胎儿亲子鉴定中21-三体综合征1例

<正>1案例资料1.1简要案情2012年本单位受理1起亲子鉴定案,征得当事人同意,采集母亲(孕5月余)、嫌疑生父的口腔拭子及羊水(胎儿样本),进行STR分型实验。1.2 DNA检验Chelex-100法提取上述样本DNA。采用AmpFlSTR Identifiler PCR Amplification试剂盒(ABI     

DNA检验结合临床检查确定男性假两性畸形1例

1案例资料1.1简要案情2012年12月11日,林某（女,42岁）因涉嫌拐卖儿童罪被刑拘,采集血样（编号：3507021202093）作为前科人员建库样本送DNA实验室检验。1.2 DNA分型检验样本采用Identifiler Direct和PowerPlex 21试剂盒进行检验,扩增产物用ABI 3130XL型DNA序列分析仪电泳,GeneMapperID v3.2软件进行结果分析。     

DNA数据库建设中批量样本直接扩增检验法的应用

目的研究批量样本直接扩增法在DNA数据库建设中的应用。方法打孔机打取血滤纸600份,剪取芝麻大小的口腔拭子300份,放入96孔扩增板,加入扩增试剂后直接扩增,并对其中200份血滤纸用磁珠法,100份口腔拭子用96孔板Chelex-100法,经DNA提取后扩增检验进行比较。结果血滤纸采用直接扩增法及磁珠法STR检测成功率均为100%;口腔拭子采用直接扩增法的成功率为95%,采用96孔板Chelex-100法的成功率为94%。结论血滤纸和口腔拭子通过直接扩增均能获得很好的DNA分型结果,该方法省时省力,可用于DNA数据库建设。     

阴茎拭子DNA检出女性成分1例

正1案例资料1.1简要案情刘某,女,已婚。2014年某日在一工地宿舍被欧某强奸,后即刻报案。提取了刘某阴道拭子、欧某阴茎拭子及两人的口腔拭子进行DNA检验。1.2 DNA检验刘某的阴道拭子经抗人精金标检测试剂条检测为阳性,剪取适量放入1.5m L Eppendorf中,加入800μL TNE,80μL 10%SDS,10μL 1%PK,37℃消化过     

24个基因座复合扩增系统的应用

目的建立24个基因座的复合扩增系统,并对其性能指标进行评价。方法选择24个基因座（包含D8S1179、D5S818、D2S1338、D18S51、D6S1043、D2S441、D3S1358、vWA、D19S433、D16S539、CSF1PO、Penta D、D22S1045、D13S317、D1S1656、D7S820、TPOX、Penta E、D10S1248、TH01、D12S391、D21S11、FGA等23个STR基因座及1个Amelogenin基因座）;合成引物,上游端标记荧光染料;收集DNA数据库建库血痕及口腔拭子样本及相关11种动物样本,采用本文方法进行复合扩增;并对方法的准确性、灵敏度、稳定性、种属特异性、检材适用性、混合样本的检验等系统性能指标进行验证。结果本文复合扩增系统对最长保存9年的各种血痕检材完整分型成功率为100%,且均衡性良好,无非特异性扩增,口腔拭子的成功率为97.8%,灵敏度达125pg,对含有抑制剂样本,在血红素浓度≤600μmol/L,腐殖酸浓度≤50ng/μL时检出效果稳定,种属特异性好。结论本文24个基因座复合扩增系统在DNA数据库建设中具有较好的应用价值。     

口腔拭子DNA检验的实时定量研究

目的寻求提高口腔拭子的DNA检验效率的方法。方法对来源于不同个体或同一个体不同擦拭次数的口腔拭子用Chelex-100或磁珠法提取的DNA用实时定量PCR技术进行定量,同时用Identifiler复合扩增系统在ABI3100遗传分析仪上对这些DNA样品进行STR分型。结果在建立的Identifiler系统8μl扩增体系中,3个月内的口腔拭子用Chelex-100法提取的DNA模板1μl量较3μl量扩增效果好,磁珠法提取的DNA模板用量大小对复合扩增检测影响较小。结论用棉签擦拭颊粘膜5次制备口腔拭子,取其头部的约1/4用200μlChelex-100法提取DNA,然后用1μl模板进行复合扩增,是提高口腔拭子的DNA检验效率的简便可行的方法,但陈旧口腔拭子用磁珠法提取更能保证复合扩增分型成功。     

PowerPlex(R) 16 HS系统直接扩增法检测常见检材的DNA

目的研究PowerPlex 16 HS系统直接扩增法对血样、口腔拭子和烟蒂3种常见检材的有效性。方法采用PowerPlex 16 HS系统对11份新鲜血样、10份口腔拭子和10份烟蒂样本进行直接扩增检测,对所得数据进行统计分析。结果新鲜血样和口腔拭子的完整遗传图谱检测成功率为100%,烟蒂样本的完整遗传图谱检测成功率为90%。结论 PowerPlex 16 HS系统直接扩增法是一种适用于血样、口腔拭子和烟蒂3种常见检材的有效方法。     

