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采用RT-PCR方法扩增狂犬病病毒(RV)FluryLEP毒株N基因,将该片段克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,测序验证后将阳性重组质粒转化至宿主菌E.coliBL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果显示,RVN蛋白以包涵体形式表达,大小约为70ku,且该重组N蛋白具有良好的反应原性。用纯化的重组N蛋白作为诊断抗原建立了检测犬、猫RV抗体的间接ELISA方法,通过优化反应条件,确定抗原的最佳包被浓度为6μg/mL,血清最佳稀释度为1:200,SPA-HRP的最佳稀释度为1:2000。用该间接ELISA方法与以狂犬病病毒作为诊断抗原的商品化ELISA试剂盒分别对30份临床血清样品进行检测,结果两者的符合率为96.67%。表明基于重组N蛋白的间接ELISA方法可用于检测犬、猫RV抗体水平。 相似文献
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在肉品检疫中,判断屠宰猪有无旋毛虫感染,主要采用肉眼与镜检相结合的检查方法,但对早期和轻度感染者的检出率低。自70年代以来,国外用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunos-orbent assay,ELLSA)检测旋毛虫感染的报道颇多。我们曾用间接免疫过氧化物酶试验(ind-irect immunoperoxidase assay,IIP)和E-LISA试验诊断人体旋毛虫病,获得了满意的结果。在此基础上,我们亦应用SPA-ELISA诊断猪的旋毛虫感染和进行流行病学调查。 (一)材料和方法 相似文献
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用BHK-21细胞增殖猪伪狂犬病病毒(PRV)鄂A株,病毒培养上清液经硫酸铵沉淀、聚乙二醇浓缩后与等量经胰酶处理的乳胶制成凝集试验抗原。此抗原与伪狂犬病标准阳性血清、免疫猪血清和临床发病猪血清以及新鲜血清样品均呈现明显的凝集反应;与标准阴性血清和临床未感染PRV的猪血清均不发生凝集反应;与猪瘟阳性血清、衣原体病阳性血清均呈阴性反应。证实所建立的乳胶凝集试验具有微量、简便、快速、敏感性高、特异性强的优点,可用于伪狂犬病抗体的定性和定量检测,特别适宜基层现场检疫应用。 相似文献
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《中国兽医科学》2019,(11)
为了建立检测猪伪狂犬病病毒(PRV)黏膜免疫时特异的IgA抗体的间接ELISA方法,本研究采用PCR方法扩增了PRV gB基因截短片段,并将其连入原核表达质粒pGEX-6P-1,构建的表达质粒转化至大肠杆菌Transetta(DE3)菌株后,采用IPTG进行诱导表达,得到gB重组蛋白的可溶性表达,并用谷胱甘肽亲和层析柱进行蛋白纯化。以纯化的gB重组蛋白作为包被抗原,以山羊抗猪IgA-HRP为二抗,建立了猪伪狂犬病病毒IgA的间接ELISA检测方法。经ELISA反应条件优化,确定抗原包被浓度为2.4μg/mL,封闭液为10 g/L明胶,一抗37℃孵育1.5 h,二抗1∶20 000稀释后37℃孵育0.5 h,TMB显色液显色10 min。该方法的批内和批间变异系数均小于10%,重复性较好。利用该间接ELISA方法对PRV黏膜免疫的仔猪进行检测,结果可以在鼻腔黏液中检测出特异的IgA抗体。本试验为PRV黏膜免疫提供了初步检测方法。 相似文献
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为了建立一种快速检测狂犬病病毒抗体水平的方法,用浓缩提纯的狂犬病病毒CVS11株作为胶体金标记抗原,以金黄色葡萄球菌A蛋白为检测线上的捕获抗原,制备狂犬病病毒抗体水平检测试纸条。应用该试纸条进行临床样品检测,结果表明,以稀释后的犬全血或血清作为检测样品,试纸条检测的灵敏度为0.002U/mL,特异性试验证明该试纸条与犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬腺病毒2型犬科疾病阳性血清没有交叉反应,稳定性试验证明该试纸条在室温下保存的有效期为12个月,检测结果与快速荧光抑制试验的符合率为95.12%。证实该狂犬病病毒抗体免疫金标检测试纸可以方便、快速、灵敏、特异地检测狂犬病病毒的抗体水平。 相似文献
