牛冠状病毒牛肠病毒牛病毒性腹泻病毒三重一步法实时荧光PCR方法的建立与应用

为建立一种可以快速检测牛冠状病毒（BCoV）、牛肠病毒（BEV）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的实时荧光PCR方法并应用于临床检测,根据BCoV N基因、BEV 5′-UTR基因、BVDV 5′-UTR基因设计3对特异性引物和探针,通过对引物、探针的浓度以及反应条件的优化,建立了牛冠状病毒、牛肠病毒、牛病毒性腹泻病毒三重一步法实时荧光PCR方法,并对该三重PCR方法的敏感性、重复性、特异性和临床样本检测结果进行了评价。结果显示,该方法灵敏度高,对BCoV、BEV和BVDV的最低检测限为10 copies/μL;重复性稳定,批内和批间变异系数（CV）均在2%以下;特异性强,对常见腹泻类病原无交叉反应。应用此方法检测河南省445份牛腹泻粪便样本,BCoV、BEV和BVDV的阳性率分别为6.5%(29/445)、17.5%(78/445)、12.1%(54/445)。上述结果表明,本研究建立了牛冠状病毒、牛肠病毒、牛病毒性腹泻病毒一步法三重实时荧光PCR方法,为疫病的快速检测及预防提供了有效的技术手段。     

台湾光电产业的发展趋势

光电产业是21世纪全球高科技竞争的焦点,也是中国台湾省未来的主导产业。笔者用SWOT方法对台湾的光电产业进行分析,认为台湾光电产业存在技术基础薄弱和对外依赖性强的劣势。为此,笔者认为台湾应和祖国大陆加强合作,从而突破光电产业发展的技术瓶颈。     

中国——东盟产业内贸易发展趋势的实证分析

随着中国与东盟各国贸易的发展,双方产业间互补优势的产品所占双方贸易额的比重不断下降,双方产业内贸易的比重不断上升。本文借助现有统计数据,利用实证研究方法,分析了20世纪90年代以来中国与东盟国家间产业内贸易的整体水平和现实结构,以及对彼此贸易的贡献率,揭示中国与东盟国家贸易逐步从产业间贸易走向产业内贸易的发展趋势。一、产业内贸易指数对产业内贸易的经验性和统计性研究始于20世纪60年代,其代表人物有沃顿恩(Verdoorn,1960)、米歇里(Michacly,1962)、巴拉萨(1966)、格鲁伯和劳艾德(Crubel和Lloyd,1975)等,他们都建立了各自…     

牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒及牛支原体三重Nano-PCR方法的建立与初步应用

为了同时检测临床上牛常见的三种呼吸道重要病原体,本研究针对牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）和牛支原体（MB）保守基因进行引物设计,并成功构建标准阳性质粒。使用纳米金颗粒将普通PCR方法优化,建立了三重Nano-PCR检测方法。结果显示,三重Nano-PCR检测方法可同时检测出BVDV、IBRV和MB的阳性质粒（1μL）最低检测分别为1 fg、100 ag、10 fg,灵敏度分别为常规PCR的10、10、100倍。临床结果显示,30份采集于临床呼吸道病牛样品中,BVDV、IBRV和MB的Nano-PCR的检测阳性率分别为33.33%、36.67%、33.33%,而普通PCR的检测阳性率分别为26.67%、30%、20%,提示BVDV和IBRV混合感染最多,阳性率可达26.67%。三重Nano-PCR方法特异性良好,检测其他牛呼吸道相关病原体BCV、BPIV3和BRV时结果均呈阴性。本研究建立的快速灵敏且特异良好的三重Nano-PCR检测方法可广泛应用于临床诊断和流行病学筛查。     

哈萨克斯坦非能源产业现状与发展趋势

近些年来,为了摆脱对能源产业的过度依赖,走多元经济发展路线,建立健全经济体系,保障国家经济安全,哈萨克斯坦政府努力消除经济领域发展的固有障碍,使非能源领域实业投资环境不断改善,实现了投资渠道多样化。同时,人才培养的加强、先进技术和设备的引进,推动了哈萨克斯坦国内的非能源产业的发展。     

