猪圆环病毒2型基因型鉴别PCR检测方法的建立

采用PCR方法从猪圆环病毒2型(PCV2)山东分离株中扩增ORF2基因片段,结合GenBank中已登录的PCV2基因序列进行同源性分析及基因型鉴定,确定山东省PCV2的流行优势基因型,探讨PCV2基因的遗传变异特性。依据PCV2基因型间的差异性序列,设计、合成特异性PCR引物,建立PCV2基因型鉴别PCR检测方法,并从敏感性、特异性、重复性等方面评价其性能。结果,获得了28株PCV2ORF2完整基因,其中4株为PCV2a型,21株为PCV2b型,3株为新基因型PCV2d型,显示山东省流行的PCV2优势基因型为PCV2b。基因同源性分析表明,2000-2012年国内不同地区分离株的基因同源性为90.5%~99.8%,不同基因型PCV2存在一定形式的特有氨基酸位点序列。用建立的PCV2基因型鉴别PCR方法扩增的片段大小分别为341bp和177bp,该方法最低能检测病毒DNA的量为5ng/μL;特异性试验结果显示,该方法只对PCV2a和PCV2b的DNA扩增阳性,而对猪圆环病毒1型(PCV1)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪瘟病毒(CSFV)、乙型脑炎病毒(JEV)和大肠杆菌(Escherichia coli)的扩增结果均为阴性;重复检测10次的结果均一致。结果表明,建立的PCR方法具有良好的特异性和重复性,可用于PCV2基因型的鉴别检测。     

猪圆环病毒2型和猪生殖与呼吸综合征病毒混合感染的检测

对采自甘肃省天水市某猪场的24份病猪组织器官样品(肺、脾、肾和淋巴结)进行了病毒分离,同时设计特异性引物,建立了分别检测猪圆环病毒2型(PCV-2)和猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的PCR和RT-PCR方法,应用ELISA方法检测了血清中PCV-2及PRRSV抗体,以调查该猪场PCV-2和PRRSV混合感染的情况.结果显示,有14份样品均扩增出了PCV一2和PRRSV的目的基因片段,且PCV-2及PRRSV抗体均呈阳性.证实,该猪场出现了PCV-2和PRRSV的混合感染,阳性率为58.33%.     

猪伪狂犬病病毒GZ-Z1株的分离鉴定

为获得1株猪伪狂犬病病毒贵州分离株,将贵阳市某猪场送检的流产胎儿病料经一系列处理后接种Vero细胞,并对分离毒株分别进行了病毒理化特性、电镜形态观察、中和试验、动物接种试验、核酸检测等鉴定。当盲传至第3代时,出现细胞变圆变亮、脱落、呈拉网状特征的细胞病变;分离毒不耐酸和热,对5-碘脱氧尿核苷和有机溶剂氯仿敏感,能被伪狂犬病病毒标准阳性血清中和;透射电镜下可见位于囊泡中呈近圆形、有囊膜、150～180 nm大小的成熟病毒粒子,在胞核中可见衣壳呈晶格状排列的病毒包涵体以及空心、实心2种无囊膜的病毒粒子;将分离毒株接种家兔,能引起家兔奇痒、麻痹死亡;PCR扩增产物经测序证明系PRV gD基因的部分序列。结果表明,成功分离获得了1株猪伪狂犬病病毒贵州株。     

猪圆环病毒2型ORF2基因插入猪细小病毒VP2基因3'端对病毒样颗粒形成的影响

以猪细小病毒(PPV)四川分离株SC-1的VP2基因3'端为靶点,在第1215和1216位之间插入长约700 bp的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因片段,将重组后的PPV VP2-PCV2 ORF2克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,构建了重组质粒pEGFP.VO;经酶切和PCR鉴定后,采用脂质体介导法将重组质粒pEGFP.VO转染COS-7细胞,应用倒置荧光显微镜、电镜、免疫荧光以及生物信息学技术对表达产物进行观察分析.结果显示,重组质粒pEGFP.VO在COS-7细胞中得到表达,但在电镜下没有观察到病毒样颗粒.通过对PPV衣壳蛋白的三维结构分析及免疫荧光检测发现,PCV2 ORF2基因的插入位点位于PPVVP2基因的3'端,相应表达产物则位于VP2蛋白多肽的C端,且被其包裹在内,这可能影响了病毒样颗粒的形成,表明,PPV VP2基因3'端不适合外源基因插入构建重组病毒样颗粒.     

