应用电镜技术快速诊断动物病毒病

应用电镜技术快速诊断动物病毒病李成（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所１５０００１）电镜技术对诊断形态特征性强的动物病毒（如正粘和副粘病毒、正痘和副痘病毒、疱疹病毒、轮状病毒、弹状病毒、冠状病毒及腺病毒等）感染引起的动物病毒病，既快速又准确。尤其对混合感...     

应用电镜技术对猪瘟病毒的观察

应用电子显微镜技术早期观察猪瘟病毒,由于该病毒不能在体外增殖而受到了限制,另一方面,由于感染猪本身的组织和血清被其它病原体污染也妨碍了研究,Reagan和他的同事们在感染猪血清中发现病毒粒子为22～30nm(平均为27nm),Ageev在感染该病毒猪红细胞表面上和血清中检出直径为20～44nm球形粒子,经组织培养分离猪瘟病毒的早期报告为20～80nm,但以后对生长在组织培养物上的纯化了的猪瘟病毒报告是球形的,直径为37～67nm,并带有囊膜粒子,偶尔在病毒囊膜上石到呈不规则排列的纤突。     

免疫电镜技术在动物病毒感染诊断中的应用

光学显微镜的出现为人类打开了微观世界的大门 ,但由于受到光波波长的限制 ,其最高分辨率只能接近于 2 0 0 0ｎｍ。电子显微镜是以电子束作为光源 ,电子波长是可见波长的 10万分之一左右 ,分辨率极高。自从 1932年第一台电子显微镜在德国诞生以来 ,其分辨率已达到 1.5～ 2 .0ｎｍ ,为生命科学研究提供了一个更加有用的工具。随着电子显微镜性能的不断提高 ,生物超微结构的研究从单纯形态描述进入了成分分析 ,从静态描述进入了动态观察 ,从二维平面进入了三维立体图形的观察与重组。同时 ,免疫学技术也得到了突飞猛进的发展 ,电镜技术与免疫…     

应用离子交换捕捉电镜技术观察动物类冠病毒

(一)材料和方法 1.样品处理:把采自腹泻牛、猪及貉子的粪便,制成10～20％悬液,低速离心,将其上清液直接滴附在碳-福尔马(Formvar)膜或取其上清液1ml,加4滴磷酸氢钙饱和液吸附,低速离心,弃上清,取沉淀,加1μl乙二胺四乙酸二钠(EDTA)饱和液,使磷酸氢钙溶解,将其溶解液滴附在碳-福尔马膜上,用2％磷钨酸(PTA)负染,电镜观察。     

应用胶体金标记免疫电镜技术观察牛白血病病毒

(一) 材料和方法 1. 材料:从国外引进的牛白血病病毒(BLV)感染的羊胎肾细胞(FLK)的初期培养物,羊抗牛BLV血清,兔抗羊IgG(以上原材料均由本所BL研究室惠赠);胶体金由本试验室制备。 2. 5nm粒径胶体金的制备:用鞣酸一枸橼酸三钠还原法制取。所得A液与B液的混合溶液呈亮红色。 3. 胶体金抗体(抗体包被胶体金)的制备:将胶体金的pH值用0.1M K_2CO_3液调到9.0,然后找出胶体金和第二抗体(兔抗羊IgG)最适结合比例,即用50μl(第二抗体含量     

动物病毒的蚀斑技术

由于动物病毒极小(直径在十几毫微米至几百毫微米之间),又不能像细菌那样在无活细胞的固体基质中生长,所以在五十年代以前,当谈及某一体积内病毒的多寡时,多是以“感染力”、“存活时间”这样一些统计单位为衡量尺度。总觉得无实体感。当讨论病毒的生物学特性时,总是以“一堆”病毒为对象,很难设想把这个复杂的群体中具不同生物学特性的颗粒分离开,进行分别地研究和使用。自1952年Dulbecco氏将噬菌体的蚀斑技术(1939)     

我国动物肿瘤病的检出情况

随着我国国民经济的发展,人民生活水平的提高,各种动物性食品在人们膳食中不断增加,因此,肉用动物的健康况状直接关系到人们的食肉安全,动物肿瘤病就是一个重要方面,特别是某些动物肿瘤病与人的同类肿瘤在地理分布、发生等方面有着密切关系。近年来,我国畜牧兽医工作者对动物肿瘤病的流行病学、病理学、早期诊断和治疗、肿瘤的复制遗传学特性及各种环境因素与肿瘤发生的关系等进行了广泛地调查研究,取得了可喜的成     

