免疫荧光技术诊断鸡病毒性关节炎的研究

以从吉林采集的鸡病毒性关节炎病毒株(简称吉毒株)为免疫源,制备抗该病毒的高免血清。用硫酸铵提取免疫球蛋白G(IgG)。标记异硫氰酸荧光黄(FITC),制备成鸡病毒性关节炎荧光抗体(FA)。用此FA检查26例人工感染鸡病毒性关节炎病毒发病鸡,自然发病鸡和20例健康鸡的主要脏器。脾脏和肝脏检出率最高,达100％。心、肾、肺等脏器检出率较低,为40％左右。健康鸡的检出率为零。脾脏和肝脏的特异性荧光细胞最明显,容易判定,是本法首选器官。采用该法检测病料,2小时即获病原学诊断结果。     

抗鸡传染性法氏囊病高免牛奶的制备与应用

抗鸡传染性法氏囊病高免牛奶的制备与应用目前防治鸡传染性法氏囊法病（ＩＢＤ）主要用高免卵黄抗体和高免血清。我们研制的高免卵黄抗体及鸡、猪、羊、牛等动物的高免血清对ＩＢＤ的防治效果都很好，但产量低、成本高。根据同一原理，我们在珠江奶牛场，经免疫黑白花奶牛...     

驻陕甘宁青部队猪囊虫病的血清学调查

本调查采用吉林省兽医科学研究所提供的猪囊虫病ELISA检测方法及诊断液,于1987年10月对我区驻陕甘宁青四省(区)部队的17个单位的猪群血清共608份进行了猪囊虫抗体血清学检测,检出阳性42份,阳性检出率为6.91％。17个受检单位的猪群血清有10单位检出猪囊虫抗体,其中,以驻陕西陇县某部为最高,达26.09％,青海玉树分区检出率最低(2.38％),经统计学处理,相差非常显著。按受检单位驻地分省(区)统计结果:陕西检出率为9.52％;甘肃检出率为6.81％;宁夏为5.63％;青海为7.26％,分省统计结果经统计学处理,相差不显著。     

猪囊虫特异抗原的提取和应用的研究

将细颈囊尾蚴和棘球蚴的粗抗原超免家兔,从抗两种粗抗原的兔血清中提取γ球蛋白与CNBr活化的Sepharose 4B偶联制成免疫吸附柱进行亲和层析,排除猪囊虫粗抗原中与细颈囊尾坳和棘球蚴的共同抗原,得到纯化的猪囊虫特异抗原SACC。用SACC进行斑点试验(DIA)诊断猪囊虫病,结果表明,SACC不仅具有较强的特异性(99.62％),而且其敏感性(98.30％)与粗抗原的敏感性(98.86％)比较也没有明显降低。经免疫电泳分析也证明SACC是猪囊虫的特异性抗原。     

应用萤光抗体法诊断猪瘟

目前许多国家,已应用萤光抗体法诊断猪瘟。这是一种特异性较高、并具有实用价值的诊断方法。日本应用的萤光抗体法分为两种:一种是从病猪脏器采取组织(最好是扁桃腺)涂抹标本或在冻结切片标本上进行萤光抗体染色;另一种是采取病猪的脾和扁桃组织作成乳剂接种子猪肾细胞,在1～2天内进行细胞染色。这两种方法,被广泛应用的是第二种,一般被称做组织培养萤光抗体法,主要是用培养细胞进行诊断。这种方法易于鉴别,准确性高,     

猪小肠集合淋巴结菌群的特点及其鉴定

为对猪小肠集合淋巴结黏膜处的菌群构成进行鉴定和分析,采集20头自然饲喂猪的小肠集合淋巴结回肠黏膜段,对细菌进行分离培养并通过16SrDNA测序鉴定菌种。结果发现,从猪小肠集合淋巴结中共分离到43株细菌,其中,大肠杆菌的检出率最高,为90.00%;枯草芽胞杆菌次之,为35.00%;蜡样芽胞杆菌为15.00%,地衣芽胞杆菌、巴氏杆菌均为10.00%,短小芽胞杆菌等为5.00%。而其他肠黏膜处的菌群则有所不同,回肠黏膜段共分离到8株细菌,分别为大肠杆菌(71.43%)、克雷伯菌(42.85%)、猪链球菌(28.57%)、奇异变形杆菌(14.28%)、嗜水气单胞菌(14.28%)等。此外,地衣芽胞杆菌仅在小肠集合淋巴结中被检出,检出率为14.28%。结果表明,大肠杆菌是猪小肠集合淋巴结黏膜处的优势菌群,枯草芽胞杆菌在猪小肠集合淋巴结黏膜大量存在,地衣芽胞杆菌仅存在于猪小肠集合淋巴结黏膜中,三者可作为靶向小肠集合淋巴结细菌活载体口服疫苗的载体。     

