重楼皂苷影响JAK/STAT3通路诱导结直肠癌细胞凋亡

目的观察不同浓度重楼皂苷对人结肠癌细胞凋亡的影响,并研究诱导结肠癌细胞凋亡的分子作用机制:明确重楼皂苷是否对IL-6/JAK-STAT3凋亡调控分子通路产生影响;寻找其诱导结肠癌细胞凋亡的相关信号转导通路或靶点。方法采用不同浓度的重楼皂苷(10,20,40,80μg/ml)分别作用于体外培养的结直肠癌SW480细胞株,在荧光显微镜下观察重楼总皂苷对SW480细胞形态的影响;ELISA法检测血清IL-6的水平;免疫印迹法检测JAK-STAT3蛋白表达水平。结果经重楼皂苷处理后,Hoechst33258染色可见典型的凋亡形态学改变;血清中IL-6分泌明显下降(P<0.05);其信号转导和转录活化因子STAT3降低。结论重楼皂苷能显著诱导结直肠癌SW480细胞产生凋亡,其机制可能为通过下调IL-6的分泌而抑制IL-6/STAT3信号通路的表达。     

血府逐瘀汤对抑郁症大鼠模型的治疗作用及海马5-羟色胺及5-羟色胺1A受体表达的影响

目的研究血府逐瘀汤对抑郁症模型大鼠的治疗作用及大鼠海马5-HT及5-HT1A受体表达的影响,探讨血府逐瘀汤抗抑郁作用机制。方法选用成年雄性SD大鼠60只分为三组:对照组、模型组和治疗组。模型组和治疗组给予慢性不可预性温和应激(CUMS)建立抑郁模型,治疗组给予血府逐瘀汤饮片灌胃。采用糖水偏好实验和Morris水迷宫实验进行行为学检测,采用高效液相色谱法测定海马5-HT浓度,Western blotting法检测5-HT1A表达。结果模型组大鼠糖水偏好百分比明显降低(P<0.05),平均逃避潜伏期明显延长(P<0.05);治疗组能逆转此改变;模型组大鼠海马5-HT含量和5-HT1A受体表达水平明显低于对照组(P<0.05),治疗组5-HT含量和5-HT1A受体表达水平明显升高,但仍低于对照组(P<0.05)。结论血府逐瘀汤有抗抑郁作用,其机制与影响海马5-HT水平及5-HT1A受体表达有关。     

华佗再造丸对局灶性脑缺血大鼠HIF-1α和VEGF表达的影响

目的观察华佗再造丸对大鼠局灶性脑缺血后低氧诱导因子(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法建立大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebra1αrteryocclusion,MCAO)模型。将SD大鼠分为假手术组、模型组、华佗再造丸(0.5,1.0,2.0 g/kg)三个剂量组。采用SYBR green实时荧光定量PCR检测各组大鼠脑内HIF-1α和VEGF mRNA表达。结果与假手术组相比,MCAO造成脑缺血损伤3天后HIF-1α,VEGF基因的mRNA表达水平降低,华佗再造丸各剂量组可明显提高HIF-1α,VEGF mRNA的表达水平,并呈现出一定的剂量关系。结论华佗再造丸能够增强大鼠局灶性脑缺血后HIF-1α和VEGF的表达,通过HIF-1α/VEGF通路促进脑缺血后的血管新生和神经再生,可能是其抗脑缺血的作用机制之一。     

