检材量对硅珠法提取脱落细胞DNA的影响

犯罪嫌疑人遗留在犯罪现场的帽子、口罩、衣服、手套、运动鞋、袜子等含有机体脱落细胞,在实验室逐渐成为常规检材。由于这类检材含有的脱落细胞少,散在分布,给检验带来了一定的困难。本文通过增加取材量和在15mL离心管中消化后用硅珠法纯化DNA,能显著提高检验成功率。1材料与方法1.1检材本实验室日常受理的案件检材54例,其中帽子5例,口罩5例,衣服10例,手套20例,运动鞋10例,袜子4例以及对应的犯罪嫌疑人血样。     

应用硅珠法提取陈旧骨骼DNA

骨骼相对于人体其他的组织脏器腐败降解慢,是进行高度腐败及白骨化样本DNA检验的唯一检材。但骨骼DNA的提取比较困难,本文运用传统的硅珠法提取骨骼DNA取得了很好的效果。1材料与方法1.1样本1~4年水浸泡、土埋的股骨、肱骨等样本,来自本实验室日常检案检材。1.2方法1.2.1骨骼DNA提取用水洗净骨骼表面,晾干。锯成小块,用锉打磨内外表面。去离子水、乙醇和5%bleach浸泡、晾干,磨成粉末。取骨粉5g;加入0.5mon/L EDTA(pH8.0)溶液,搅拌均匀置于摇床上脱钙12h,去离子水洗两遍,去上清,重复4次[1];沉渣中加入适量裂解液(6mon/L GuSCN,20mo…     

洗涤法结合硅珠法提取指甲垢DNA

目的考察洗涤法结合硅珠法提取指甲垢DNA的应用价值。方法收集200枚刑事案件中受害人指甲,采用洗涤法结合硅珠法提取指甲垢DNA;用Identifiler试剂盒进行PCR扩增,3030xl遗传分析仪进行分型检测。结果应用洗涤法结合硅珠法在200枚指甲中有64枚(32%)检出异体DNA,其中52枚为混合型,12枚为单一异体DNA;另有104枚检出受害人单一DNA。结论洗涤法结合硅珠法可应用于指甲垢DNA的提取。     

硅珠法在纯化污染检材中的应用

目的改进硅珠法在纯化污染DNA样本中的应用方法。方法对硅珠法中的具体步骤进行改进,直接纯化、浓缩Chelex法获得的不纯DNA,采用IdentifilerTM试剂盒进行复合扩增,产物经ABI3100测序仪分型检测。结果纯化后的DNA获得了满意的DNA分型。结论硅珠法能够有效地去除DNA样本中的污染物,直接用于纯化Chelex-100法提取的DNA。     

改良差异裂解法结合硅珠法提取混合斑精子DNA

目的采用改良差异裂解法结合硅珠法提取混合斑中精子DNA,并评价其应用价值。方法收集52例经常规差异裂解法检验含有女性分型的混合斑检材,采用改良差异裂解法结合硅珠法提取精子细胞DNA,IdentifilerTM试剂盒进行PCR扩增检验。并将常规差异裂解法结果作为对照。结果52例混合斑检材中,采用改良差异裂解法结合硅珠法检出单一男性精子成分有38例,男性分型检出率达到98．08％。结论改良差异裂解法结合硅珠法适合提取混合斑中精子DNA。     

磁珠法提取粪便检材DNA

正疑难生物检材的发现、提取和检验越来越多地应用到了各类刑事案件的侦破中,并发挥了良好的作用。现场粪便检材因其中含有的抑制物种类繁多并且不易去除,检验成功率不高。本研究采用磁珠分离试     

用二步消化法提取指甲DNA

<正>在日常检案工作中，对腐败尸体的指甲进行DNA检验，扩增效果有时不稳定，特别是埋于泥土、弃于粪坑、污水等环境中的指甲检材，常需多次反复处理才能得到满意DNA检测结果。究其原因，可能与没有得到有效的DNA模板有关。作者采用“二步消化法”，可以去除表层降解DNA，减少PCR抑制物，从而可有效地提高了DNA模板质量，提高了指甲DNA的检验成功率。     

