创伤性脑损伤大鼠水通道蛋白4表达变化及法医学意义

目的观察大鼠颅脑损伤后不同时间内水通道蛋白4（AQP4）mRNA表达的变化，探讨AQP4在脑损伤经过时间推断中的意义。方法利用液压冲击法制作不同程度大鼠颅脑损伤模型，在伤后不同时间（0．5、2、6、12、24、48、72h），应用RT-PCR法检测脑组织AQP4 mRNA表达，同时以非损伤组做对照。结果不同程度颅脑损伤后0．5h脑组织AQP4 mRNA表达均开始上调（P〈0．01），6、12h依次增高，24h达到高峰，差异均有统计学意义（P〈0．01），72h时仍维持较高水平（P〈0．01）；0．5h时轻度、中度、重度脑损伤时AQP4 mRNA的表达差异两两之间无统计学意义（P〉0．05），2、6、12、24、48、72h轻度、中度、重度脑损伤时AQP4 mRNA的表达差异两两之间有统计学意义（P〈0．01）。结论颅脑损伤后AQP4 mRNA呈现出时序性变化，其变化规律可望成为法医学推断早期脑损伤时间的指标之一。     

大鼠脑挫伤后NTE与COX-2表达随时间的变化

目的观察大鼠脑挫伤后脑组织NTE和COX-2的表达变化，并评价其法医学的意义。方法健康SD大鼠48只，随机分成正常对照组、手术对照组、挫伤组（按挫伤后处死时间再分为lh、12h、1d、3d、7d、14d共6个组）每组6只。以自由落体撞击法制作脑挫裂伤模型；应用免疫组化方法检测COX-2和NTE在脑组织中的表达情况；用SPSS13．0软件分析COX-2和NTE的表达情况与脑挫伤后存活时间的相关性。结果正常对照组和假手术绢NTE和COX-2均呈低水平表达，脯挫伤组伤后NTE和COX-2表达逐渐增强，均于1d达到高峰，至14d时COX-2表达降至正常对照组水平，而NTE仍高于正常对照组水平；挫伤各组与正常对照组比较，除1h组灰度值无统计学差异（P〉0．05）外，其余各组均有明显差异（P〈0．01）。结论脑挫伤后脑组织NTE和COX-2的表达均呈现先增强后下降的趋势，其表达规律有望为脑挫伤诊断及损伤时间推断提供参考。     

大鼠闭合性脑损伤后MAP-2的时序性表达

目的探讨大鼠闭合性颅脑损伤后脑组织微管相关蛋门－2（MAP－2）表达变化规律。方法建立大鼠闭合性颅脯挫伤模型,64只Wistar大鼠随机分为损伤后0．5h、6h、12h、ld、3d、7d、14d7个损伤组及对照组,每组8只。应用免疫组化和蛋h印记Western blot法及图像分析技术,检测脑挫伤后各设定时间点挫伤脯组织中MAP－2的变化。结果免疫纽化染色显示：对照组大鼠脑组织中可见MAP－2阳性表达;实验组伤后0．5h,挫伤灶及周同MAP－2阳性表达下降,伤后6h阳性表达降至最低,伤后12h,阳性表达逐渐增多,伤后14d,仍保持较高水平;蛋白印记结果与免疫组化结果一致。统计学分析显爪：MAP－2的表达各损伤组与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）,伤后12h、3d及14d与上…组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论大鼠脑挫伤后14d内,MAP－2存脑组织挫伤灶及其周同呈现先减少后逐渐增多的表达变化,可作为推断脑挫伤经过时间的参考指标之一。     

大鼠皮肤挫伤后NF-κB mRNA表达与损伤时间关系

目的应用实时定量PCR技术检测大鼠皮肤挫伤后NF-κB mRNA时序性表达规律，分析其与损伤时间的关系。方法制备大鼠皮肤挫伤模型，于伤后0．5，1，6，12，18，24，30h取材，一步法提取总RNA，检测其完整性和浓度，按照0．4μg总RNA量逆转录合成第一链cDNA，以rlp32为内参基因进行荧光定量检测，采用△Ct法比较其与正常皮肤组织NF-κB mRNA表达的倍数关系。结果皮肤挫伤组织中NF-κB mRNA伤后0．5h表达显著增强（P〈0．05），6h出现高峰，12h降至正常水平，随后略有回升。结论大鼠皮肤挫伤组织NF-κB mRNA的表达，随着损伤经过时间的延长呈规律性变化。     