地五养肝胶囊对肝纤维化大鼠肝组织EMT/MET的影响

目的研究地五养肝胶囊(Diwu Yanggan Capsule,DWYG)对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化大鼠肝脏上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)/间质-上皮转化(mesenchymal-epithelial transition,MET)的影响。方法SPF级Wistar大鼠给予50%CCl4/大豆油腹腔注射建立肝纤维化模型。给予DWYG干预后,采用羟脯氨酸(Hyp)检测试剂盒检测该复方对纤维化大鼠肝脏Hyp含量的影响。进一步,应用Western blot检测该复方对纤维化大鼠肝组织上皮细胞标志分子(E-cadherin)和间质细胞标志分子(Vimentin)蛋白表达水平的影响。应用quantitative real-time RT-PCR检测该复方对纤维化大鼠肝组织促EMT分子(TGF-β1)以及促MET分子(BMP-7)基因表达水平的影响。结果与空白对照组大鼠相比,CCl4诱导的肝纤维化模型大鼠肝组织Hyp含量显著升高,同时纤维化肝组织中E-cadherin的蛋白表达水平和BMP-7的基因表达水平明显下降,而Vimentin的蛋白表达水平和TGF-β1的基因表达水平明显升高。给予DWYG后,干预组大鼠肝组织Hyp含量较模型组大鼠显著降低,同时纤维化肝组织中E-cadherin的蛋白表达水平和BMP-7的基因表达水平均显著上调,而Vimentin的蛋白表达水平和TGF-β1的基因表达水平显著下调,且纤维化肝组织中TGF-β1/BMP-7比值明显下降。结论 EMT/MET失衡参与了CCl4诱导的大鼠肝纤维化的发生与发展,DWYG可通过调控EMT/MET平衡(抑制EMT而促进MET)减轻肝纤维化的病变,其调控机制与降低纤维化肝组织中TGF-β1/BMP-7比值相关。     

增殖细胞核抗原在非霍奇金淋巴瘤中的表达及意义

研究非霍奇金淋巴瘤 (NHL)中 ,增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达水平 ,探讨其与非霍奇金淋巴瘤恶性度的关系。方法 :常规HE染色进行组织学分类 ,利用免疫组织化学 (LSAB法 ) ,确定肿瘤的免疫表型 ,检测淋巴瘤中PCNA的表达。结果 :62例非霍奇金淋巴瘤中 ,低度恶性 3 9例 ,高度恶性 2 3例 ;48例为B细胞淋巴瘤 ,14例为T细胞淋巴瘤。该组病例中 ,PCNA阳性 62例 ,阳性细胞数均 10 %以上 ,PCNA的阳性程度与NHL的恶性度有关 ,在低度恶性组多表现为 +～ , 占 2 5 6% ,而高度恶性组只有 1例为 +, 占 5 2 2 %。 10例淋巴结反应性增生组织中 ,滤泡中心可见少数 (阳性细胞数 &lt;10 % )散在分布的PCNA阳性细胞。结论 :PCNA表达的阳性程度与NHL的恶性度有关 ;PC NA在NHL高度恶性组的高表达提示我们在组织学水平判断NHL的恶生程度PCNA将是很重要的参考标记物     

冰香散对鼠流感Toll样受体及Th1/Th2免疫的影响

目的通过检测鼠流感的肺病理变化及脾细胞Th1/Th2免疫因子及气管粘膜TLR2/4 mRNA的表达变化,初步探讨冰香散挥发油制剂对流感病毒的防治作用及其免疫调节机制。方法选用BALB/c小鼠,随机分为正常组、病毒对照组、利巴韦林组、冰香散挥发油制剂滴鼻组、雾化组,采用不同的给药方式预防性给药7d,第8天以15LD50攻毒,再持续给药5天后取材。肺组织经HE染色后观察其病变程度;脾脏研碎制得脾细胞悬浮液,以RT-PCR法检测细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-5的分泌情况;RT-PCR检测气管粘膜上TLR2/4基因表达的水平。结果小鼠经H1N1感染后肺部出现严重的炎性细胞浸润,与正常组相比TLR2/4 mRNA、IFN-γmRNA表达水平上升(P<0.01),IL-4、L-5 mRNA表达水平下降(P<0.01)。与病毒对照组相比利巴韦林组可显著增加IL-4 mRNA的表达(P<0.01),降低IFN-γmRNA表达(P<0.05);冰香散挥发油制剂滴鼻、雾化组能显著增加IL-4 mRNA、IL-5 mRNA的表达水平(P<0.01或P<0.05),但在降低IFN-γmRNA的表达上冰香散挥发油制剂滴鼻组的效果比较显著(P<0.05)。各给药组都有降低TLR2/4基因表达的趋势,但只有冰香散挥发油制剂滴鼻组的作用比较显著(P<0.01)。结论冰香散挥发油制剂对流感病毒性肺炎病变有一定的防治作用,调控炎性细胞因子及TLR2/4基因的表达水平可能是其抗流感所致肺炎的重要作用机制之一。     

