荧光STR复合扩增试剂盒的评估过程探索

STR复合扩增检验技术是目前法医DNA检验技术中最重要也是最常用的技术种类之一，随着荧光检测技术和毛细管电泳技术的发展，特别是DNA数据库建设中丰要采用STR复合扩增技术进行基因分型，大大拓展了STR复合扩增检验应用范围。与此同时，STR复合扩增检验试剂成为影响检验质量的重要因素，关系到样本检验分型结果，而分型数据是为法庭提供证据的直接依据，     

D2S1338基因座等位基因丢失1例

<正>1案例资料1.1样本与检测某区县公安局送检的未知名尸体心血(滤纸)。采用Chelex-100法提取样本基因组DNA,分别用Identifiler-Plus和MiniFiler复合扩增系统进行复合扩增,扩增产物用ABI 3130XL型DNA测序仪检测,数据收集及分析采用GeneMapper 3.2软件。     

山西汉族人群3个STR基因座多态性

<正> 应用PCR技术进行STR复合扩增对山西地区汉族个体进行群体调查,获得F13A01、FESFPS和vWA 3个基因座的群体遗传学数据,现报道如下。1 材料与方法 居住山西汉族人群的109份无关个体的枸橼酸钠抗凝血,用CheleX-100法提取DNA;PCR复合扩增按Gene Print TMSTR Multiplex System试剂盒(Promega)的方法进行;扩增产物采用4％聚丙烯酰     

越南北方人群15个STR基因座遗传多态性

应用AmpFISTR IdentifilerTM荧光标记复合扩增系统,对越南北方人群15个STR基因座进行遗传多态性调查,获得了相关的群体遗传学参数,为法医学个体识别、亲权鉴定、DNA数据信息共享,以及人类群体遗传学研究提供基础数据。1材料和方法1.1材料119例越南北部地区的无关个体血纱样本,取自户籍明确的越南广宁省的农民自愿者,其中男性54例,女性65例。1.2方法用Chelex-100法提取样本DNA,按AmpFISTRIdentifilerTMK it说明书,在AB I 9600型热循环仪中进行复合扩增;扩增产物经AB I 3100遗传分析仪毛细管电泳,Data collection 1.01收集信息…     

线粒体DNA短片段复合扩增系统鉴别种属的研究

目的建立线粒体DNA短片段复合扩增体系用于种属鉴定的方法。方法提取人、牛、猪、羊、鸡的DNA,用所选的3对引物复合扩增细胞色素b基因（cyt b）片段、16srRNA基因片段和ND4基因片段,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测。结果人DNA扩增产物在358bp、157bp和110bp处各出现一条带;动物DNA扩增产物均只有358bp一条带。结论线粒体DNA短片段复合扩增鉴别种属的方法可区分人源性生物检材和其它动物样本,可应用于法庭科学实践。     

261例山东汉族人D6S1043、D12S391基因频率调查

本文应用STR复合扩增技术扩增,调查了261份山东汉族人群D6S1043、D12S391基因座的分布,获得相关遗传学数据,报道如下。1材料和方法261份无关个体血样,系本实验室日常办案积累。所有血样均采用chelex-100法提取DNA。按Sinofiler（AB公司,美国）试剂盒说明书进行复合扩增,反应体系为10μL,其中混合液4μL,引物2.2μL,金标Taq酶0.2μL,模板DNA适量,加去离子水至l0μL,置于9700扩增仪中扩增。     

AmpFISTR Identifiler^TM和Powerplex^TM16 system在DNA检验中应用比较

在DNA检验中，AmpFlSTR Identifiler^TM和Powerplex^TM16 system两种荧光标记复合扩增系统由于增加了几个鉴别率较高的基因座，因此比Profler Plus Kit具有更高的识别率，越来越多的应用于各类法医DNA检验当中。在刑事案件的DNA检验中，由于检材条件差异较大，对扩增系统的要求更高。为了更好的将这两种扩增系统应用于检案当中，笔者对上述两种系统的应用进行了比较。     

荧光标记检测STR复合基因座的应用

自DNA检验应用于法医鉴定以来,经过了十几年的发展,已建立了许多各种各样的方法和技术.STR分析方法虽发展时间不长,但由于其本身特有的特点,如等位基因片段短小,易于扩增,灵敏度高;基因座多,识别力强;对降解DNA能进行分析,可检验腐败陈旧生物检材;易于实现自动分析和计算机管理等,已日益成为日常DNA分析的主要、首选方法.STR分析从单个位点扩增分析到多个位点复合扩增分析,从银染到荧光检测分析,日趋自动化.反过来,检验程序的自动化进一步促进STR技术在日常案件检验中的应用.现荧光标记检测STR复合基因座技术已开始在法医DNA检验中应用并将被广泛采用.本文就其应用中的一些问题进行讨论.     