血栓调节蛋白表达与大鼠脑挫伤时间的相关性

目的观察大鼠实验性脑挫伤后不同时问内脑组织、血浆中血栓调节蛋白（TM）的变化,探讨其与损伤经过时间的关系。方法参照Feeney’S法建立大鼠脑挫伤模型,在伤后1h、4h、8h、12h、24h、3d、7d7个时问点提取心帆及脑组织检材,运用酶联免疫法（ELISA法）检测f血浆TM含量,用免疫组织化学方法检测脑组织中TM刖性表达。检测数据应川SPSS13．0统计软件分析处理。结果与对照组比较,TM的阳性表达、IOD值和血浆含量存挫伤后4h开始增加,至24h达到高峰,随后逐渐减少,伤后3dTM血浆含量仍高于对照组,7d后基本恢复至对照纰水平。伤后4h～3d之间各组与对照组比较均有统计学意义（P〈0．05）。结论脑挫伤后TM表达随时间变化的规律性有助于推断呐损伤时间。     

氯胺酮在急性中毒大鼠体内的死后再分布研究

目的探索氯胺酮在大鼠体内的死后再分布变化规律及温度对再分布的影响。方法48只雄性SD大鼠随机分为2个实验组（室温组24只、冷藏组18只）和1个对照组（6只）,实验组大鼠以氯胺酮290mg／kg灌胃,45min后缺氧处死,分别置于室温（24℃）和冷藏（4℃）条件下,于死后不同时间（0、12、24、48h）取心血、外周血、肝、肺、肾、心肌、大脑,检测其中氯胺酮含量;对照组大鼠以生理盐水灌胃,各对应组织器官样品为空白对照。血和组织样品中加入内标物SKF。。后碱化,乙酸乙酯萃取,GC／MS全扫描定性,内标法、工作曲线法气相色谱定量分析。结果室温条件下,大鼠死后48h内随着死亡时间延长,心血、肺、肝中氯胺酮的浓度呈升高趋势（P〈0．05）,肾脏中氯胺酮的浓度先升高后下降（P〈0．05）,外周血、心肌和脑中氯胺酮的浓度无显著性变化（P〉0．05）。冷藏条件下,血液及组织中氯胺酮浓度变化无显著性差异（P〉0．05）,除心肌外,各样本浓度均低于相应时段室温条件保存的样本。结论氯胺酮在大鼠体内存在死后再分布现象。温度对大鼠死后血液及组织中氯胺酮浓度变化有较明显的影响。     

大鼠脑挫伤后脑组织β-APP表达与损伤时间的关系

目的观察大鼠实验性脑挫伤后不同时间内脑组织β淀粉样前体蛋白（β-APP）表达的变化,探讨β-APP与脑损伤经过时间的关系。方法参照Feeney’s法建立大鼠脑挫伤模型,在伤后1h,4h,12h,48h,72h,7d,14d,运用免疫组化SABC法和Westernblot法检测β-APP的表达,以非损伤组做对照。结果β-APP出现于损伤后1h,4h开始增加至12h达到高峰,随后阳性反应细胞逐渐减少,7d后仍有少量表达但仍高于对照组,14d后表达基本恢复至接近对照组水平,各实验组与对照组比较有统计学意义（P〈0.05）。结论β-APP在脑挫伤后随时间的变化,其表达呈现先逐渐增加后又减少的一定规律性变化。     