白芥子对酒精性脂肪肝小鼠的保护作用

目的探讨白芥子对酒精性脂肪肝小鼠的保护作用及其机制。方法将30只昆明小鼠随机均分成3组,对照组喂饲普通饲料,损伤组喂饲普通饲料+45%白酒[12 ml/(kg·bw)]灌胃,保护组喂饲5%白芥子添加饲料+45%白酒灌胃。40天后,测肝功能指标(ALT,AST)、氧化应激指标(SOD,MDA)、脂肪细胞因子指标(Adiponectin,Leptin,Resistin和TNF-α),肝脏做HE染色切片观察。结果切片可见,保护组脂肪变情况较损伤组明显减轻。保护组较损伤组SOD、TNF-α升高(P<0.01),ALT、AST、MDA、Leptin降低(P<0.001),Adiponectin升高(P<0.001),Resistin无统计学意义(P>0.05)。结论白芥子可降低酒精对肝细胞的损伤作用,预防肝脏酒精性脂肪变,可能是通过抗氧化、调节脂肪细胞因子分泌来实现的。     

益气化痰活血方药对COPD痰瘀阻肺证大鼠肺组织Rock-1、Rock-2蛋白表达的影响

目的观察芪白平肺胶囊对慢性阻塞性肺疾病(COPD)痰瘀阻肺证模型大鼠肺组织Rock-1、Rock-2蛋白表达的影响。方法复制COPD痰瘀阻肺证大鼠模型,给予芪白平肺胶囊、法舒地尔干预,免疫组化检测模型大鼠肺组织Rock-1、Rock-2蛋白的表达。结果模型组大鼠肺组织Rock-1、Rock-2可见大量阳性表达棕褐色颗粒,各用药组较模型组比较阳性表达都有不同程度的抑制。模型组Rock-1、Rock-2平均吸光密度值较正常组明显增加(P<0.01);芪白平肺胶囊高剂量组、法舒地尔组大鼠肺组织Rock-1、Rock-2平均吸光密度值较模型组明显降低(P<0.01);芪白平肺胶囊低剂量组Rock-1、Rock-2平均吸光密度值较芪白平肺胶囊高剂量组明显升高(P<0.01)。结论芪白平肺胶囊可降低COPD痰瘀阻肺证模型大鼠肺组织Rock-1、Rock-2蛋白表达水平。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症模型大鼠学习记忆及海马超微结构的影响

目的研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠学习记忆和海马超微结构的影响。方法采用高脂灌胃、链脲佐菌素注射(38mg/kg)和慢性应激联合的方法建立糖尿病并发抑郁症动物模型,并随机分为5组:糖尿病并发抑郁症模型组,阳性药(二甲双胍0.18g/kg+氟西汀1.8mg/kg)组,左归降糖解郁方高、中、低剂量(20.53 g/kg,10.26 g/kg,5.13g/kg)组,以正常组为对照。给药4周后,采用Morris水迷宫进行行为学评价,采用透射电镜观察海马细胞超微结构。结果Morris水迷宫实验,与正常组比较,模型组大鼠逃避潜伏期(EL)明显延长,空间探索时间(SET)明显缩短(P<0.05);与模型组比较,阳性药组和高剂量组大鼠EL明显缩短,SET明显延长(P<0.05)。电镜下可见,正常组大鼠海马神经元细胞形态规则,染色质分布均匀,线粒体内部嵴清晰可见;模型组大鼠海马神经元胞体肿胀,内质网脱颗粒严重,线粒体内嵴消失;给予左归降糖解郁方高剂量后,海马神经元损伤程度减轻,部分胞内可见线粒体。结论左归降糖解郁方可明显改善模型大鼠的学习记忆功能,其可能通过保护海马神经元结构发挥治疗作用。     