广西断奶仔猪猪圆环病毒2型的检测

对广西 16个养猪场的 2 2份断奶仔猪病料用PCR技术检测猪圆环病毒 2型 (PCV 2 ) ,对阳性病料进一步检测猪瘟病毒、猪生殖和呼吸系统综合征病毒、伪狂犬病病毒及细菌性病原。结果 ,从南宁市郊某猪场表现衰弱症状的病猪病料中检测出PCV 2 ,而这些病料没有检出猪瘟病毒、猪生殖和呼吸系统综合征病毒、伪狂犬病病毒及可疑细菌 ,证实广西存在PCV 2引起的断奶仔猪多系统衰弱综合征 (PMWS)。     

河北省猪圆环病毒2型ORF2基因的克隆与序列分析

根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物。采用此引物从PCV2疑似病料的3个样品中扩增出了ORF2片段。将扩增片段克隆入pMD18-T载体中,筛选获得了含有相应片段的阳性重组质粒pMDHB-ORF2。对质粒中的插入片段测序后,应用DNAStar序列分析软件,对所测PCV2序列与GenBank中的国内外PCV毒株进行了同源性比较。结果,3个样品间ORF2基因的核苷酸同源性为100%;它们与浙江分离株之间核苷酸序列的同源性极高,达99.5%。     

PCV2 PPV PRV和PRRSV多重PCR检测方法的建立及初步应用

参照GenBank中的猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因序列,设计了4对引物分别用于扩增PCV2 ORF2、PPV NS1、PRV gB、PRRSV N基因的目的片段.通过对反应因素进行优化,建立了检测PCV2、PPV、PRV、PRRSV的多重PCR(mPCR)诊断方法.敏感性和特异性结果显示,该mPCR对4种病毒的最低核酸检测量分别为29.0 Pg(PCV2)、17.3 pg(PPV)、36.8 pg(PRRSV)、38.4 Pg(PRV),而对猪瘟病毒、猪流感病毒、猪圆环病毒1型、牛病毒性腹泻黏膜病病毒、大肠杆菌的扩增结果均为阴性.119份临床样品的多重PCR检测结果显示,有3份样品同时感染PPV和PCV2,68份样品同时感染PRRSV和PCV2,其余样品均为PCV2阳性.表明,建立的多重PCR方法能够对PCV2、PPV、PRV、PRRSV单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断.     

应用复合PCR法检测猪圆环病毒

根据基因库中猪圆环病毒(PCV)的基因序列设计引物,建立复合PCR方法,对2株PK-15细胞进行了PCV检测.结果2株PK-15细胞都可扩增出PCV-1的基因片段,其中1株还扩增得到了PCV-2的DNA片段.由此可见,应用设计的引物进行复合PCR快速检测PCV是可行的,这为PCV的检测、分型及PCV相关疾病的诊断奠定了基础.     

猪圆环病毒3型的分离与鉴定

为分离获得猪圆环病毒3型(PCV3),对疑似PCV感染死亡的仔猪病料进行PCR检测,将检测呈PCV3阳性的样品利用PK-15细胞进行病毒分离,同时利用原核表达的Cap蛋白制备多克隆抗体,通过IFA、免疫电镜和序列测定分析对分离株进行鉴定。结果显示,分离获得1株PCV3流行毒株,IFA检测有特异性荧光;电镜下可见圆形、直径约为20 nm的病毒粒子;与PCV1、PCV2的同源性分别为22.2%、22.1%,属于3a亚型,将其命名为LJ0603株。LJ0603株繁殖至第72小时病毒含量最高,且能稳定传代至第13代。PCV3 LJ0603株的获得为其结构功能和致病机制及免疫预防等研究奠定了基础。     

猪细小病毒、猪圆环病毒2型和伪狂犬病病毒多重PCR检测方法的建立

根据GenBank中登录的猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和伪狂犬病病毒(PRV)核苷酸序列,分别设计并合成了3对特异性扩增PPV、PCV2和PRV的引物,扩增片段长度分别为531、466和277bp。经过优化条件,建立了检测PPV、PCV2和PRV的多重PCR方法。采用该PCR方法对23份自然感染病猪样品进行检测,结果表明,该多重PCR检测结果与单一PCR检测结果的符合率为100%,同时对临床样品中PPV、PCV2和PRV阳性PCR产物进行测序分析,发现PPV、PCV2和PRV的PCR产物序列与GenBank中公布序列的同源性均达98%以上,证实该多重PCR检测的阳性结果为上述3种病毒。表明,建立的多重PCR方法可用于这3种病毒的临床诊断和流行病学调查。     