酶标免疫电镜技术在牛白血病病毒形态学研究中的应用

迄今,国内外对于牛白血病病毒的酶标免疫电镜观察尚无报道。我们首先将该项技术应用到对牛白血病病毒的形态学研究上,从而进一步明确了此病毒在宿主细胞内的分布、抗原定位以及该病毒粒子的形态特征。 (一)材料 1.牛白血病病毒感染的羊胎肺细胞(FLL)初期培养物;2.羊抗牛白血病病毒血清。以上两种原材料均由牛白血病防制课题组提供。3.健康羊胎肺细胞培养物,由魏仁山先生提供。4.冻干酶联葡萄球菌A蛋白纯品,由上海生物制品研究所购入。     

电镜样品的快速包埋方法

我们认为目前所采用的超薄切片样品制备仍不够完美,如生物材料制备的整个工序竟长达3～4天,有的甚至需1周,太费时间,因而对科研急用材料的处理远不能满足要求。为了更好地为科研和生产服务,用国产环氧树脂和进口Epon 812等研制出了适用于口岸动物检疫和临床快速诊断病毒的快速包埋方法,操作过程如下:     

动物病毒病的免疫电镜诊断方法

应用电子显微镜(电镜)技术进行病毒病的诊断,是当今病毒学诊断方法中不可缺少的手段,仅管起用时间不长,但是随着电镜制样方法的改进,尤其免疫电镜技术的应用,已越来越引起人们的注意。由于病毒体积很小,超过了光学显微镜分辨率的极限范围,所以要想直接观察到病毒粒子,只有借助于高     

几种动物病毒的基因芯片检测技术

分别用水疱性口炎病毒、蓝舌病病毒、口蹄疫病毒、猪瘟病毒、牛病毒性腹泻病毒、鹿流行性出血热病毒和赤羽病病毒各一段高度保守的基因片段构建质粒 ,在此基础上制备了芯片探针。提取样品中的核酸 ,经反转录和荧光标记后滴加到芯片上进行特异性杂交 ,对杂交结果扫描检测 ,可同时对上述 7种动物传染病进行快速、准确的诊断 ,此方法敏感性高 ,特异性强 ,适合于大批动物高通量检疫。     

应用SPA-固相免疫电镜法检测口疮病毒

我们在进行骆驼传染性口疮病原分离鉴定研究中,采用SPA—固相免疫电镜法检测口疮病毒,获得较好效果。 (一)材料和方法 1.抗原 (1)骆驼传染性口疮病毒:取自人工感染发病驼痂块,按常规方法作1:10(W/V)稀释,—20℃冻结保存,使用前水浴融化,4000rpm离心30分钟,取上清备用。     

动物病毒的消毒

病毒对各种消毒药的抵抗力差异很大,同属病毒之间的差异一般小于不同属病毒相互之间的差异。在兽医上有重要性的主要病毒属的毒株都被选来进行本试验。口蹄疫、猪水泡病和鸡新城疫的病毒未选用,因为它们已列入1974年颁布的(已证实有消毒药)的动物疾病条例汇编(The provisions of the Diseases of Animals(Approved Disinfectants)Order,1974 ]中,口蹄疫病毒和猪水泡病病毒对一系列消毒药具有敏感性最近已有报道(Sellers,     

鸡传染性法氏囊病病毒的电镜研究

北京地区鸡传染性法氏囊病病原的电镜鉴定,前已报道(见本刊1982年第2期4～6页)。为了进一步明确我国分离的该病病原形态结构、感染过程等,进而为探索防制本病的方法提供理论基础,特进行本项研究。     

羊口疮病毒形态发生的电镜观察

羊口疮病毒(Orf Virus)是痘病毒科,副痘病毒属的成员。关于痘苗病毒的复制机制目前已经搞清(F.Fenner等1974;A.Nagayyama等1970;D.E.Hruby 1979),可是对于口疮病毒的有关问题还未深入地研究,有几位学者对病羊口唇粘膜、试验动物的皮肤活组织以及病毒感染的细胞培养物作过超薄切片观察,但未能充分说明口疮病毒与细胞互相作用的详细机制,以及子代病毒形态发生的全部过程。我们采用奶山羊睾丸原代细胞(MCTC)     