大鼠骨骼肌挫伤后细胞间黏附分子-1mRNA表达变化

目的应用荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）技术检测大鼠骨骼肌挫伤后细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecular—1,ICAM-1）mRNA表达。分析其与挫伤时间的关系。方法建立大鼠骨骼肌挫伤模型．分别取伤后0．5、1、6、12、18、24、30h及对照组检材。检材冰冻切片后进行FISH．激光共聚焦显微镜观察。结果大鼠骨骼肌挫伤后ICAM-1mRNA的表达6h达到峰值,18h下降至对照组的3．46倍．随后继续升高。结论大鼠骨骼肌挫伤后30h内ICAM—1mRNA的表达有一定的时间规律性．可望作为推断骨骼肌早期损伤时间的指标之一。     

大鼠弥漫性脑损伤后c-jun和GFAP表达的研究

目的探讨即早基因c-jun和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）在弥漫性脑损伤（DBI）中的表达规律。方法采用Marmarou方法制作大鼠DBI模型，将65只SD大鼠随机分为DBI组及对照组。用免疫组织化学技术（SABC）及图像分析方法观察大鼠DBI后15min、30min、1h、3h、6h、12h、24h、2d、3d、4d、6d脑组织内c-jun和GFAP表达规律，所得数据经SPSS10．0统计软件处理。结果对照组大鼠脑组织内未见c-jun阳性表达，可见少量GFAP表达。DBI15min即可在脑组织内观察到c-jun表达，而GFAP蛋白的表达则在DBI后6h增加。随着损伤经过时问的延长，c-jun与GFAP阳性细胞数及阳性表达范围逐渐扩大，c-jun表达在DBI后6h达高峰（P〈0．01），其后逐渐下降，伤后2d减退；GFAP阳性产物则在伤后4d左右达高峰（P〈0．01），其后呈下降的趋势。结论应用免疫组织化学方法检测c-jun与GFAP可作为诊断DBI的参考指标，二者在不同时段内表达所呈现出的时序性规律对损伤时间的推测也具有实际应用价值。     

大鼠皮肤和肌肉挫伤后细胞间黏附分子-1mRNA表达变化

目的应用实时荧光定量PCR技术检测大鼠皮肤和肌肉挫伤后组织中细胞间黏附分子－1（intercellular adhesion molecular－1，ICAM－1）mRNA的表达．分析其与损伤时间的关系。方法制备大鼠挫伤模型，于伤后0．5、l、6、12、18、24和30h取材，一步法提取总RNA，检测其完整性和质量浓度，逆转录合成第一链cDNA，以rpl32为内参基因进行荧光定量检测，采用△△Ct法比较其与正常皮肤、肌肉组织中ICAM－1mRNA表达的倍数关系。结果皮肤挫伤后ICAM－1mRNA的表达0．5h达到峰值，24h下降至正常对照组的7倍．随后再次升高：在肌肉组织中于损伤后0．5h表达显著增强，6h达到峰值，18h降至最低后再次升高。结论大鼠皮肤、肌肉挫伤后ICAM－1mRNA表达随损伤时间呈规律性变化，可望用于早期损伤时间推断。     

大鼠撞击性肝挫伤后MMP-2和MMP-9蛋白时序性表达

目的观察大鼠撞击性肝挫伤后不同时间肝组织中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2和MMP-9的蛋白表达规律。方法选取健康成年雄性SD大鼠50只,随机平均分入对照组和伤后1 h、3 h、6 h、12 h、18 h、24 h、3 d、5 d、7 d组。采用自由落体撞击法建立大鼠肝挫伤模型,在相应时间点处死大鼠,提取挫伤的肝叶,运用免疫组织化学染色法(SP法)和Western印迹法观察各组大鼠肝组织内MMP-2和MMP-9的蛋白表达情况。结果肝挫伤后,阳性细胞表达和蛋白半定量结果显示:MMP-2在伤后6 h表达开始增强,24 h达到峰值,3~5 d逐渐下降,7 d时接近正常水平,损伤6 h后各组(除18 h组)与相邻上组比较,差异均有统计学意义(P0.05);MMP-9在伤后1 h即明显上升,18 h达到高峰,3~7 d时逐渐下调,但仍高于对照组,伤后各组(除12 h、24 h组)与相邻上组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 MMP-2和MMP-9的蛋白表达在撞击性肝挫伤组织中有较好的时序性,有望作为肝挫伤的时间推断的参考指标。     

大鼠局灶性脑挫伤后Homer蛋白表达变化

目的 观察局灶性脑挫伤后Homer蛋白表达的变化规律,探讨其表达变化与损伤时间的相关性.方法 建立大鼠钝力性局灶性脑挫伤模型,应用免疫组织化学技术和Western印迹法观察脑损伤后不同时间脑组织中Homer蛋白表达的变化.结果 对照组、假手术组及伤后0.5h组脑组织中有少量Homer蛋白染色阳性细胞,伤后3h组脑组织H...     

