects of LNNA were lack of statistical significance compared with those of CLP12 h, but differed from CLP18 h group. These results suggest that restraint position and sepsis act together in a synergistic manner to aggravate the great reduction of diaphragmatic contractility via, at least in part, the negative modulation of NO, which may contribute to the pathogenesis of positional asphyxia.     

小鼠皮肤切创愈合过程中iNOS和eNOS表达的免疫组织化学研究

目的观察小鼠皮肤切创愈合过程中,iNOS和eNOS在损伤区及损伤周边区内的表达及其变化规律。方法小鼠背部制作全层切创,应用免疫组织化学技术观察伤后切创组织中iNOS和eNOS的表达,并和无切创的小鼠作为对照。结果损伤区及损伤周边区细胞,伤后3h的损伤皮肤组织中可见少量的多型核细胞表达iNOS和eNOS,伤后6～24h,大部分浸润的中性粒细胞和单核细胞为iNOS和eNOS阳性。随着时间的延长,iNOS和eNOS阳性细胞以单核细胞和成纤维细胞为主。伤后3hiNOS的阳性细胞比率较低,6h～1d持续性增加并于1d达到最高峰,3～7d维持在一个相对稳定的水平直至伤后10d再次达高峰,10～14d开始下降。eNOS的阳性细胞率在伤后1～3h表达较低,6h～3d持续性增高,并在3d达到最高峰,在其后的5d内保持稳定表达,之后开始下降。而且损伤区及损伤周边区、特别是肉芽组织内的新生血管可见iNOS和eNOS不同强度的表达。结论小鼠皮肤切创愈合过程中,iNOS和eNOS在损伤周边区内多型核细胞、单核细胞和成纤维细胞中表达,其时序性变化可望用于皮肤损伤时间的推断。     

低氧和氧化应激中 NO介导培养神经元损伤机理的实验研究

目的探讨低氧、氧化应激中一氧化氮（NO）和氧自由基之间关系及其对培养神经元的损伤机理。方法对培养的新生大鼠神经细胞分别进行低氧、H2O2氧化应激处理和超氧化物歧化酶（SOD）抗氧化应激处理,用比色法等检测培养上清液中NO、丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）和SOD含量变化指标。结果与对照组比较,低氧组和H2O2组的NO、LDH、MDA含量均显著增高,SOD含量显著降低,NO与SOD含量变化呈负相关关系。预先给予终浓度为200U/ml的SOD处理,可使神经细胞的NO、LDH和MDA释放量明显减少。各组间NO含量与LDH、MDA含量呈正相关关系。结论低氧、氧化应激促使神经元NO产生增多,NO有增加氧自由基对神经细胞的损伤作用。SOD具有清除氧自由基和减轻NO对神经元的损伤作用。     

Genetic Variants in KCNE1, KCNQ1, and NOS1AP in Sudden Unexplained Death During Daily Activities in Chinese Han Population

Fifty‐six sudden unexplained death (SUD) cases were collected from Chinese Han population, which occurred during daily activities and were autopsy negative in comprehensive postmortem autopsy. The coding exons of potassium channel genes KCNE1, KCNQ1, and nitric oxide synthase gene NOS1AP were sequenced. A synonymous mutation, KCNE1 F54F T>C was identified in 2 SUD cases, which was absent in the control subjects. Neither genotype nor allele frequencies of KCNE1 and KCNQ1 exhibited a significant difference between the SUD and control group. In contrast, the allele frequency (p = 2.7 × 10⁻¹⁰) and genotype frequency (p = 5.9 × 10⁻⁷) of rs3751284, and the genotype frequency (p = 2.9 × 10⁻²) of rs348624 in NOS1AP of SUD were significantly different from that of controls (p < 0.05). Our study suggested that rs3751284 and rs348624 might be susceptibility loci for SUD during daily activities. Larger sample sizes and further molecular studies are needed to confirm or exclude an effect of the NOS1AP SNPs on SUD risk.     

实验性兔羊水栓塞血浆NO和ET的含量变化

目的观察兔羊水栓塞(AFE)后血浆一氧化氮(NO)、内皮素(ET)含量的动态变化。方法采用怀孕家兔制作羊水栓塞动物模型,将不同性质的自身羊水注入兔血循环,分别在羊水注入前、注入后5min、45min从兔心脏取血,用镉还原法、放射免疫分析(RIA)法分别检测血浆中NO和ET的动态变化。结果注入羊水后ET含量显著增加,NO含量则显著降低,对照组无显著变化。NO与ET含量变化呈显著负相关。结论NO、ET的动态变化在羊水栓塞早期的一过性肺动脉高压及随后发生的DIC等过程中起重要作用。     

大鼠毒鼠强中毒内脏器官Caspase-3与Bcl-2蛋白的表达

目的探讨大鼠毒鼠强中毒的病理机制。方法SD大鼠60只,随机分正常对照组、空白对照组、高剂量中毒死亡组、低剂量中毒组,高剂量中毒死亡组以1.0mg/kg毒鼠强悬浊液灌胃,低剂量中毒组以0.1mg/kg体重毒鼠强悬浊液灌胃。用免疫组织化学技术对中毒大鼠器官检测caspase-3与Bcl-2蛋白的表达,用图像分析技术对检测结果进行分析。结果各器官caspase-3与Bcl-2蛋白的表达变化规律基本相似,即高剂量中毒组大鼠caspase-3与Bcl-2蛋白均呈较强的阳性表达,低剂量中毒组大鼠,Bcl-2与caspase-3于中毒30min后表达不明显,3h时,可见较为明显的阳性信号,Bcl-2在6h～3d达高峰,随后表达下降;caspase-3在24h～5d达峰值,随后下降。Bcl-2峰值早于caspase-3出现。结论Bcl-2与caspase-3参与了毒鼠强中毒的病理生理过程。     

姜黄素对缺氧缺血性大鼠脑组织中丙二醛和c-fos的影响

目的探讨姜黄素对大鼠缺氧缺血性脑损伤（hypoxia—ischemic brain damage．HIBD）后丙二醛（malondjaldehyde,MDA）含量和c—fos蛋白表达的影响。方法将SD雄性大鼠随机分为假手术对照纽、脑缺氧缺血组、姜黄素组和溶剂对照组。用比色法测定脑组织中MDA含量,免疫组织化学方法检测脑皮质区c—fos蛋白的表达,电镜观察脑皮质神经元的形态学变化。结果姜黄素干预组与其他组的相应时间段相比,MDA含量下降,脑皮质区c—fos蛋白表达显著增高（P〈0．05）。电镜观察脑皮质神经元损伤减轻。结论姜黄素可降低HIBD大鼠脑组织的MDA含量,上调c-fos蛋白的表达,减轻神经元的损伤。