215例枪支上接触DNA检材的检验分析

目的分析215例枪支上接触DNA提取、送检及检验结果,探讨枪支上接触DNA检出情况及可能影响检验结果的影响因素。方法收集自2013年以来受理的215例涉案枪支上接触DNA检材,按照提取部位、检出率、送检时间、检验方法进行分类并对数据进行统计分析。结果215例接触DNA成功检出35例,检出率为16.28%;枪支上不同部位接触检材的检出率无明显差异;硅膜法与改良硅珠法的检出率无明显差异;送检时间早的检材检出率高于送检时间晚的检材并具有统计学意义。结论枪支上接触DNA的检出率与提取部位、送检时间、检验方法等因素有关,日常类似检材应合理提取、及时送检并采取正确检验方法。     

泥土中二氧化硅对硅珠法提取现场生物物证DNA的影响

目的 研究泥土中二氧化硅对硅珠法提取现场生物物证DNA的影响。方法 泥浆悬液和稀释血混合,制成混有灰尘、泥土的生物样本以模拟现场生物物证,分别用加热裂解和胍盐化学裂解的方式进行细胞裂解,硅珠法提取DNA后用Identifiler Plus试剂盒进行PCR扩增及毛细管电泳检测,并对电泳结果进行比较;用泥浆悬液代替硅珠提取稀释血DNA,反向验证泥土中二氧化硅对硅珠法提取现场生物物证DNA的影响。结果 混有泥浆悬液的4μL、20μL稀释血加热裂解,提取扩增后得到完整STR分型,平均峰高1 969.7±376.9 RFU、9 706.7±349.8 RFU;混有泥浆悬液的4μL稀释血胍盐化学裂解,提取扩增后无法获得完整STR分型;混有泥浆悬液的20μL稀释血胍盐化学裂解,提取扩增后得到完整STR分型,平均峰高1 899.8±801.3 RFU;泥浆悬液代替硅珠提取20μL稀释血得到完整STR分型。结论 泥土中的二氧化硅在胍盐存在条件下会与DNA结合,导致硅珠法提取现场生物物证DNA的回收效率降低。     

改良硅珠法提取DNA的灵敏性及稳定性评价初探

目的通过比较对改良硅珠法提取DNA的灵敏性和稳定性进行评价。方法样本模板使用9947A(0.1ng/μL),以30pg为等差,配置10~700pg共24种不同浓度的DNA模板,分别采用常规硅珠法与改良硅珠法提取并纯化模板DNA,在Gene Amp PCR System 9700上进行PCR扩增,ABI 3500XL型荧光分析仪进行电泳检测。结果与9947A标准品阳性对照比较,采用常规硅珠法检验,24份样本均未获得成功分型;采用改良硅珠法检验,当模板量达到550pg时,即可得到所有基因座的成功分型;模板量达到580pg及以上时,16个基因座图谱峰值均可超过200RFU,分型稳定准确。结论改良硅珠法提取DNA易于操作,稳定性较好,灵敏度优于常规硅珠法,可在法医微量物证DNA检验中应用。     

信息动态

1 案 例 1.1 案例1 张某,男,30岁,某年2月23日因交通事故受伤.临床诊断为颅脑损伤、双侧多发肋骨骨折等,行手术治疗.病程中患者诉左肩关节活动不能.同年4月3日肌电图检查提示左侧腋神经损伤.6月25日复查肌电图提示其颈5左侧神经根损伤,左侧腋神经完全性损伤,左侧肩胛上神经、肩胛下神经严重损伤,左侧正中、尺、桡神经运动神经传导速度及复合肌肉动作电位均在正常范围.     