中俄大客机产业合作的现状及发展趋势

本文考察了中俄两国在大客机联合研制方面的进展情况,并深入剖析了两国合作面临的一系列内部和外部影响因素。促进因素有:中俄两国互为近邻,两国特殊的关系推动了航空领域的合作,在航空领域积累了大量的合作经验;双方在技术、资金和市场方面各自具有一定的优势;面对复杂多变的国际局势和经济形势,面对欧、美航空工业强国的技术封锁,中俄两国要探讨更为有效的互利共赢合作方式。限制因素有:双方航空产业结构过于相似,技术互补性差;两国对西方技术都存在某种程度的依赖;欧、美航空产业对中俄采取防范和竞争的姿态等。中俄客机产业合作的前景较为乐观,双方可以采取先项目合作,然后建立统一集团公司的两步走联盟战略。     

牛抗菌肽及其基因工程的研究进展

综述了牛抗菌肽在分类、组织分布、生物活性、基因结构等方面的研究进展,对采用基因工程技术表达牛抗菌肽的方法进行了评述,并展望了其转基因技术的应用前景,提出了利用生物信息学构建牛抗菌肽肽库的新思路。     

牛霉形体PCR检测方法的建立

参考GenBank中牛霉形体和无乳霉形体P81基因的序列差异,设计了针对牛霉形体P81基因的PCR引物,建立了牛霉形体PCR检测方法.并对该方法进行了敏感性和特异性试验.该方法可以从100ccu/mL(ccu:color change unit,颜色变化单位)的牛霉形体培养物中检出目的片段;经对丝状霉形体丝状亚种SC型(MmmSC)PG1株、丝状霉形体丝状亚种LC型(MmmLC)Y-goat株、山羊霉形体山羊亚种(Mccp)87001株、无乳霉形体(M.agalactiae)PG2株、绵羊肺炎霉形体Y-98株等亲缘关系相近的霉形体纯培养物检测,结果证实该方法具有良好的特异性.利用建立的PCR检测方法可以从人工感染牛的鼻拭子和临床发病牛肺中扩增出目的片段,与分离培养结果完全符合,本方法为国内首次建立的敏感、特异、快速的牛霉形体PCR检测方法.     

日本“产业空洞化”与东亚经济的发展趋势

产业空洞化是日本“泡沫经济”的重要表现之一。“产业空洞化”在日本已存在许多年，在最近的日本“泡沫经济”破裂中起到了推波助澜的作用。它不仅推动了日本产业结构的调整、转移，削弱了日本的国际竞争力，同时对东亚经济也产生着深远的影响，甚至因此可能改变东亚经济的走势。     

牛年说牛

庚子鼠年将过,辛丑牛年光临。忠诚憨厚、吃苦耐劳的老友又和我们见面了。世人尽知,牛者,吾人类之老友也,故其形象十分熟悉而亲切。从生物学角度言之,牛属哺乳纲偶蹄目草食性反刍动物,野生牛体型硕大,勇猛无比,但被人类驯化以后,个头有所缩小,性格有所弱化。从时间上考察,牛被驯化甚早。     