实时定量PCR检测大鼠脑挫伤后HIF-1α mRNA的表达

目的研究大鼠脑挫伤后挫伤部位脑组织HIF-1α mRNA的表达随损伤时间变化的规律及其在脑损伤时间推断中的应用。方法以Feeney法建立大鼠闭合性脑挫伤模型,应用实时荧光定量PCR技术检测脑挫伤部位HIF-1α mRNA的表达,采用2-△△Ct法比较实验组与对照组脑组织HIF-1α mRNA表达的倍数关系。结果与对照组相比,HIF-1α mRNA的表达在伤后1h即达到高峰,随后下降,伤后24h出现一次较小高峰,3～14d逐渐恢复至对照组水平。结论脑挫伤后HIF-1α mRNA的表达随损伤时间的变化呈现出一定规律性,可作为推断早期脑挫伤经过时间的生物学指标之一。     

大鼠肌肉挫伤c—fos的表达

目的研究原癌基因c-fos的表达与肌肉挫伤的关系。方法50只SD大鼠随机的分为实验组和对照组,用免疫组化SP法观察大鼠肌肉挫伤后c-fos蛋白表达。结果随着损伤经过时间的延长,c-fos蛋白表达强度以及阳性面积增加,损伤后15min出现阳性信号,1h达到高峰,1d后恢复正常表达水平。结论原癌基因c-fos表达的检测可作为推断肌肉挫伤时间的指标之一。     

大鼠骨骼肌挫伤后Fzd2表达与损伤时间的关系

目的检测大鼠骨骼肌挫伤后卷曲受体蛋白2(frizzled-2,Fzd2)mRNA及其蛋白表达量与损伤时间的关系,探讨其是否可以作为损伤时间推断的指标。方法利用RT-qPCR和Western印迹法检测正常对照组及损伤后4~48 h每4 h大鼠骨骼肌中Fzd2 mRNA和蛋白水平的表达量。结果 Fzd2 mRNA在损伤后24 h、36 h、40 h相对表达量增高,24 h组表达量达正常对照组的两倍(P0.05);而Fzd2蛋白在损伤后相对表达量变化不明显(P0.05)。结论大鼠骨骼肌损伤后Fzd2 mRNA在一定时间内的表达变化情况可以作为多指标联合推断损伤时间的依据。     

大鼠骨骼肌挫伤后ASCT2 mRNA的表达变化

目的应用实时定量PCR技术检测大鼠骨骼肌挫伤后细胞中性氨基酸载体ASCT2 mRNA表达,分析其与挫伤时间的关系。方法建立大鼠骨骼肌挫伤模型,分别取伤后4、8、12、16、20、24、28、32 h及对照组检材。提取总RNA,逆转录合成第一链的cDNA,以RPL13为内参基因进行荧光定量检测,采用2-△△Ct法比较其与对照组肌肉组织中ASCT2 mRNA的相对表达量。结果损伤组肌肉组织中ASCT2 mRNA在挫伤后12、16h表达量分别为对照组的196.40%和189.15%,损伤后4、8、20、24、28、32h ASCT2 mRNA表达量与对照组相比无统计学差异(P>0.05),说明ASCT2 mRNA在损伤12～16h其表达量较正常组及其他损伤时间组要高,而在损伤20h以后ASCT2 mRNA表达量又降至正常水平。结论大鼠骨骼肌挫伤后32h之内ASCT2 mRNA的表达有一定的时间规律性,可望作为推断骨骼肌损伤时间的指标之一。