稀料中毒者生物样本检验

<正>1案例资料1.1简要案情胡某,男,30岁。2013年11月20日,胡某自服某品牌稀料约150m L后被送医院,经抢救无效死亡。提取死者心血、尿液、脑脊液、玻璃体液及胃、食管、回肠、空肠内容物等8种检材及剩余稀料,进行毒物分析。1.2检验方法分取各检材适量于顶空瓶中,密闭,置60℃水浴中恒温30min,用固相微萃取(SPME)装置(美国     

中国4个少数民族人群18个STR基因座遗传多态性

本文使用DNA Typer15TMplus试剂盒,对蒙古族、鄂温克族、达斡尔族和锡伯族4个少数民族人群进行18个常染色体STR基因座遗传多态性进行调查。结果 18个STR基因座在4个少数民族的无关个体中分别共检出186种(蒙古族)、150种(鄂温克族)、148种(达斡尔族)、192种(锡伯族)等位基因;4个民族18个基因座DP最低值:0.783(蒙古族)、0.800(鄂温克族)、0.795(达斡尔族)、0.783(锡伯族);PIC最低值:0.552(蒙古族)、0.588(鄂温克族)、0.569(达斡尔族)、0.549(锡伯族);累积非父排除概率为0.999 999 954~0.999 999 999。数据结果表明,18个STR基因座联合应用在上述4个民族相关研究和应用中可以选用。     

贵州省汉族群体22个STR基因座遗传多态性

应用Power PlexFusion 5色荧光标记复合扩增系统,对605名贵州省汉族无关个体22个常染色体STR基因座遗传多态性进行调查。结果 22个STR基因座共观察到260个等位基因,945种基因型,各基因座基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05)。22个基因座遗传学参数值范围分别为:H值0.625~0.929,DP值0.804~0.985,PE值0.322~0.855,PIC值0.57~0.91,累计非父排除概率为0.999 999 999,累计个人识别率为1-1.301 4×10-26。22个STR基因座在贵州汉族人群中具有良好的遗传多态性,具有较高的法医学应用价值。     

利用Y-STR结合共享基因分析侦破命案1例

1 案例 1995年10月1日．某村发生一起3人死亡的凶杀案,现场勘查提取到一块有可疑血痕的木板,经公安部物证鉴定中心检测得到一男性常染色体分型结果。2003年,本案提取到的检材常染色体分型上传到“全国公安机关DNA应用系统”进行比对,但始终没有结果。2011年10月,此案启动Y-STR检验和排查工作。     

辽南地区汉族群体23个STR基因座遗传多态性

本文对中国辽南地区汉族群体544个无关个体23个STR基因座遗传多态性进行调查。采用磁珠法提取基因组DNA,采用Power PlexFusion System试剂盒进行扩增及检测。结果在22个常染色体STR基因座共检出257种等位基因,其分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05)。累计个体识别率达1-2.3×1026,累计非父排除率达0.999 999 999 98。本文调查的23个STR基因座除4个多态性稍差外,其余均有较好的多态性,具有较高应用价值。     

广东潮安地区汉族人群15个STR基因座遗传多态性

本研究对中国广东潮安地区汉族500名健康无关个体进行15个常染色体STR基因座遗传多态性调查。采用Chelex-100法提取样本DNA,用Power Plex16 System试剂盒进行扩增及检测。结果在15个基因座共检测出165个等位基因和620种基因型,其分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05),对所调查的汉族人群,本文15个STR基因座具有较好识别能力。     

江西赣州地区汉族人群19个STR基因座遗传多态性

本文对中国江西赣州地区汉族376个健康无关个体进行19个常染色体STR基因座遗传多态性调查。采用Chelex-100法提取样本DNA,用GoldeneyeTM20A试剂盒进行扩增及检测。结果 19个基因座分别检出6~21个等位基因,其分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05)。所调查的江西赣州地区汉族人群19个STR基因座具有较好识别能力。     

新疆克州维吾尔族15个常染色体STR和10个Y-STR遗传多态性

本文应用ExpressMarker 16+10Y荧光检测试剂盒,对中国新疆克州地区维吾尔族人群239个无关个体15个常染色体STR、10个Y染色体STR基因座遗传多态性进行调查。结果在15个常染色体STR基因座共检出155种等位基因,其分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)。累计个体识别率为1-3.3574×10-18,累计非父排除率达0.999 999 244。对所调查的维族人群,本文15个常染色体STR基因座具有较好的识别能力,10个Y染色体STR基因座做了很好的补充,适宜法庭科学DNA建库。