4个YSTRs基因座的复合扩增

目的 建立DYS19、DYS389 Ⅰ、DYS389 Ⅱ、DYS385复合扩增体系。方法 遴选Y STRs基因座的引物，分别用FAM、TAMRA、TET标记DYS19、DYS385、DYS389 Ⅰ、DYS389 Ⅱ，优化扩增条件，考察扩增体系的个体识别能力、灵敏度、种属特异性及突变情况。结果 所建立的4基因座Y STRs复合扩增体系分型清晰，单倍型多样性达0.989，且特异性好，灵敏度高(1ng DNA)，未观察到突变。结论 所建立的4个Y STRs基因座复合扩增方法适合法医学应用。     

广西地区回族人群15个STR基因座的多态性调查

<正> 应用AmpFISTR IdentifilerTM荧光标记复合扩增系统对286例广西回族无关个体血样DNA进行15个STR基因座的多态性调查,获得了广西回族群体遗传学调查数据,现报道如下。1 材料和方法1.1 实验材料 286份广西回族人群无关个体血样由广西壮族自治区公安厅提供。1.2 方法1.2.1 DNA提取 Chelex—100法提取样本DNA。1.2.2 PCR反应 按AmpFISTR IdentifilerTM Kit说明书     

复合扩增A10、C4基因座遗传多态性及法医学意义

目的　建立复合扩增A10、C4基因座的体系 ,研究其在法医学检验中的应用价值。方法　生物学样本用Chelex - 10 0的方法提取DNA ,荧光标记的特异性引物复合扩增A10、C4基因座 ,用ABI 310 0遗传分析仪对扩增产物进行检测分型。结果　A10、C4基因座各检出 6个等位基因 ,GD值分别为 0 .6 86 ,0 .84 6 .共检出 2 3种单倍型 ,其单倍型的个体识别率为 0 .9184。扩增女性DNA ,均无特异性扩增产物 ;调查 30个二代家系 ,均未观察到突变基因的存在。结论　A10、C4复合扩增体系多态性较高 ,对法医学中男女混合检材的个人识别及父系亲缘关系鉴定有较高的应用价值。     

模板DNA用量对荧光STR复合扩增检测的影响

目的 探讨模板DNA用量对荧光STR复合扩增检测的影响,寻求荧光STR复合扩增检测的最适扩增模板DNA用量。方法 采用模板DNA(9947A)不同的扩增用量,对Profiler Plus试剂盒的基因座进行扩增,在3100型全自动遗传分析仪上作了检测。结果 3100型遗传分析仪检测的最适扩增模板DNA用量在0.31～2.5ng之间。结论 模板DNA量过高或过低均会影响荧光STR复合扩增检测结果的可靠性。     

重庆地区汉族人群9个STR基因座遗传多态性

正本文应用STRtyper-10G荧光复合扩增体系,对重庆地区汉族人群9个常染色体STR基因座遗传多态性进行调查,以期为相关研究及实践提供基础数据。1材料与方法样本318名重庆地区无关汉族个体的血样均为重庆市正鼎鉴定所日常工作积累。STR分型所有样本均采用常规Chelex-100法提取DNA,STRtyper-10G荧光复合扩增试剂盒10μL反应体系进行扩增,ABI 3130遗传分析仪毛细管电泳     

湖南地区苗族人群26个Y-STR基因座遗传多态性

<正>本研究应用Goldeneye TM DNA身份鉴定系统26Y试剂盒[基点认知技术(北京)有限公司]荧光标记复合扩增系统,对湖南地区120名苗族无关个体进行基因分型,获取了26个Y-STR基因座在湖南地区的相关群体遗传学数据,为该地区苗族人群的法医学鉴定提供基础数据,现报道如下。     

SNP-STR遗传标记复合扩增体系的构建及法医学应用

目的筛选并构建与目前STR数据库兼容的SNP-STR遗传标记复合扩增体系,调查其在四川汉族群体中的遗传多态性,并探讨其在混合DNA样本分析中的应用价值。方法以现有商业试剂盒中使用的STR遗传标记为基础,筛选与STR遗传标记相邻的SNP位点并组成SNP-STR遗传标记。运用SNP等位基因设计特异性引物,构建基于等位基因特异性扩增的SNP-STR遗传标记复合扩增体系。调查该体系在四川汉族群体的遗传多态性,并评价不同位点数目的体系对两个体混合DNA样本的检测效能。结果筛选并构建了由13个SNP-STR遗传标记构成的等位基因特异性复合扩增体系。在四川汉族群体中,各位点杂合度为0.76～0.88,累积个体识别率达0.999 999 999 999 999 968。在对两个体混合DNA的分析中:单位点扩增时,混合样本的混合比例达到1 000∶1时依然可以检测到少量成分所特有的分型;多位点复合扩增时,混合比例最大可达500∶1;随着体系中位点数量的增加,对混合DNA中少量成分的检测效能降低。结论SNP-STR遗传标记较STR具有更高的多态性,其构成的复合扩增体系对混合样本的分析效能优于传统的STR复合扩增体系。     