单细胞检验技术用于混合上皮细胞的分离和检验

目的建立单细胞显微捕获联合低体积扩增技术,用于混合上皮细胞检材分离检验。方法取5名男性口腔上皮细胞拭子浸泡液30μL,分别滴加到5份含同一女性皮肤表皮细胞拭子上,制成5份混合上皮细胞样本为实验组,同时制备同样的5份样本为对照组。实验组样本采用显微捕获单个口腔上皮细胞,并使用低体积扩增技术进行扩增;对照组用M48纯化试剂盒提取DNA,Identifiler试剂盒复合扩增,扩增体系为10μL。所有产物均用ABI 3130遗传分析仪进行STR分型。结果 5份实验组样本均得到男性STR分型结果,5份对照组样本则均仅得到混合分型结果。将该方法应用于1例强奸杀人案例检验,取得了满意效果。结论单细胞显微捕获联合低体积扩增技术可用于混合上皮细胞样本的分离检验。     

江苏地区汉族人群15个STR基因座遗传多态性

<正>本文采用Identifiler荧光标记复合扩增系统,对江苏地区583名汉族无关个体15个STR基因座遗传多态性进行调查,为相关人群法医学个人识别和亲权鉴定提供基础数据。1材料与方法1.1样本583份无血缘关系汉族个体口腔FTA卡样本(男495份,女88份),均为本实验室DNA数据库和日常检案积累。1.2 DNA分型检验采用Chelex法[1]提取样本模板DNA;采用     

用拭子提取脱落细胞进行DNA检验

<正>随着DNA数据库的建立，法医DNA检验在刑侦破案中正发挥着越来越重要的作用。采用口腔拭子提取口腔脱落细胞进行DNA检验，取材简便又无创伤，成本低。国外不少实验室用该法提取有犯罪前科     

环氧乙烷消杀DNA污染效果初探

目的初探环氧乙烷消杀DNA污染的效果。方法收集98例分别含有唾液、皮屑、汗斑、毛发、血斑、肋软骨的法医物证样本,分两组进行环氧乙烷灭菌6h和8h,提取DNA后扩增,使用3130XL或3500XL测序仪检测进行STR分型。结果 EO 6h组44例样本中有2例口腔拭子检出阳性结果,EO 8h组54例样本中有1例毛发检出阳性结果,阳性样本STR图谱表明仅有少量DNA残留,其余生物样本未检测到STR图谱。结论环氧乙烷能有效消杀DNA污染,可适用于DNA检验耗材的灭菌。     

亲权鉴定中嵌合体STR基因分型1例

正1案例1.1简要案情因落户需要,某男委托本中心对其与孩子是否有亲缘关系进行鉴定,用FTA卡采集孩子、某男(疑父,以下简称"被检父")、母亲(生母)的末梢血各1份,同时采集孩子带有毛囊的毛发、口腔拭子各1份。1.2 DNA分型检验上述5份检材用Chelex-100法提取DNA~([1]),使用     

MiSeq FGx~(TM)系统进行基因突变亲权鉴定1例

<正>1材料与方法1.1 DNA提取及定量样本来源于本实验室日常案件中经ID-PLUS检测存在STR遗传位点突变的三联体的FTA唾液口腔卡,并使用Qiagen DNA Investigator试剂盒(Qiagen公司)提取样本DNA。样本DNA采用Qubit?3.0荧光定量仪(Life Technologies公司)进行DNA浓度检测,并将浓度稀释到0.2ng/μL[1]。     

Y染色体DNA分型异常2例

正1案例资料1.1简要案情2012年8月,无锡市公安局在对前科人员建库过程中,发现2例样本的采集信息(均显示男性)与检测所得到的结果(均显示女性)不相符合,需进行复核。1.2 DNA复合扩增常染色体检验采用AGCU 17+1试剂盒、AmpFLSTR Identifiler试剂盒,操作步骤按试剂盒说明书进行。性染色体检验SRY引物:上游:5'-ROXCTGCTATGTTAAGCGTATTCAA-3';下游:5'-GATC TGCGGGAAGCAAACT-3';扩增片段长度为429bp。反应总体系为10μL,内含Reaction Mix 4.0μL,Primer SRY 0.5μL,热启动C-Taq酶(5U/μL)0.2μL。扩增     

建立法医DNA数据库的初步探讨

<正> 本研究在国外成功建库的基础上,经几年的摸索,逐渐形成了一套建立DNA数据库的思路,并初步建立了北京地区法医DNA数据库,与同仁探讨。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 样本 取自本中心1998年至今受理的未破案件现场遗留物中与被害人STR分型结果不同的样本     