阿维菌素浇注剂对牛痒螨病的疗效试验

选择自然感染牛痒螨的杂交牛３０头，将其分成６组，每组５头，第１～４组分别用阿维菌素浇注剂（阿维必淋）按０．２，０．３，０．４和０．５ｍｇ／ｋｇ体重剂量在牛背部皮肤１次浇注给药；第５组用阿维菌素注射液（阿福丁）皮下１次注射；第６组为不治疗对照组。通过治疗后不同时间对每头试验牛皮肤固定部位的寄生虫检查和临床观察结果，评估阿维菌素浇注剂对牛痒螨病的疗效。治疗后第７ｄ显微镜检查时，仅从阿维菌素浇注剂０．２ｍｇ／ｋｇ体重剂量组的２头牛分别查到１和３个活螨（寄生虫指数为１）；之后，第１４，２１和３５ｄ显微镜检查时，各治疗组牛都未查到活螨（寄生虫指数为０）；治疗后第７ｄ观察，各治疗组牛的临床症状和皮肤病变都有程度不同的减轻，到第２１ｄ治疗组牛临床症状全部消失并康复。对照组牛被观察到１４ｄ，感染程度较试验开始时更严重。试验结果表明阿维菌素浇注剂体表浇注给药，０．３ｍｇ／ｋｇ体重剂量对牛痒螨有极强的杀灭作用，与阿维菌素注射液推荐剂量０．２ｍｇ／ｋｇ体重剂量的效果相同。     

牛支原体牛多杀性巴氏杆菌与牛传染性鼻气管炎病毒三重PCR方法的建立与初步应用

为建立一种可同时检测牛支原体(MB)、多杀性巴氏杆菌(PM)与牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的三重PCR检测方法,笔者设计1对特异性引物,引用文献的2对引物,对反应条件与反应体系进行优化,建立了一种三重PCR检测方法,并对其特异性、敏感性和重复性进行了验证。结果显示,最佳退火温度为51.7℃,最佳引物终浓度均为0.5μmol/L;敏感性结果显示,MB、PM、IBRV的最低检出限分别为3.9×10^-3ng/μL、6.61×10^-2ng/μL与2.97×10^-2ng/μL;特异性结果显示该方法只能特异性检测出MB、PM和IBRV。利用建立的三重PCR方法对108份临床病料进行检测,结果与单一PCR一致。结果表明,该方法可用于临床快速检测MB、PM、IBRV。     

牛的复合麻醉

对１４头健康成年牛（水牛１１头、黄牛３头）采用电针与肌注小剂量麻醉药相结合的针药复合麻醉，以探求更简便有效的麻醉方法。实验结果表明，电针与小剂量静松灵在保定宁复合麻醉与单一电针麻醉相比较具有以下优点：对体温、脉搏和呼吸无明显影响；可明显地提高皮肤痛阈；可明显地减少流涎；可明显地提高肌松作用；手术后去除电针刺激，动物可以随即站立和行走，保持电针麻醉的优点。从而证明电针与小剂量静松灵或保定宁复合麻醉比单一电针麻醉优越，是一种具有临床实用价值的麻醉方法。     

牛结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白的原核表达及其在牛结核病检测中的应用

采用重组PCR技术从牛结核分枝杆菌AN5基因组DNA中扩增CFP10-ESAT6融合基因,并将其定向克隆至原核表达载体pET-32a,构建了原核表达质粒pET-CFP10/ESAT6.重组子经酶切及测序鉴定后转化至大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后经SDS-PAGE电泳鉴定,获得约42 ku带有6×His蛋白标签的rHIS-CFP10/ESAT6融合蛋白,表达量约占菌体总蛋白的40%.用HIS蛋白纯化柱纯化该蛋白,Western-blot分析显示,该融合蛋白能与抗牛结核分枝杆菌阳性血清发生特异性反应.将重组的该融合蛋白用于刺激单次皮内变态反应阳性牛全血,可以产生高水平的IFN-γ,其特异性优于结核菌素.结果表明,获得的重组融合蛋白rHIS-CFP10/ESAT6为牛结核病的诊断奠定了基础.     

实验性牛皮肤移植的研究

在牛体上对比薄层皮片、中厚层皮片、厚层皮片3种皮片的嵌植效果.结果表明,牛皮皮片嵌植法简便易行,移植皮片成活率高;其生长速度以薄层皮片最快,中厚层皮片次之,厚层皮片最慢.     