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我们从1988年开始,应用生物素亲和素系统BA-ELISA法,对295头份牛血清进行了检测,并同时与常规ELISA方法在敏感性、特异性、稳定性等进行了对比试验。均取得了满意结果。(一)材料和方法1.试剂:①结核杆菌纯蛋白衍生物(PPD)抗原,由北京中国生物药品检定所提供。本品批号:0083。②生物素化葡萄球菌A蛋白(B-SPA);③抗生物素标记辣根过氧化物酶(A-HRP);④兔抗牛IgG;⑤牛血清白蛋白;⑥小牛血清,以上由中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所提供。⑦聚合“OT”,由湖北医学院微生物学教研室提供。 相似文献
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应用反向间接血凝(抑制)试验检测伪狂犬病 总被引:1,自引:0,他引:1
目前,对伪狂犬病的诊断方法主要为间接血凝(IHA)试验(潘乃珍等,1990;Hap-per等,1980),酶联免疫吸附试验(ELISA)(蒋玉雯,1988)和斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)(李克荣,1989)。有关反向间接血凝试验(RPHA)和反向间接血凝抑制试验(RPHI)在伪狂犬病诊断中的应用尚未见报道。现将应用单克隆抗体Mab_3致敏的绵羊红细胞(SRC_3)快速诊断伪狂犬病病毒(PRV)抗原和抗体的研究结果,报告如下。 相似文献
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根据抗原结合特异性抗体,进而消耗补体的原理,我们将鼻疽病料(被检血清)与相应抗原和补体混合液,经一定条件致敏后,滴加于混有溶血素和绵羊红血球琼脂糖凝集板孔内,置37℃温箱反应2小时后观察结果。以孔的周围是否出现溶血圈或以试验孔与对照孔溶血圈直径之差进行判定。当被检血清含有鼻疽抗体时,便与相应的特异性抗原结合,进而消耗(结合)补体。由于补体被抗原抗体复合物所消耗,在致敏血球琼脂糖板孔内,不再发生溶 相似文献
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从1990年以来,我们用血凝抑制(IHA)和琼脂扩散(AGP)试验在本省12个县(市),对猪瘟疫苗免疫猪群进行抽样检测血清抗体,结果:IHA法检测的阳性率(达保护抗体滴度)为89.26%(1869/2094);AGP法检测的阳性率(出现沉淀线)为73.84%(1284/1739)。其中黄平、惠水两县分别使用三联苗和猪瘟冻干苗,给田间猪群免疫,均用150个免疫量,免疫后2月检测抗体。两种方法共检测521头(份)血清,均为阳性的有427头(份),其阳性率为81.95%[IHA法的阳性率为86.76%(452/521); 相似文献
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本试验用自制兔抗狂犬病病毒荧光抗体,检测病毒在BHK_(21)-C_(13)单 层细胞中的增殖,建立了快速荧光抗体技术(RFAT)用于狂犬病病毒TCID_(50)的 测定。用RFAT和小白鼠脑内接种半数感染量(MID_(50))测定法对狂犬病病毒 ERA株毒液32批,冻干种毒两批和Flury-LEP株冻干苗11批进行了平行测定,并对测毒结果进行了统计学分析。病毒滴度平均值(log10):ERA株TCID_(50)/ml为6.16,MID_(50)/0.03ml为4.86;Flury-LEP株T CID_(50)/ml为5.85,MID_(50)/0.03ml为4.74。ERA株TCID_(50)和MID_(50)相关系数为0.826,Flury-LEP株为0.754。结果表明在可靠性和可重复性方面RFAT至少同MID_(50)测定法相同。但RFAT简便、快速,是替代MID_(50)测定法进行病毒测定的理想方法。 相似文献
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