应用HID Ion GeneStudioTM S5测序系统探讨毛干样本线粒体DNA异质性

目的应用HID Ion GeneStudio^TM S5测序系统对毛干样本线粒体全基因组分型结果的异质性进行探讨。方法采集8名无关个体的口腔拭子、血液及同一个体不同部位毛干样本,使用Precision ID mtDNA Whole Genome Panel对线粒体全基因组进行扩增,应用HID Ion GeneStudio^TM S5测序系统对线粒体全基因组进行分析检测。结果2名个体的颞部毛干样本线粒体DNA出现异质性,其余6名无关个体的口腔拭子、血液及不同部位毛干样本的线粒体全基因组分型结果均一致。8名无关个体共观察到119个碱基变异,个体的变异位点数目分别为29、40、38、35、13、36、40和35。结论应用HID Ion GeneStudio^TM S5测序系统可全面了解序列多态性。     

D18S51基因座等位基因侧翼序列四碱基缺失3例

3例无关人员口腔拭子经DNA提取后采用AGCU EX20、AGCU EX30、VeriFiler Plus和PowerPlex^?21四种试剂盒检测，同一样本在D18S51基因座获得了相差1个重复单元的两种等位基因分型。本文利用Sanger测序法分别对上述3例人员样本的D18S51基因座及上下游区域进行检测。经序列比对，发现3个样本的基因组中D18S51基因座下游chr18:63281892-63281895位置均存在[GTTT]的四碱基缺失。建议针对D18S51基因座设计引物时，应选择在上述碱基缺失位置上游区域进行。     

RapidHIT~(TM) 200系统在法医学中的应用

目的验证Rapid HIT~(TM )200系统对四类法医学常见检材的检测效能,以及两次重复检测运行中模板、模板DNA和PCR产物的再利用效能。方法将口腔拭子经Rapid HIT~(TM )200系统先后进行两次检验,并针对系统中产生的模板DNA和PCR产物进行首次、再次检测。将四类法医学常见检材经Rapid HIT~(TM)200系统检测,并针对系统运行中产生的模板、模板DNA和PCR产物进行后续检测。结果口腔拭子经该系统首次运行后STR基因座可以完全检出,再次检测过程中部分STR基因座有丢失,再次检测峰值较首次明显降低;模板DNA和PCR产物再次检测的平均STR基因座检出率均小于50%,明显低于首次检测结果。该系统对组织与口腔拭子的检测效能优于血拭子和烟蒂,首次运行后的相应检材、模板DNA、PCR产物延续后续实验流程所获得的STR基因座检出率呈递减趋势。结论Rapid HIT~(TM )200系统对口腔拭子再检测效果好,但经该系统首次运行后的检材、模板DNA、PCR产物以及经该系统再次运行后的模板DNA与PCR产物不应直接用于法医学后续应用及研究。     

香港特别行政区的DNA数据库

香港特区的DNA数据库成立于2001年,法例上此数据库直属于香港警务处长,由香港政府化验师代行管理及维护。被定罪人士其罪行最高刑期为监禁7年或以上及任何罪案之疑犯均可被套取其口腔拭子样本,利用美国App lied B iosystem s的试剂进行DNA分型测试。所确立之DNA图谱将上载到由美国FB I(联邦调查局)在2000年免费为香港政府化验所提供的,名为COD IS(Comb ined DNA Index System)的计算机系统;在罪案现场所收集到的不明来历的DNA数据样本亦会被上载到COD IS。被定罪人士及疑犯的DNA图谱会定期与罪案现场的DNA数据在CO-D IS内进行较对以便协助警方调查。本文介绍香港DNA数据库的操作,其中包括统计数据的讨论。     

锡纸表面接触性DNA检验方法比较

目的研究不同检验方法对锡纸表面接触性DNA分型结果的影响。方法1名志愿者洗手后分别触捏锡纸条10s,每次实验30份样本均为当天分两次制作完成。分别采取植绒拭子擦拭转移直扩法、植绒拭子擦拭转移M48磁珠法、锡纸实物整体浸入M48磁珠法进行实验。结果30个样本采用植绒拭子擦拭转移直扩法全部获得完整STR分型,且不受表面粘附灰尘抑制物影响;30个样本采用植绒拭子擦拭转移M48磁珠法提取纯化,5个样本存在不同程度等位基因缺失;30个样本采用实物整体浸入M48磁珠法提取纯化,均未获得STR分型。结论采取植绒拭子擦拭转移直扩法检验结果最好,且操作方便,可作为首选;植绒拭子擦拭转移M48磁珠法效果仅次于直扩法,可视情况选用;但实物整体浸入M48磁珠法提取纯化效果最差,不可采用。