牛G3BP1蛋白的原核表达及其对牛cGAS生物酶催化活性的影响

为了探究牛G3BP1(bG3BP1)对DNA识别受体cGAS生物酶催化活性的影响,本研究提取牛血液淋巴细胞中总的RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,克隆出bG3BP1基因全长;随后构建bG3BP1的原核表达载体pET-28a-SUMO-bG3BP1,将其转化至大肠杆菌中进行诱导表达,使用镍亲和层析柱对重组蛋白bG3BP1进行纯化,并切除His6-SUMO标签后再经镍柱纯化;最后将获得的bG3BP1蛋白用于牛cGAS(bcGAS)的体外酶促反应,采用ELISA方法检测酶促合成产率。结果显示,可溶性表达的bG3BP1蛋白促进了bcGAS的体外酶促反应,提高了第二信使分子2′3′-cGAMP的产率,这为2′3′-cGAMP的大规模生产及应用提供了研究思路和技术方法。     

牛结核病巢式PCR快速检测方法的建立

根据分枝杆菌(mycobacteria)保守的插入序列IS1081设计4条特异性引物,建立了快速检测牛结核病的巢式PCR方法。该方法一次扩增的敏感性是1.35 pg,二次扩增的敏感性是1.35 fg。在对95份PPD阳性牛临床病料组织和23份血液样本的PCR检测中,用引物TB-Q1和TB-Q2做一次扩增,阳性检出率分别为36/95(37.5%)和5/23(21.7%);用引物TB-B1和TB-B2做二次扩增,阳性检出率分别为81/95(85.3%)和14/23(60.9%)。该方法作为辅助PPD试验的快速检测方法用于牛结核病的流行病学调查,具有重要的实用价值和应用前景。     

齐齐哈尔市牛寄生性蠕虫的区系调查

在齐齐哈尔市龙江县、富裕县、泰来县的3个肉牛饲养场随机选取改良成年肉牛52头,用蠕虫学剖检法进行寄生性蠕虫区系调查。结果,在牛体内共检获各类寄生性蠕虫13种,隶属于2门、3纲、10科、12属,其中以捻转血矛线虫、牛仰口线虫、前后盘吸虫、食道口线虫、肝片形吸虫、毛圆线虫和莫尼茨绦虫的感染率和感染强度高,分布广,为齐齐哈尔市牛寄生虫的优势虫种。     

实验性牛大巴贝西虫病的研究

利用长角血蜱或大巴贝西虫感染血液,感染3头除脾牛和1头未除脾牛,感染后5～20天在血片中出现了典型的大型巴贝西虫。除脾牛临床主要表现呈稽留热,呼吸急促,血尿,眼结膜苍白黄染,高度贫血,个别牛血红蛋白量降至2g/100ml,红细胞数降至1.85×10~(12)/L,红细胞压积降至8％。尸体剖检主要变化为肺气肿,心内外膜、十二指肠、肺脏有出血点,肝肿大,膀胱有血尿等。并观察了病理组织学变化。未除脾牛临床上无明显变化。     

甘肃省牛肿瘤生态学的调查分析

从生态学角度对甘肃省２０年来牛的肿瘤性疾病进行了调查分析。共检出肿瘤１３０例，其中良性肿瘤９种８６例，恶性肿瘤１０种４３例，未定性肿瘤１例。检出率较高的肿瘤为：纤维瘤（４４例，３３．８％）、乳头状瘤（２２例，１６．９％）、鳞状细胞癌（１５例，１１．５％）和瞬膜癌（１４例，１０．８％）。母牛的肿瘤（７０例，５３．８％）多于公牛（５０例，３８．５％）。５～１０岁的牛肿瘤发病率较高（５９．２％）。牛肿瘤分布于省内８个地（州、市），尤以武威（９３例，７１．５４％）和兰州（１６例，１２．３１％）为主。瞬膜癌多发于黑白花奶牛，瘤体小，多呈菜花状突出于眼角。乳头状瘤多发于头颈和乳房皮肤，常单发，较小。鳞状细胞癌较多见于颈、乳房和眼周，局部组织肿厚，破溃。纤维瘤可发生于多处皮下。