复方蜥蜴散不同微粒组合剂对胃癌前病变大鼠模型P65与IkB-a蛋白表达的实验研究

目的研究复方蜥蜴散不同微粒组合剂对胃癌前病变(PLGC)大鼠转录因子p65及其抑制因子Ik B-a的影响,揭示其治疗PLGC的机制及效果。方法将120只雄性大鼠随机分为A、B、C、D、E、F(空白对照组、模型对照组、复方蜥蜴散80目治疗组、100目治疗组、80目100目等量混合治疗组、维酶素治疗组)6组,采用MNNG以及情绪刺激等综合因素造模,造模成功后,各组大鼠均作相应处理后,应用免疫组化法检测p65、Ik B-a在胃粘膜组织的表达及影响,并对实验结果进行统计分析。结果各组与A组比较,B、C、D、F组p65、Ik B-a阳性表达AOD值均降低,差异有显著意义(P<0.01),E组AOD值则显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);各治疗组与B组比较,AOD值明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);复方蜥蜴散各治疗组(C、D、E组)与F组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),尤以E组AOD值最低(P<0.01),而复方蜥蜴散各治疗组比较,E组与C组、E组与D组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),C组与D组比较,则差异无统计学意义(P>0.05)。结论复方蜥蜴散不同微粒组合剂能抑制凋亡相关蛋白p65、Ik B-a的表达,阻断并逆转了PLGC的病理改变。     

《回回药方》中扎里奴思方对大鼠动脉粥样硬化斑块内TIMP-1及MMP-9表达的作用研究

目的研究扎里奴思方对大鼠动脉粥样硬化斑块内金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,为进一步研究扎里奴思方稳定动脉粥样硬化斑块的作用机理提供思路。方法 60只SD雄性大鼠经动脉粥样硬化模型后,随机分为对照组、扎里奴思方组,每组30只,实验大鼠在不停止高脂喂养基础上,对照组予生理盐水1ml/d灌胃;扎里奴思方组予扎里奴思方1.54g/0.1kg灌胃。分组处理1周后处死全部大鼠,取标本行免疫组化法检测AS斑块内CD68巨噬细胞浸润、TIMP-1及MMP-9表达。结果扎里奴思方组CD68巨噬细胞浸润较对照组减少显著,具有统计学差异(P<0.01),MMP-9的表达较对照组显著减少,具有统计学意义(P<0.01),TIMP-1表达升高显著,统计差异明显(P<0.05)。结论扎里奴思方通过影响大鼠AS斑块巨噬细胞浸润、MMP-9及TIMP-1表达,从而发挥稳定AS斑块的作用。     

解毒化瘀颗粒调控肝细胞再生NO/cGMP信号转导通路的分子机制研究

目的明确解毒化瘀颗粒对NO-c GMP信号转导通路的调控靶点,探讨其通过该信号通路调节肝细胞再生的作用机制。方法选用SPF级Wistar大鼠250只,随机分为6组(假手术组50只、模型组50只、复方组50只、解毒组50只、化瘀组50只),行90%肝切除,建立暴发型肝衰竭肝再生大鼠模型。在术后(6h、12h、24h、48h、72h)5个不同的时间点,每组各取8只大鼠处死,留取肝组织。运用硝酸还原酶法测肝组织中NO含量,ELISA测定肝组织c GMP含量,实时荧光定量PCR测谷氨酸受体(NR1、GluR1),一氧化氮合酶(i NOS)表达情况。结果解毒化瘀颗粒组大鼠肝组织NO与c GMP含量在6h和12h明显高于模型对照组(P<0.05),NR1mRNA和i NOSmRNA在成模后6h和24h明显高于模型对照组(P<0.05),而GluR1mRNA表达各时间点未见明显差异。结论解毒化瘀颗粒通过调节NR1和i NOSmRNA表达,上调NOc GMP信号转导通路,从而促进肝细胞再生。     

木丹颗粒对痛性糖尿病周围神经病变大鼠钙通道基因表达的影响

目的研究木丹颗粒对痛性糖尿病周围神经病变(PDPN)大鼠钙离子通道蛋白mRNA表达的影响,探讨木丹颗粒对PDPN的治疗作用。方法雄性Wistar大鼠90只,随机取30只设为正常组,其余大鼠造模,参照Sally等方法,腹腔注射链脲佐菌素STZ(53mg/kg)制作PDPN模型,4周后,用Vonfrey纤维丝测双后足机械痛阈,痛阈明显下降,与基础值相比下降50%者为PDPN造模成功。再将在成模的54只大鼠随机分为模型组,木丹颗粒组。木丹颗粒组给予10ml/(kg·d)灌胃,分别于药物治疗后第2、4、8周末,各组随机取8只大鼠,用RT-PCR技术法检测大鼠背根神经节N型钙离子通道mRNA表达。结果与正常组比,模型组N型钙离子通道mRNA表达在各时间点呈上升趋势(P<0.05);与模型组比,木丹颗粒组N型钙离子通道mRNA表达在各时间点呈下降趋势,8周时,本组N型钙离子通道mRNA表达显著减少(P<0.05)。结论木丹颗粒可以下调PDPN大鼠N型钙离子通道蛋白mRNA表达,对PDPN有一定的治疗作用。     

