PCR-RFLP法检验混合斑中精斑ABO血型及基因型

运用PCR-RFLP检验方法,对21份精斑样品、5份混合斑检材进行了检验,结果表明该方法能够很好地检测混合斑中精斑的ABO血型及基因型,有效地解决了非分泌型精斑的ABO血型及基因型,拓宽了混合斑中精斑的检验范围.     

混合斑中精斑ABO血型的检验

<正> 1988年,壹岐裕志等报告了用吸附抗α_2-SGP 血清的硝化纤维素膜(NCF)检验混合斑中的精斑 ABO 血型,但耗时。本文作者通过对此方法的改进,采用常彩琴等研制的抗人精特异蛋白血清(anti-human seminalpeculiar protein,ASPP),采用蛋清粘片热解离法检验混合斑中精斑 ABO 血型,耗时短,效果好。现介绍如下。     

混合液（斑）中精液（斑）ABO血型的分离检验

混合液(斑)尤其是精斑与阴道分泌液斑混合斑中精斑ABO血型的检验,迄今为止,仍是法医物证学界的研究难题.本文根据收集到的文献,从方法学上综述国内外这一方面的研究现状.     

人精子ABO血型抗原的免疫金银染色研究

<正> 在法医物证检验中,直接检测单个精子的血型抗原,是判定混合斑中精斑血型的重要手段之一。本实验应用先进的免疫金银染色技术(Immunogold-Silver Stainning,IG SS)来检测人精子ABO血型抗原。     

型特异性沉淀素血清检验人唾液斑精斑ABO血型的研究与应用

本文介绍了利用型特异性沉淀素血清环状沉淀法检验人唾液斑、精液斑ABO血型的方法与实验结果,并与中和试验及解离试验进行了比较。实验结果表明,本法操作简便,对多种干扰条件下的唾液斑、精斑均具有高度的型特异性,并能从分泌液与血液的混合斑中准确地鉴别出分泌液的血型。本法仅需0.4cm的分泌斑纱线即可进行血型鉴定,其灵敏度高于中和试验而略低于热解离试验,并能有效地检出陈旧分泌液斑中的型物质,因此适于在实际检案中应用。     

精液和阴道液混合斑中异常B型物质的检验

精液和阴道分泌液混合斑ABO血型的检验多采用中和法与热解离法同时检验，通过两种方法互相印证，有利于正确判定混合斑中的精斑血型。在检验O型或A型阴道分泌液与A型精液的混合斑时，偶而出现异常的B型物质，这一现象在国外已有报道[1、2]。本人在检案中见到三例，现将检验情况报道如下：材料与方法一、混合斑检林本室1984～1993年检验的已确证血型为O型或A型精液和阴道分泌液混合斑擦拭纱布43例。其中O型女子与A型男子的混合斑13例，A型女子与A型男子的混合斑15例，A型女子与O型男子的混合斑9例，O型女子与O型男子的混合斑6例。二、…     

用ASPP为第-抗体酶联免疫斑点法对混合斑分离检验的体会

在法医物证检案工作中,经常会遇到精斑ABO血型的测定,一般可用中和法进行分型。但当精斑混合有阴道分泌液时,如仍用中和法,则结果往往会出现误差,与案件真实情况不相符。笔者经过一段时间的摸索和实践,感到采取ASPP为第一抗体酶联免疫斑点法,运用酶标单克隆抗体检测混合斑中精斑A、B、H血型物质,可取得较为满意的结果,能够为案件的侦破指明正确的方向,提供正确的依据。从1991年11月起至今,我们用ASPP为第一抗体酶联免疫斑点法检案百余起,均取得较好效果,现将实验方法和所遇典型案例具体介绍如下:     

应用血膜热解离法检测体液斑ABO血型

血膜热解离法检验体液斑中的ABO型物质，具有操作简单、检验时间短、灵敏、特异性高等优点，而且与中和法相比具有节省检材的特点，在实际检验中取得了较好的效果。材料和方法一、实验材料1.已知血型的人唾液斑、精斑、阴道分泌物斑纱布各1（）份（从医院提取）；2抗A、抗B血清（淮北市公安局血清室提供）；3‘）型血痕纱布（采耳血涂在白绷带纱布上，室温保存，最长为1年）。二、实验方法（一）血膜热解离法检测体液斑ABt）血型l取ZCC长唾液斑、精斑、阴道分泌物斑纱线加入本理盐水3滴浸泡半小时或充分搅拌，取二满分别满于载被片两侧…     

wizard clean up在混合斑DNA检验中的应用

目的建立一种快速、简单、有效的混合斑DNA检验方法。方法在100例检案中,利用wizardcleanup直接对精子消化液进行纯化浓缩。采用profilerplus试剂盒进行复合扩增,产物经ABI310基因分析仪检测。结果从混合斑中成功获得精斑10个STR位点的DNA分型。结论wizardcleanup处理混合斑,能有效去除女性成份,得到精斑DNA进行分型。     