猪囊虫旋毛虫弓形虫组联快诊膜及全血斑点ELISA检测法的建立

将纯化猪囊虫、旋毛虫、弓形虫抗原分别定点包被于直径为5mm的混合纤维素酯微孔滤膜上,制成三虫组联快诊膜;自猪耳尖采取全血10μl作为Dot-ELISA检测样品,2小时内同时检测3种寄生虫病。以猪囊虫、弓形虫抗体阳性血清各90份、旋毛虫阳性血清26份进行检测,只在其相应位点呈阳性结果,无交叉反应;对720头份商品猪血清进行检测,其阳性检出率分别是:猪囊虫4.3％(31/720),旋毛虫0.14％(1/720)、弓形虫抗体阳性46.7％(336/720),与当地检出率平行:用350头商品猪的微量全血和其相应微量血清进行检测对比,结果猪囊虫阳性检出率,微量全血法为4.3％(15/350),微量血清法为4.6％(16/350),弓形虫抗体阳性检出率,微量全血法为45.7％(160/350),微量血清法为47.1％(165/350),经X~2检验,两种样品检测结果相差不显著(P>0.05)。     

应用吖啶橙荧光技术检验猪弓形体原虫试验

我们参考中国人民解放军八三医院检验科利用日本检查人体疟原虫时应用的吖啶橙荧光技术,转而应用到病猪淋巴结等组织的猪弓形体原虫的快速检验,并与瑞氏染色普通镜检法以及荧光抗体法对阳性小白鼠腹腔液的虫体鉴定和检出率作了对比试验。结果报告如下。     

抗猪瘟高免血清的制造与应用

猪瘟目前尚无特效药物治疗,主要靠注射疫苗预防。若采用被动免疫方法,即注射抗猪瘟高免血清亦能奏效。近年来,我们对新购猪苗使用自制抗猪瘟高免血清作预防及对病猪进行治疗试验,取得了良好效果。现介绍如下。 (一)抗猪瘟高免血清的制造方法 1.动物选择:凡准备在2～3周后屠宰的健肥猪或淘汰的健康母猪均可选用。 2.疫苗:兽医生物药品制造厂出售的猪瘟弱毒疫苗。 3.基础免疫:经健康检查,精神、食欲、体温、运动及粪便正常,体重160市斤以上的猪为合格。用猪瘟疫苗10头剂量(作1:50倍稀释,5毫升)肌注。     

杆状病毒表达的猪传染性胃肠炎病毒钉状糖蛋白在其血清学诊断上的应用

利用从猪传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）Ｍｉｌｅｒ株（Ｍ５Ｃ）克隆建立的一株重组杆状病毒（Ｒ２－２）表达的重组ＴＧＥＶ钉状糖蛋白（Ｓ），建立了一种阻断酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来检测猪群抗ＴＧＥＶ抗体。试验表明，用重组病毒Ｒ２－２接种ｓｆ９细胞（ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）所表达的重组蛋白量在接种后第７２ｈ达到最高值；该重组蛋白能与抗ＴＧＥＶＳ蛋白Ａ位点的单克隆抗体特异性结合。用阻断ＥＬＩＳＡ检测６８份来自无ＴＧＥＶ感染或ＴＧＥＶ（Ｐｕｒｄｕｅｌ５）免疫的仔猪或母猪血清，结果与ＴＧＥＶ蚀斑减数试验完全相符，灵敏度和特异性均为１００％。同时检测来自ＴＧＥＶ试验免疫猪、美国部分地区猪群、我国进口猪以及我国国内猪群血清６２７份，阳性检出率分别为８２．６１％、６１．６２％、５８．３３％和２９．１０％；用中和试验（微量中和试验或病毒蚀斑减数试验）检测的ＴＧＥ血清抗体阳性率分别为８０．８７％、５９．６０％、５６．１１％和３０．６０％，两种方法对抗ＴＧＥＶ抗体的检出率没有显著差异。     