大鼠脑缺血和再灌注时海马的超微结构变化

大鼠单次缺血时,神经细胞变化轻微,但CA1区比CA3区变化明显,CA3区神经细胞核膜轻度凹陷,核内染色质聚集成块状分布,核仁形状正常,核周围基质疏松.缺血后再灌注组神经细胞变化较明显,其中CA3区神经细胞膜电子密度增高,核膜损伤,异染色质边集,CA1区神经细胞膜电子密度增高,异染色质边集,核周缩,核内及核周基质液化,线粒体肿胀,嵴疏松断裂,甚至空泡样变,粗面内质网扩张、脱颗粒.     

中国—东盟建立对话关系20周年与中老关系

一、中国—东盟对话关系的成果中国—东盟对话关系可追述到1991年。1991年7月中国外交部长钱其琛作为马来西亚政府邀请的客人出席在吉隆坡举办的第二十四届东盟外长会议开幕式,中国对发展与东盟的互利合作关系表示出浓厚的兴趣。随着中国—东盟领导人会议于2003年10月在印度尼西亚巴厘岛举行并发表了     

世贸组织存在的问题及其发展前景

1 999年 1 2月 3日 ,举世瞩目的 WTO第三届部长级会议在美国西雅图无果而终 ,WTO因此遭到了成立 5年以来的最大挫折。“千年回合”受阻的直接原因是成员方在农业、反倾销、劳工标准和环保政策等议题上的巨大分歧 ,而分歧背后所反映出的问题更是发人深思。目前 ,WTO正面临着如何协调成员国之间利益关系的挑战 ,其宗旨的实现也有待于成员国各方的努力与呵护。     

Sovereignty as Responsibility

This article examines the development of a new normative principle of international order, sovereignty as responsibility; its communitarian implications; and the ways in which the newly conceived responsibility of the “international community” to protect the people of states failing to live up to their responsibilities as defined by international norms can come to terms with the notion of democratic self-government.     

Business as Usual

In the years since 9/11, there is no doubt that the emphasis of U.S. global strategy has been on counter-terrorism and the war in Iraq. During this period of time, the U.S. investment in strategic, political and military resources in the Middle East, Iraq, and the war on terror, which are the top priorities on the list of Bush＇s foreign policy, has been far greater than in any other fields. However, there are some in the U.S. who believe that China＇s rise has been much ignored by the U.S., due to the global war on terror （GWOT）, and that America should, in fact, be focusing more on China, not the Middle East. However, as we see it, China has by no means been ignored by the U.S., neither has China＇s rise been the result of U.S. ignorance.     

Terrorism as a strategy of insurgency

This essay describes terrorism as a mode of warfare and examines its unique characteristics, by comparing this method of struggle to other forms of violent conflict. It further emphasizes the role of terrorism as a strategy of insurgence and delineates the main strategic ideas by which terrorists have hoped to achieve their political objectives. The study evaluates terrorists’ success in obtaining political goals and the conditions which affect their ability to materialize their objectives.

The author concludes that the mode of struggle adopted by insurgents is dictated by circumstances rather than by choice, and that whenever possible, insurgents use concurrently a variety of strategies of struggle. Terrorism, which is the easiest form of insurgency, is practically always one of these modes.     

ESP as a means of communication

SUMMARY

Although the obstacles to communication and cooperation between the widely divergent groups in South Africa is formidable, there is a genuine desire to live together peacefully in our common fatherland.

Intercultural contact in the South African labour situation is a very complex phenomenon but is important because this is virtually the only area of South African society in which Black and White in particular, come into close contact with one another.

Typical intercultural problem areas in the organisation are: cultural differences, differing circumstances of life, system defects and grievances, high potential for conflict, and other communication stumbling blocks.

The essential conditions for intercultural communication are availability, willingness and purpose, to which the following aspects can be added: continuing communication; creation of common ground; adoption of the right attitude and creation of trust; visualisation of a common purpose; knowledge of the other, knowledge of the other's language; training; use of the right communication channels; knowing how to deal with trade unions, work committees, etc.; good supervision; consideration of unique needs and expectations; and other hints, most of which have basically to do with sensitivity and just good manners.

South Africans have to cope with unique challenges and therefore will have to envisage and develop an indigenous South African organisational style in which the best both cultures have to offer, are accommodated.