混合斑中女性物质的PCR检验1例

１９９８年９月２７日,海阳大闫家镇村民某某将一１３岁小女孩骗至家中强奸。技术人员在现场提取了一团可疑的卫生纸,其上检出精斑。但犯罪嫌疑人拒不交代罪行,对于现场附有精斑的卫生纸,犯罪嫌疑人称是其与妻子发生性行为时所用。经常规ABO血型检验,受害人和犯罪嫌疑人妻子的血型均为“A”型;犯罪嫌疑人为“O”型,卫生纸上检出精斑且含“A”型物质。利用二步消化法分别将混合斑中的女性物质与精子DNA提取出来,进一步做DNA检验,经HUMTH０１犤AATG犦n、HUMFABP犤AAT犦n、pMCT１１８、apoB位点扩增、电泳、银染,结果…     

一种改良酸性磷酸酶试验鉴定精斑的方法

本文报道了一种改良的酸性磷酸酶试验方法。用该法鉴定精斑，可克服非特异性反应，排除其它体液和植物汁液的影响。     

mRNA荧光复合扩增系统鉴别正常和异常精液初探

目的构建mRNA荧光复合扩增体系,实现对不同种类精液(尤其是无精症精液)的区分鉴别。方法收集正常、少精症及无精症的精液样本,制备精斑样本后提取细胞总RNA,利用逆转录PCR技术扩增2个精子特异mRNA标记(PRM1、PRM2)、2个精浆特异mRNA标记(TGM4、SEMG1)和2个管家基因mRNA标记(TEF、UCE)。结果正常精液样本可检测到全部精液mRNA标记表达;少精症精液样本虽然可检测到全部mRNA标记表达,但精子特异mRNA标记表达量较低;无精症精液样本不能检测到精子mRNA标记,只能检测到精浆特异mRNA标记。结论利用mRNA荧光复合扩增系统可以实现对正常和无精症精液的区分,而正常精液和少精症精液相比差异无统计学意义。     

应用抗人精液单克隆抗体检验混合斑中精液成份的ABH血型物质

用本文报道的方法检测了123份混合斑检材（新鲜混合斑60份，陈旧混合斑63份），对保存在一年内的混合斑中精液成份中的血型物质检出率可达100％。     

人精浆SDS-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳谱型研究

本文采用SDS-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳(SDS-PAGGE)研究了102例中国正常男子精浆蛋白的电泳谱型,得到了具有精液特征性的,可与人阴道液、唾液、初乳及血清进行鉴别的人精浆蛋白电泳谱型,并可作为精斑的确证。另发现一种-83kd 变异型。频率为8. 82±2. 81%。提高了精斑的个人识别机率,在实际应用中取得了初步成效。     

染色混合精斑涂片DNA检验方法的研究

建立了染色混合精斑涂片DNA的提取方法,通过两步扩增的技术与垂直聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染色法,成功检测了3个STR位点.结果显示,所有染色涂片DNA分型均与对照血样一致,苏木素-伊红(HE)染色比酸性复红-美蓝(Baecchi)染色对DNA的降解作用要小;涂片灵敏度检验可达到少于10个精子,且室温保存一年以内的涂片其灵敏度光显著差异.该方法简单、快速、可靠,为染色混合精斑涂片的PCR分析提供了新方法.     

检验人精浆特异蛋白P30免疫胶体金试剂条的研制

目的制备用于检验人精浆特异蛋白P30-主要是来自法医学案件的免疫胶体金层析试剂条.方法选取针对不同抗原决定簇的抗P30单克隆抗体细胞株,并制备其小鼠腹水,分离纯化单克隆抗体.制备胶体金并以纯化抗体包被,制成免疫胶体金,以免疫胶体金浸泡玻璃纤维.选取适宜的硝酸纤维素膜并于其上不同位置以未金标的另一株P30单克隆抗体和羊抗鼠IgG包被.搭建试剂条并检测其灵敏度和特异性.结果所制成的试剂条灵敏度至少可达4ng/ml;对6人份混合的人精液物质在稀释20万倍后仍出阳性结果,且无非特异性反应.结论检验人精浆特异蛋白P30的免疫胶体金试剂条可对嫌疑人精物质做出排查,有利于法医物证检验.     

用酶免疫斑点法快速检测精浆特异蛋白P_(30)鉴定人精斑

作者用自制的辣根过氧化物酶标记的抗精浆特异蛋白P_(30) 单克隆抗体,建立了简便快速检测精斑中P_(30) 鉴定人精斑的斑点法。通过颜色变化判定结果,阳性为紫蓝色斑点,阴性为无色。结果表明,仅人类精斑和前列腺浸液出现阳性斑点,人体其他体液及组织器官浸液均为阴性。对动物血、精斑也无交叉反应。标定精斑稀释到1600倍亦可得到阳性结果。     

GC/MS衍生化测定精浆中游离支链氨基酸和果糖

目的 建立人精浆中支链氨基酸和果糖的气相质谱衍生化分析方法.方法 精液样本液化离心后,按精子活率的临床标准分为正常组和非正常组,经TMS微波衍生化,GC/MS分析两组支链氨基酸、果糖衍生物含量差异.结果 正常组与非正常组的缬氨酸,亮氨酸,异亮氨酸在相对含量上均有一定差异.正常组3种氨基酸相对含量高于非正常组.果糖分析观察到同样的特征,正常组相对含量高于非正常组.结论 精子活率低的精浆样本仍可检出支链氨基酸和果糖,其差异有助于无精子、少精子精斑的法医学鉴别.