5,2’,4’-三羟基-6,7,5’-三甲氧基黄酮通过内质网应激反应对CCl4所致大鼠肝纤维化的保护作用

目的探讨5,2’,4’-三羟基-6,7,5’-三甲氧基黄酮(TTF1)对四氯化碳(CCl4)所致大鼠肝纤维化的保护作用。方法72只大鼠随机分为6组:正常组、模型组、秋水仙碱(colchicine,Col)组和TTF1给药组(5,10,20μmol/kg),每组12只。观察TTF1对CCl4所致慢性肝损伤病理学变化,免疫印迹法检测内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)相关因子表达。结果病理学检查结果显示,模型组肝细胞有较广泛的点状坏死,伴炎症细胞浸润,肝细胞增生较为明显,汇管区结缔组织增生,肝纤维化分级的Ⅲ级;Col组和TTF1给药组变化类似:肝细胞点状坏死及炎症细胞浸润轻于模型组,肝纤维化分级为Ⅰ级。与模型组比较,Col组和TTF1给药组大鼠肝组织的GRP78,PERK,IRE1α,ATF6和Caspase-12表达明显降低。结论 TTF1对CCl4所致大鼠肝纤维化有一定的保护作用,抑制ERS反应可能是其主要作用机制之一。     

717解毒合剂对蝮蛇咬伤大鼠血清心肌酶谱的影响

目的观察717解毒合剂对蝮蛇咬伤大鼠血清心肌酶谱的干预作用。方法实验研究采用24只大白鼠局部注射蝮蛇毒造模后,分为中药组、血清组和中药加血清组3组进行治疗,从大鼠球后静脉取血,采用ELISA法检测大鼠模型在实验不同时段血清心肌酶谱的水平,并对实验数据进行统计分析,得出结论。结果模型组血清CK、CK-MB、LDH、AST的含量高于正常组(P<0.05)。治疗后与模型组比较,各治疗组血清CK、CK-MB、LDH、AST含量降低(P<0.05),且以中药加血清组疗效最好,其次为中药组。结论 717解毒合剂可以降低蛇伤大鼠血清CK、CK-MB、LDH、AST值,其解毒排毒,纠正心肌损伤的效果明显,是治疗蝮蛇咬伤的有效药物。     

艾灸调控实验性RA基因干扰家兔滑膜细胞分泌功能的研究

目的通过慢病毒载体介导的RNAi在体阻断SOCS1、PIAS1、PTPN22在RA动物模型的表达,研究艾灸对实验性RA滑膜细胞分泌功能的影响及其SOCS1、PIAS1、PTPN22的调控机制。方法日本大耳白兔36只,随机分为空白对照组、RA模型组、艾灸治疗组、艾灸+SOCS1基因干扰组、艾灸+PTPN22基因干扰组、艾灸+PIAS1基因干扰组。按0.5ml/kg体重剂量,将福氏完全佐剂平均注入模型组、艾灸各组动物的双后膝关节腔内(对照组动物同法注入无菌生理盐水作为对照),运用慢病毒介导的SOCS1、PTPN22、PIAS1 RNAi作为干预手段,麦粒灸"肾俞"、"足三里"穴治疗实验性RA(5壮/穴/天,6天1疗程,共治疗3个疗程,疗程之间休息1天)。ELISA法测定艾灸对关节滑膜液IL-1β、TNF-α含量的影响。结果与对照组比较,模型组IL-1β、TNF-α含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,艾灸组IL-1β、TNF-α含量显著降低(P<0.01);SOCS1干扰组、PTPN22干扰组、PIAS1干扰组与艾灸组比较,下调IL-1β、TNF-α含量效果不及艾灸组(P<0.05)。结论艾灸"肾俞""足三里"穴可显著降低实验性RA家兔滑膜液炎症相关细胞因子IL-1β、TNF-α的含量,但在SOCS1、PTPN22、PIAS1被干扰的情况下其作用显著降低,提示SOCS1、PTPN22、PIAS1对JAK-STAT信号通路的负反馈调控可能与艾灸抑制实验性RA滑膜细胞的异常分泌功能密切关联。