猪传染性胃肠炎病毒的血凝作用

将猪传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）Ａ株在ＩＢＲＳ２细胞上增殖，培养物经差速离心浓缩后与鸡红细胞出现了高凝集价（２８），这种凝集作用能被兔抗ＴＧＥＶ高免血清所抑制。试验的最适反应条件为体积分数０．５０％红细胞４℃作用１ｈ。通过反复试验，建立了一种简单实用的血凝抗原制备方法，病毒培养液不需浓缩可直接应用。     

猪轮状病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

用差速离心法纯化的猪轮状病毒(RV)分别免疫仔猪和兔,制备了猪抗RV和兔抗RV超免疫血清,并用层析方法进行了纯化,建立了检测RV的双抗体夹心ELISA方法.结果表明,该双抗体夹心ELISA的最佳反应条件为:猪抗RV IgG包被浓度为4 μg/mL,兔抗RV IgG最佳工作浓度为3.5μg/mL,样品反应时间为90 min,酶标抗体工作浓度为1:8 000,以D<,450nm≥10.161作为阳性判定标准.该ELISA的重复性变异系数小于10 %,最低检测限为1.25μg/mL,并与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪大肠杆菌和沙门菌等病原无交叉反应,该ELISA试剂在室温和4℃条件下至少可保存4个月.用该ELISA方法和RV金标检测卡检测70份临床粪便样品,结果显示,ELISA的阳性检出率为22.9%,而金标检测卡的阳性检出率为20.0%.表明,建立的双抗体夹心ELISA方法具有特异性好、灵敏性高和重复性好等优点,可用于RV的快速检测.     

平板乳胶凝集试验快速检测猪肺炎霉形体抗体

我们在试管乳胶凝集(TLA)试验的基础上,又进行了平板乳胶凝集(PLA)试验检测猪肺炎霉形体抗体的研究。 (一)材料和方法 1.10％聚苯乙烯乳胶原液:购自上海市医学化验所。 2.菌种:猪肺炎霉形体ZC株、猪鼻霉形体、猪滑液霉形体冻干菌株均由中国兽药监察所提供。 3.抗原制备:按照本实验室方法自制。 4.血清:以下供试血清用前均经56℃水浴30分钟灭活处理。 (1)兔抗猪肺炎霉形体高免血清:按国际霉形体命名委员会推荐的方法自制。批号:     

虱螨净对猪血虱的杀灭试验

用天津市河北制药厂第三分厂生产的含10％敌百虫浇注驱虫剂虱螨净,选择自然感染有血虱的猪,分两个剂量组和对照组以沿病猪背脊中线浇注给药的方法进行试验。在给药前和给药后第2天开始,每隔1天检查1次猪体,连续检查3次。以观察猪血虱的寄生和死亡情况。于给药后第2天可发现猪体血虱全部死亡,对照组经3次检查均有猪虱寄生。试验证明,在临床上用5ml/10kg体重剂量较为适宜。     

我国部分地区猪传染性萎缩性鼻炎病原的调查

从我国部分地区２１个养猪场１０８１头份猪鼻腔分泌物和病死猪肺脏材料分离猪支气管败血波氏杆菌（Ｂｂ）６６１株，平均阳性检出率为６１．１％，个别猪场最高检出率为９３．３％。分离产毒素多杀性巴氏杆菌（Ｐｍ）９９株（Ｄ型９５株，Ａ型４株），总平均阳性检出率为９．２％。９９株是在３省１０个养猪场２６４头份病料中分离到的，阳性率为３７．５％。调查结果表明，Ｂｂ污染甚广，本菌感染的猪场多为非临床型猪场。产毒素Ｐｍ虽然仅在３省、市１０个猪场分离到，但其中有９个猪场是猪萎缩性鼻炎临床型猪场。说明临床型猪萎缩性鼻炎与产毒素Ｐｍ混合感染有关。Ｂｂ感染和不良的饲养管理、地理环境都有助于产毒素Ｐｍ在猪鼻腔中定居繁殖及传播，从而使病情发展加速。     