用蛋白A胶体金免疫电镜技术观察绵羊进行性肺炎病毒

本实验应用蛋白A胶体金免疫电镜技术与IEM、DEM、SPA-SPIEM比较观察了OPP-CMV_(40)-1株和CMV-33AN株。蛋白A胶体金方法所制备的样品在透射电镜下可观察到抗原—抗体复合物形成的抗体桥,在抗体桥上可看到病毒粒子。胶体金通过抗体桥分布在病毒颗粒的周围,胶体金周围还有多量病毒粒子。病毒颗粒呈球形,直径为80～100nm、外有一层囊膜,囊膜上有长约8nm的纤突。     

动物病毒的分子生物学研究进展

动物病毒学是发展极为迅速的学科之一,不仅在有关病毒的基本理论方面,而且在病毒研究的实际应用方面,都有了突飞猛进的发展。 (一)动物病毒基础理论和实验技术的研究 1935年Stanley获得了结晶的烟草花叶病毒,翌年Bawden发现这种病毒存在核糖核酸,这就奠定了病毒分子生物学研究的基础。此后五十多年来,分子病毒学已成为病毒学研究中最为活跃的领域之一,并且取得了巨大进展。     

应用免疫电镜技术观察羊流产衣原体

本实验应用免疫电镜技术(IEM)吸附法、装饰法、吸附和装饰结合法以及沉淀法检测羊流产衣原体,并以直接法做对照。实验结果表明,这4种方法适用于检测羊流产衣原体,处理的样品在电镜下均较直接法处理的样品清晰,对于观察羊流产衣原体的形态以及对本病的诊断都有较高的实用价值。(一)材料和方法1.材料:羊流产衣原体(黄株)鸡胚卵黄囊培养物磨碎稀释经差速离心提纯,制成衣原体悬液。羊衣原体阳性血清批号8806,补体结合效价为1:256。阴性血清。上述材料均由我所羊衣原体研究课题组提供。     

应用反转录 - 聚合酶链技术快速检测猪瘟病毒RNA的研究

依据猪瘟病毒（ＣＳＦＶ）５′端非编码区保守序列设计一对ＰＣＲ引物，建立了检测ＣＳＦＶ的反转录聚合酶链（ＲＴＰＣＲ）技术。应用该技术从猪瘟兔化弱毒感染兔的脾、淋巴结、肾与肌肉等以及石门株强毒感染猪的脾与肌肉和湖北分离毒株感染猪组织匀浆液中均特异扩增出了１条预期大小为１９４ｂｐ的片段，从实验感染兔和猪的血液中也特异扩增出了该片段，但对牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）和健康兔脾总ＲＮＡ以及健康猪的血液ＲＮＡ扩增均为阴性。采用这种方法，对实验感染兔脾总ＲＮＡ的检测灵敏度可达１０－８ｇ，表明其灵敏度足以达到临床检验的要求。     

狂犬病病毒快速荧光抗体技术测定的研究

本试验用自制兔抗狂犬病病毒荧光抗体,检测病毒在BHK_(21)-C_(13)单 层细胞中的增殖,建立了快速荧光抗体技术(RFAT)用于狂犬病病毒TCID_(50)的 测定。用RFAT和小白鼠脑内接种半数感染量(MID_(50))测定法对狂犬病病毒 ERA株毒液32批,冻干种毒两批和Flury-LEP株冻干苗11批进行了平行测定,并对测毒结果进行了统计学分析。病毒滴度平均值(log10):ERA株TCID_(50)/ml为6.16,MID_(50)/0.03ml为4.86;Flury-LEP株T CID_(50)/ml为5.85,MID_(50)/0.03ml为4.74。ERA株TCID_(50)和MID_(50)相关系数为0.826,Flury-LEP株为0.754。结果表明在可靠性和可重复性方面RFAT至少同MID_(50)测定法相同。但RFAT简便、快速,是替代MID_(50)测定法进行病毒测定的理想方法。