Chelex-100提取生物检材DNA实时PCR定量研究

目的研究Chelex-100法提取的生物检材DNA用量与复合STR分型成功率的关系。方法113份各种生物检材采用Chelex-100法提取DNA，应用Quantifiler人类DNA定量试剂盒在ABI 7500荧光定量PCR仪上进行实时PCR定量，同时用Identifiler复合扩增系统在ABI 3100遗传分析仪上对这些DNA样品进行STR分型。结果各种生物检材提取的DNA浓度分别为：37份滤纸、纱布血痕0．042～5．28ng／μl，16份口腔拭子1．15—4．21ng／μl，18份烟头0．016～1．46ng／μl，10份肋软骨0．531—14．40ng／μl，8份肌肉5．75—24．80ng／μl，7份指甲0．788—11．50ng／μl，17份精斑0．79～99．50ng／μl。在建立的8μl扩增体系中，根据上述结果，调整用于复合STR扩增的DNA模板量在0．5—3ng之间，大部分样品可获得完全的STR分型。结论Chelex-100法提取的检材DNA模板用量在0．5—3ng之间可得到有效STR扩增，浓度为0．5ng／μl以上的DNA样品，用小体积模板（1μl）比大体积（3μl）模板扩增效果好。     

23个STR基因座荧光复合扩增体系的法医学应用评估

目的评估新建立的23个STR复合扩增体系EX23的法医学应用价值。方法使用磁珠法提取样本DNA,应用23个STR复合扩增体系进行扩增,ABI3130XL遗传分析仪对扩增产物进行电泳,GeneMapperID 3.2软件进行基因分型,对法医学应用参数、灵敏度、种属、脱落细胞检材及降级检材分型效果进行观察,并与Sinofiler试剂盒比较。结果 DNA模板量在0.05~1.00ng时,各基因座分型结果清晰准确,均衡性好、特异性强。应用该复合扩增体系检验混合样本、降解检材及脱落细胞检材,均能获得正确的分型结果。统计结果显示该23个STR基因座累计个人识别（TDP）率达0.999999999,三联体累计非父排除率（CPE）达0.999999997。结论新建立的23个STR复合扩增体系分型效果良好,在广东地区汉族人群中具有高度多态性,可满足日常法医鉴定的需要。     

荧光标记短片段STR复合扩增系统的法医学应用研究

目的解决严重降解(低于300bp)DNA检验问题,提高降解DNA的检出率。方法重新设计引物,减小扩增产物片段长度,用荧光标记短片段STR复合扩增体系进行DNA检验,扩增结果与用Identifiler试剂盒扩增出的结果进行比较。结果用荧光标记短片段STR复合扩增系统对实际案件中的高度降解DNA检材进行检验,可以获得满意分型。结论该系统可用于严重降解DNA检材的检验工作。     

亲子鉴定检出染色体三倍体1例

<正>1案例资料1.1简要案情受检者为孕妇、疑父和孕妇腹中胎儿。孕妇22岁,怀孕24周。签署知情同意书后,采集孕妇和疑父外周静脉血、胎儿羊水样本用于鉴定分析。1.2 DNA分型检测Chelex-100法提取DNA,采用Power Plex?21试剂盒(美国Promega公司)进行复合扩增,扩增产物用3500XL基因分析仪(美国ABI公司)进行DNA分型检测。应用Identifiler~(TM)试剂盒(美国     

AmpFlSTR Identifiler~(TM)和Powerplex~(TM)16 system在DNA检验中应用比较

在DNA检验中,AmpFlSTRIdentifilerTM和Pow鄄erplexTM16system两种荧光标记复合扩增系统由于增加了几个鉴别率较高的基因座,因此比ProfilerPlusKit具有更高的识别率,越来越多的应用于各类法医DNA检验当中。在刑事案件的DNA检验中,由于检材条件差异较大,对扩增系统的要求更高。为了更好的将这两种扩增系统应用于检案当中,笔者对上述两种系统的应用进行了比较。1材料和方法1.1实验材料AmpFlSTRIdentifilerTM荧光标记复合扩增试剂盒,PowerPlexTM16system荧光标记复合扩增试剂盒。采用controlDNA9947A(ng·μL-1)(Promega公司)…