“驱虫擦就灵”驱猪蛔虫的试验观察

笔者于1990年6月2日至11月2日用四川省达县市生产的“驱虫擦就灵”,先后对甘肃省西峰市、庆阳县的7个单位的猪场和两个乡(镇)的部分农户饲养的463头猪,进行了驱蛔虫试验,收到了良好的效果。该药为无色透明液体,微有异味,每毫升含左旋咪唑100mg,白色软塑料瓶包装,每瓶5ml。试验动物及方法 试验猪均为自然感染猪蛔虫的猪,年龄在2～4月龄、体重为10～30kg。试验前对624头猪采集粪样,用饱和糖盐水漂浮法进行虫卵检查,检查出有虫卵的463份(感染率为74.2％)全部列为试验对象进行编组。第1组为1     

河北省猪繁殖与呼吸综合征病毒隐性感染情况的调查

为了解河北省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的隐性感染情况,采用RT-PCR方法对2006-2009年采自全省11个地市228个县级屠宰场1 565份商品猪的肺或肺门淋巴结样品进行了PRRSV病原学检测。结果显示,PRRSV场总体阳性率为45.18%;高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)样品总阳性检出率为12.08%,这4年样品的阳性检出率分别为28.45%、40.74%、12.01%和7.31%;经典猪繁殖与呼吸综合征病毒(C-PRRSV)样品总阳性检出率为2.36%,这4年样品的阳性检出率分别为3.45%、3.70%、3.92%和1.46%。PRRSV同猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型混合感染所占的比率为59.73%,HP-PRRSV和C-PRRSV同其他病原体混合感染所占的比率分别为57.67%和43.24%,混合感染以二重或三重感染为主。在同一份样品中不能同时检测到HP-PRRSV和C-PRRSV。总之,PRRSV,尤其是HP-PRRSV在河北省猪群中隐性感染的现象普遍存在,值得高度重视。     

免疫萤光技术在兽医诊断上的应用

免疫萤光技术,是根据免疫学上的抗原和抗体相遇时,发生特异性的反应这一现象,即将已知抗体(或抗某种传染病的血清)用一种萤光色素处理,使其互相结合,然后用这种含有萤光色素的抗体,对未知抗原(或病原材料)进行染色,染色后在紫外线显微镜下观察。如果抗原和抗体之间存在有特异性,则显示有特异萤光,从而可以识别未知抗原。     

猪肺炎支原体抗原定量ELISA检测方法的建立

为建立猪肺炎支原体抗原的快速检测方法,本研究以抗猪肺炎支原体P46蛋白单克隆抗体为包被抗体,抗P46蛋白多克隆抗体为检测抗体,建立了猪肺炎支原体双抗体夹心ELISA方法。通过优化后的反应条件为:抗猪肺炎支原体P46蛋白单克隆抗体包被浓度为2.5μg/mL,抗P46蛋白多抗及酶标二抗稀释度分别为1∶40 000和1∶10 000。该ELISA的重复性变异系数小于10%,最低检出量为9.754 ng/mL,与猪鼻支原体、猪滑液支原体、絮状支原体等无交叉反应。使用该ELISA方法对人工稀释的培养物中抗原含量进行检测,通过单点法和对样品倍比稀释后进行双平行线拟合两种方法计算,得出两种计算方法结果均与真实值基本相符,但双平行线法检测比单点法检测更加稳定。本研究建立的双抗体夹心ELISA方法为猪肺炎支原体的定量检测提供了有效手段,可用于猪支原体肺炎灭活疫苗生产过程中抗原的检测,为灭活疫苗生产中的质量控制提供了便利。     

磺苯咪唑对猪旋毛虫病的疗效试验及其毒性观察的研究

本文报道磺苯咪唑乳剂对实验感染猪旋毛虫包囊肌幼虫的杀虫效力及毒性试验。实验用35头猪分四次进行。对膈肌和腓肠肌肉样进行压片、消化及生物学试验检查杀虫效力。并对部分治疗猪进行了病理形态学观察。结果表明,30mg/kg一次肌注的杀虫效力为99.47％,二次及三次肌注的杀虫效力均为100％,并经重复试验证实,从而获得了能对感染宿主各部位包囊肌幼虫完全杀灭的良好效果。该药毒性低,用量小,效力高,建议有关领导部门组织生产,以供临床之急需。